Средство, нормализующее прооксидантно-антиоксидантный баланс и функциональное состояние печени при ишемии-реперфузии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОИ СОБСТВЕННОСТИСОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ ПРИ ИШЕМИИ-РЕПЕРФУЗИИ(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет (ВУ)(56) МАШКОВСКИИ М.Д. Лекарственные средства. Ч. 1. - М. Медицина, 1978. С. 379-380. и ХОДОСОВСКИИ М.Н. Теоретические и практические вопросы Медицины и фармации. Материалы конференции. Витебск, 2000. - С. 32-33.(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет (ВУ)(72) Автор Ходосовский Михаил Николаевич (ВУ)(57) Применение нитроглицерина в качестве средства, нормализующего прооксидантноантиоксидантный баланс и функциональное состояние печени при ишемии-реперфузии.Изобретение относится к области Медицины, а именно к применению лекарственных средств по новому назначению.Синдром ишемии-реперфузии печени часто встречается в клинике при резекциях,трансплантации органа, а также при геморрагическом шоке с последующим возмещением кровопотери 1, 5. Патогенетическими звеньями данного синдрома являются окислительный стресс, воспалительная реакция с иммиграцией лейкоцитов в паренхиму органа, нарушения микроциркуляции, что суммарно приводит к гибели гепатоцитов от некроза или апоптоза 2. Известно, что недостаточная продукция оксида азота (НО) и преобладающие влияния эндотелинов могут нарушать процессы микроциркуляции в печени во время реперфузии 3, 4. Вместе с тем повышенные уровни НО могут оказать цитотоксическое действие на гепатоциты. Необходимость поддержания тонкого баланса между повреждающей и протективной сторонами действия НО требует разработки новых способов коррекции постишемических повреждений печени.Известно применение природных антиоксидантов (ос-токоферол и аскорбиновая кислота) 5, аллопуринола (ингибитора ксантиноксидазы) 6, полиэтиленгликольсупероксиддисмутазы (продолжительно действующей формы данного антиоксидантного фермента) 7 для коррекции свободнорадикальных процессов при синдроме ишемииреперфузии печени.Недостатком большинства известных средств является их малое влияние на процессы микроциркуляции в печени в постишемическом периоде. Нарушение последних может оказывать существенное влияние на тяжесть реперфузионных повреждений печени 3. Окислительный стресс может возникать в сосудах печени 8, а вышеперечисленные сред ВУ 11175 С 1 2008.10.30ства оказывают свое протективное влияние преимущественно на гепатоцить 1. Кроме того,аскорбат при дозе более 100 мг/кг может проявлять прооксидантнь 1 е свойства 9.Задача Изобретения - расширение арсенала средств, нормализующих прооксидантноантиоксидантнь 1 й баланс и функциональное состояние печени при ишемии-реперфузии.Поставленная задача решается применением нитроглицерина в качестве средства, нормализуюшего прооксидантно-антиоксидантнь 1 й баланс и функциональное состояние печени при ишемии-реперфузии.Нитроглицерин - антиоксидантнь 1 й препарат, относится к группе вазодилататоров. При внутривенном введении вызывает быстрое депаонирование крови в периферических венах, уменьшает венозный возврат к сердцу, снижает тонус гладкой мускулатуры артерий, обшее Периферическое сопротивление и артериальное давление, применяется для лечения стенокардии, острого инфаркта миокарда и связанной с ним застойной сердечной недостаточности, а также для контроля артериального давления во время хирургических операций. Однако из известных свойств не вытекает, что можно использовать препарат для нормализации прооксидантно-антиоксидантного баланса и функционального состояния печени при ишемии-реперфузии.Для доказательства возможности использования изобретения мы исследовали влияние нитроглицерина на прооксидантно-антиоксидантное и функциональное состояние печени при ишемии-реперфузии у кроликов. Ишемию печени вызывали наложением сосудистого зажима на а. Ьерайса ргоргйа в течение 30 мин, после снятия зажима реперфузионный период длился 120 мин. Исследовали показатели перекисного окисления липидов (диеновые конъюгаты, основания Шиффа), показатели антиоксидантной системы (ос-токоферол, активность каталазы), а также активность аланин- и аспартатаминотрансфераз в крови. Установлено, что ишемия-реперфузия печени сопровождалась накоплением продуктов ПОЛ и истошением факторов антиоксидантной зашиты, а также ростом активности трансаминаз в крови. Инфузия нитроглицерина перед началом реперфузионного периода способствовала уменьшению содержания продуктов перекисного окисления липидов, улучшению показателей антиоксидантной системы и функционального состояния печени.Работа выполнена на взрослых кроликах-самцах весом 3,5-4,5 кг, предварительно вь 1 держанных в стандартных условиях вивария. Анестезия поддерживалась внутривенной инфузией калипсола (1,5 мг/кг/мин). Ишемию печени вызывали наложением сосудистого зажима на а. Ьерайса ргоргйа в течение 30 мин, реперфузионный период длился 120 мин. Вводили катетеры один - в у. Ьерайса для взятия печеночной венозной крови, а другой - в правое предсердие для получения смешанной венозной крови. Забор образцов крови для оценки продуктов ПОЛ и факторов антиоксидантной системы осушествляли до, в конце ишемии и через 120 мин после ее прекрашения. Ткань печени для оценки показателей прооксидантно-антиоксидантного состояния брали в конце реперфузии. В качестве контроля использовали образцы печени, взятые у животных до ишемии (п 6). Степень повреждения печени оценивали по активности в плазме крови АлАТ и АсАТ по Кейгшап 5. е а 1. (1957).Животных разделили на 2 экспериментальные группы в 1-й моделировали ишемиюреперфузию печени (п 10), во 2-й - на фоне ишемии-реперфузии печени проводили внутривенную инфузию нитроглицерина в дозе 1,5 мкг/кг, которую начинали за 5 мин до начала реперфузионного периода (п 8). Определение суммарного количества нитритов и нитратов (ЫОх) в плазме крови проводили с помошью реактива Грисса. Для восстановления нитратов в нитриты использовали металлический кадмий.Изучали следуюшие показатели прооксидантно-антиоксидантного состояния диеновь 1 е конъюгаты (ДК), основания Шиффа (ОШ), ос-токоферол и активность каталазы. Содержание ДК в биологическом материале определяли методом ультрафиолетовой спектрофотометрии при длине волны 233 нм, типичной для конъюгированных диеновых структур гидроперекисей липидов. Уровень ОШ определяли по интенсивности флюорес 2ценции хлороформного экстракта при длинах волн возбуждения И эмиссии 344 и 440 нм соответственно на спектрофлюориметре 13-4010 фирмы Н 1 гас 111. Содержание ос-токоферола изучали методом флюориметрического определения по интенсивности флюоресценции гексанового экстракта. В качестве стандарта использовался ос-токоферол фирмы Зйша. Каталазная активность в биологическом материале оценивалась спектрофотометрическим методом, основанным на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойко окрашенный комплекс. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием г-критерия Стьюдента.В табл. 1 приведена динамика изменений показателей ПОЛ в крови у кроликов обеих групп.В табл. 2 показано влияние нитроглицерина на ЫОх и функциональное состояние печени при ишемии-реперфузии (Мт).У животных 1-й группы содержание ДК в плазме печеночной венозной крови в конце реперфузии составило по отношению к исходному 267,2 (р 0,05). Уровень ОШ в плазме печеночной венозной крови в конце реперфузионного периода увеличился по отношению к исходному на 69,0 (р 0,05). Установлено, что при введении нитроглицерина в условиях ишемии-реперфузии печени у кроликов (2-я группа) в крови наблюдается менее выраженное увеличение содержания продуктов ПОЛ (ДК, ОШ) (табл. 1). Так, в плазме печеночной венозной крови уровень ДК превышал исходный только в конце реперфузионного периода на 57,6 (р 0,05). Содержание ОШ в плазме печеночной венозной крови было выше исходного только в конце ишемии на 21,4 (р 0,05).При моделировании ишемии-реперфузии печени факторы антиоксидантной зашиты истошались (табл. 1). Так, содержание ос-токоферола на 30-й мин ишемии в плазме печеночной венозной крови составило от исходного уровня 93 (р 0,05). На 120-й мин реперфузии содержание ос-токоферола в плазме смешанной венозной крови уменьшилось до 75,4 (р 0,05) от исходного уровня. Активность каталазы эритроцитов у кроликов 1-й группы на протяжении ишемии-реперфузии печени повышалась. В конце реперфузии активность этого фермента превышала исходную в печеночной венозной крови на 101,1(р 0,05). В отличие от животных 1-й группы, у кроликов, которым проводили инфузию нитроглицерина, повышение активности каталазы наблюдалось только в эритроцитах печеночной венозной крови, где уровень данного фермента был выше исходного на 43,7(р 0,05). Одновременно содержание ос-токоферола в плазме обоих образцов крови не превышало исходное (табл. 1).Те же показатели ПОЛ и антиоксидантной системы были исследованы в гомогенате печени. В 1-й группе животных на 120-й мин реперфузии по отношению к контролю установлено увеличение ДК с 4,970,54 до 11,421,04 АЕ 233/г (р 0,01), ОШ со 120,312,47 до 404,650,2 Ед/г (р 0,001) и уменьшение ос-токоферола с 19,770,68 до 12,170,26 нмоль/ 100 мг (р 0,001), а также повышение активности каталазы в гомогенате печени с 8,360,56 до 11,450,35 ммоль/сг белка (р 0,01). Во 2-й группе на 120-й мин реперфузии исследуемые показатели прооксидантно-антиоксидантного состояния по отношению к контролю существенно не изменялись.Установлено, что у кроликов 1-й группы моделирование ишемии-реперфузии печени сопровождалось ростом активности АлАТ и АсАТ крови в конце реперфузионного периода, хотя в конце ишемии уровень данных ферментов не изменялся (табл. 2). В плазме смешанной венозной крови активность АлАТ и АсАТ на 120-й мин реперфузии повь 1 силась на 161,3 (р О,О 5) и 184,8 (р О,О 5) соответственно. Повышение активности данных ферментов в плазме крови указывает на нарушение целостности мембран гепатоцитов при моделировании синдрома ишемии-реперфузии печени. У животных 2-й группы активность АлАТ и АсАТ в плазме печеночной и смешанной венозной крови на протяжении ишемии-реперфузии печени существенно не изменялась. При этом на фоне инфузииТаблица 1 Влияние нитроглицерина на показатели прооксидантно-антиоксидантного баланса крови при ишемии-реперфузии печени (М 1 ш)Ишемия-реперфузия (1110) Ишемия-реперфузиянитроглицерин (п 8) Показатель Исходный уро- 30 мин ише- 120 мин реперфу- Исходный 30 МИН ишемии 120 мин реперфувень мии зии уровень зии Печеночная венозная кровь Диеновые конъюгатыпд, АЕдз/мл 0581005 1,130,14 2,130,1 0511004 059100411 0,8110,09 Основания Шиффапд, ЕД/мл 8,4910,42 12,7510,58 14,3510,47 8,8910,28 107110,49 938023 1913310381 Каталазаэр, ммоль/лгНЬ 2,7710,31 38110,33 5,571006 2,0310,17 24310,25 2921017 Смешанная венозная кровь Диеновые конъюгатыпд, АЕ 233/мл 0,5710,05 15610,3 1 2,5 810,55 0,6310,05 10810,18 1,0310,2 Основания Шиффапд, ЕД/мл 9,4710,12 1165059 123610284 9,1910,37 12,0610,67 9,9510,32Влияние нитроглицерина на ЫОх и функциональное состояние печени при ишемии-реперфузии (М 1 ш)Показатель Исходный уро- 30 мин ише- 120 мин реперфу- Исходный 30 МИН ишемии 120 мин реперфувень мии зии уровень зии Печеночная венозная кровь АлАТ, мкмоль/лмин 4811021 5,08016 9,411052 4010,35 4321033 48110,27 АсАТ, мкмоль/лмин 3,5210,19 3,931016 6,851082 38410,4 4,071029 44710,32Примечание пл плазма, эр эритроцита, достоверные изменения по отношению к исходному уровню в соответствующей группе, достоверные различия между соответствующими периодами разных групп.