Способ прогнозирования эффективности химиотерапии туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХИМИОТЕРАПИИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ С МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт пульмонологии и фтизиатрии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Авторы Шпаковская Наталья Савельевна Суркова Лариса Константиновна Скрягина Елена Михайловна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт пульмонологии и фтизиатрии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(57) Способ прогнозирования эффективности химиотерапии туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью, заключающийся в том, что в сыворотке периферической или венозной крови больного в утренние часы определяют уровень цитокинов ИЛ-8 и ИЛ-1 и при значениях ИЛ-8 от 0 до 73,0 пг/мл и ИЛ-1 от 0 до 11,0 пг/мл прогнозируют неэффективность химиотерапии, а при значениях ИЛ-8 от 110 пг/мл и выше и ИЛ 1 от 46,0 пг/мл и выше - эффективность химиотерапии. Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности химиотерапии больных туберкулезом с МЛУ МБТ. Цель изобретения - повышение эффективности способа. В настоящее время актуальной проблемой фтизиатрии является лечение больных туберкулезом легких, выделяющих микобактерии туберкулеза (МБТ), с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) в связи с ростом числа таких больных и низкой эффективностью их лечения. Одним из факторов, затрудняющих проведение полноценного лечения, является наличие у больных туберкулезом нарушения иммунного статуса. При распространенных и прогрессирующих формах туберкулеза развивается структурно-функциональная вторичная иммунная недостаточность клеточного типа, что приводит к невозможности осуществления в полном объеме эффекторных функций иммунной системы. У больных остропрогрессирующим туберкулезом легких иммунодефицит связан с цитозом(некрозом) иммунокомпетентных клеток (ИКК) (макрофагов и СД 4 лимфоцитов) и повышенным апоптозом СД 4 , что в значительной мере определяет выраженность морфологических проявлений в легких и тяжесть клинического течения. 9849 1 2007.10.30 В последние годы интенсивно изучаются механизмы межклеточного взаимодействия в иммунной системе. Известно более 30 видов цитокинов, обеспечивающих это взаимодействие, которые были выявлены при изучении дифференцировки иммунокомпетентных клеток. Основная биологическая роль цитокинов - регуляция иммунного ответа на всех этапах его развития. Как известно, Т-хелперы (СД 4 клетки) в результате распознавания антигена дифференцируются в 1 и 2 фенотипы, вырабатывающие две различные группы цитокинов 1 - ИЛ 2, ИЛ-12, -ИФН,2 клеткиИЛ 3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-10. Оба клона клеток продуцируют ИЛ-3, ГМ-КСФ, ФНО-. Мононуклеарные фагоциты вырабатывают ИЛ-1(ИЛ-1, ИЛ-1), ФНО, гранулоциты -ИФН иИФН. Несмотря на интенсивное изучение цитокинов, клиническая интерпретация колебания их уровня и активности остается затруднительной. Способ осуществляется с помощью твердофазного иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что для прогнозирования эффективности химиотерапии МЛУ туберкулеза определяется более узкий и строго специфичный спектр цитокинов, что позволяет повысить чувствительность и специфичность анализа, снизить затраты на выполнение и повысить его достоверность, а также осуществить своевременную коррекцию схемы химиотерапии и тем самым повысить эффективность лечения. Отличительным признаком по предлагаемому изобретению является то, что впервые предложен высокочувствительный и специфичный способ прогнозирования эффективности лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью в отличие от прототипов, пригодных для туберкулеза, вызванного типичными микобактериями, и не обеспечивающими прогнозирования эффективности лечения туберкулеза с МЛУ. Кроме того, способ прост в исполнении, не требует дополнительных материальных и временных затрат. Известен способ прогнозирования течения хронического обструктивного бронхита по определению содержания цитокинов интерлейкин-1, интерлейкин-8 и ФНО- в сыворотке крови, а также их продукции клетками лаважной жидкостидля прогнозирования течения хронического обструктивного бронхита 1. В настоящее время применяется определение уровня продукции -интерферона и клеточного ответа на БЦЖ для прогнозирования прогрессирующего течения туберкулеза, вызванного типичным возбудителем 2. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому способу является способ изучения взаимосвязи и взаимовлияния -интерферона и - антител к микобактериям туберкулеза в сыворотке крови больных активным туберкулезом и исследование их связи с некоторыми клинико-иммунологическими параметрами туберкулезной инфекции. У больных активным туберкулезом легких в сыворотке крови наблюдался более высокий уровень -интерферона - 475,786 пг/мл по сравнению со здоровыми - 22,210,9 пг/мл(р 0,001), и уровень -интерферона в сыворотке крови больных туберкулезом имел большие индивидуальные колебания. Данный способ указывает на то, что сывороточный интерферон определяет интерферонпродуцирующую активность самого возбудителя, что важно для понимания механизмов развития туберкулезного процесса 3. Однако указанные способы не позволяют прогнозировать эффективность полихимиотерапии и характера течения МЛУ туберкулеза легких. Задача, на решение которой направленно предлагаемое изобретение, состоит в ранней диагностике неблагоприятного течения туберкулеза легких с МЛУ МБТ и соответствующей коррекции химиотерапии. Способ осуществляют следующим образом отбирают пробу периферической или венозной крови в утренние часы и с помощью метода иммуноферментного анализа (ИФА) в сыворотке крови определяют уровень цитокинов - интерлейкина 8 и интерлейкина 1. 2 9849 1 2007.10.30 При значениях ИЛ-8 от 0 до 73,0 пг/мл и ИЛ-1 от 0 до 11,0 пг/мл прогнозируют неэффективность химиотерапии. При значениях ИЛ-8 от 110 пг/мл и выше и ИЛ-1 от 46,0 пг/мл и выше прогнозируют эффективность химиотерапии. Предлагаемый способ Способ прогнозирования эффективности химиотерапии туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью был применен при химиотерапии 28 больных, проходивших лечение в ГУ НИИ пульмонологии и фтизиатрии МЗ РБ. Пример 1 Больной С., 51 год. Клинический диагноз фиброзно-кавернозный туберкулез легких МЛУ МБТ (к стрептомицину, тубазиду, рифампицину), болен туберкулезом с 1991 года,неоднократное стационарное лечение. Направлен в НИИ ГУ НИИ пульмонологии и фтизиатрии МЗ РБ в связи с ухудшением состояния, жалобами на кашель, одышку, боли в грудной клетке. Рентгенологические исследования выявили в верхней доле левого легкого на фоне фиброзных изменений разновеликие очаговые тени, в верхней доле правого легкого на фоне очаговых фокусов, фиброзных изменений - полость. Нарушение функции внешнего дыхания по рестриктивному типу. Общий анализ крови лейкоциты - 8,4 х 109/л, моноциты - 15 , сегментоядерные нейтрофилы - 40 , лимфоциты - 38 , СОЭ - 60. Иммунологические исследования СД 3 - 26 , СД 4 - 23 , СД 8 - 15 , СД 16 - 11 ,СД 22 - 9 , СД 25 - 18 . Фагоцитоз нейтрофилов - 48 . Уровень ИЛ-8 - 45 пг/мл, ИЛ-1 - 6,3 пг/мл. Прогнозирована неэффективность химиотерапии, что подтверждено рентгенологическим исследованием - динамики не обнаружено. Пример 2 Больная К., 24 года. Клинический диагноз фиброзно-кавернозный туберкулез легких,хроническое прогрессирующее течение, резистентность МБТ (к стрептомицину, тубазиду,рифампицину, канамицину, этамбутолу), больна туберкулезом с 1999 года. Направлена в НИИ ГУ НИИ пульмонологии и фтизиатрии МЗ РБ в связи с ухудшением состояния,жалобами на кашель, слабость, одышку, боли в грудной клетке, снижение веса. Нарушение функции внешнего дыхания - замедленная скорость выдоха в средних и мелких бронхах. Общий анализ крови лейкоциты - 3,2 х 109/л, моноциты - 11 , сегментоядерные нейтрофилы - 54 , лимфоциты - 29 , СОЭ - 8. Иммунологические исследования СД 3 - 28 , СД 4 - 23 , СД 8 - 20 , СД 16 - 10 ,СД 22 - 24 , СД 25 - 15 . Фагоцитоз нейтрофилов - 56 , иммуноглобулин А - 0,85 г/л,М - 0,37 г/л,- 4,0 г/л. Уровень ИЛ-8 - 47 пг/мл, ИЛ-1 - 0 пг/мл. Прогнозирована неэффективность химиотерапии, что подтверждено рентгенологическим исследованием - динамики не обнаружено. К лечению добавлен полиоксидоний, и через месяц наметилась незначительная рентгенологическая динамика. Пример 3 Больная И., 48 лет. Клинический диагноз инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого, МЛУ МБТ (к стрептомицину, тубазиду, рифампицину), рост МБТ в 5-и посевах. Направлена в НИИ ГУ НИИ пульмонологии и фтизиатрии МЗ РБ в связи с жалобами на кашель с мокротой, одышку, боли в грудной клетке, слабость. Рентгенологические исследования выявили в верхней доле правого легкого на фоне сгущенного деформированного легочного рисунка разновеликие очаговые тени и фокусные тени неоднородной структуры. Нарушение функции внешнего дыхания смешанного типа. Общий анализ крови лейкоциты - 7,8 х 109/л, моноциты - 4 , сегментоядерные нейтрофилы - 49 , лимфоциты - 32 , СОЭ - 12. 3 9849 1 2007.10.30 Иммунологические исследования СД 3 - 31 , СД 4 - 23 , СД 8 - 20 , СД 16 - 10 ,СД 22 - 13 , СД 25 - 15 . Фагоцитоз нейтрофилов - 45 . Уровень ИЛ-8 - 250 пг/мл, ИЛ-1 - 155,5 пг/мл. Прогнозирована эффективная химиотерапия, что подтверждено рентгенологическим исследованием. Источники информации 1. Ягода А.В., Лучкина О.Е. Интерлейкины при различной тяжести течения хронического обструктивного бронхита // 3 Конгресс европейского региона. Международный союз по борьбе с туберкулезом и легочными заболеваниямии 14 Национальный конгресс Российского респираторного общества - М. - 22-26 июня 2004. - С. 436. 2. Салина Т.Ю., Морозова Т.И. Сывороточный уровень гамма-интерферона и - антител к М.пациентов с активным туберкулезом легких // 3 Конгресс европейского региона. Международный союз по борьбе с туберкулезом и легочными заболеваниямии 14 Национальный конгресс Российского респираторного общества - М. - 22-26 июня 2004. - С. 290. 3. Салина Т.Ю., Морозова Т.И. Интерферон- и - антитела к М.в сыворотке крови больных активным туберкулезом легких // Проблемы туберкулеза. - 2004.10. - С. 43-45. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4