Способ контроля эффективности ультрафиолетового облучения крови при лечении бронхиальной астмы

СПОСОБ КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ УЛЬТРАФИОЛЕТОВОГО ОБЛУЧЕНИЯ КРОВИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ(71) Заявитель Учреждение образования Белорусский государственный медицинский университет(72) Авторы Царев Владимир Петрович Кирковский Валерий Васильевич Потапова Светлана Михайловна Ровдо Игорь Михайлович(73) Патентообладатель Учреждение образования Белорусский государственный медицинский университет(56) Захараш М.П. и др. Лабораторная диагностика. - 1998. -2. - С. 21-23. Царев В.П. и др. Актуальные вопросы современной медицины Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 80-летию БГМУ. Ч. 2. - Мн.,2001. - С. 235-237. Царев В.П. и др. Труды молодых ученых. Юбилейное издание. Сб. научных работ. - Мн., 2001. - С. 156-159. Кирковский В.В. и др. Актуальные вопросы современной медицины Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 80-летию БГМУ. Ч. 1. - Мн., 2001. - С. 184-186. Ткаченко Ю.Я. Применение ультрафиолетового облучения аутокрови в комплексной терапии больных бронхиальной астмой Автореф. дис. Киев, 1992. - С. 6-17.(57) Способ контроля эффективности ультрафиолетового облучения крови при лечении бронхиальной астмы, отличающийся тем, что до и после ультрафиолетового облучения из периферической крови больного выделяют лимфоциты, культивируют в течение 72 ч на питательной среде с фитогемагглютинином и определяют процентное содержание апоптических лимфоцитов и, если после ультрафиолетового облучения крови оно увеличилось на 10 и более, констатируют хороший эффект облучения в пределах от 5 до 10 Изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии, и касается контроля эффективности применения ультрафиолетового облучения крови (УФОК) при бронхиальной астме (БА). Известен способ контроля эффективности УФОК при БА, основанный на изучении динамики клинических симптомов заболевания (частоты и выраженности приступов удушья и кашля, количества и отхождения мокроты, выраженности одышки, количества сухих хрипов при аускультации легких, динамики суточных доз бронхолитиков и глюкокортикостероидов) после проведенного лечения (Ткаченко Ю.Я. Применение ультрафиоле 9055 1 2007.04.30 тового облучения аутокрови в комплексной терапии больных бронхиальной астмой. Автореф. дис.канд. мед. наук. - Киев, 1992. - С. 6-17). Его недостатком является необходимость контроля за большим количеством показателей, невозможность применить методы вариационного и корреляционного анализа в связи с использованием приемов описательной статистики. Известен также способ контроля эффективности УФОК при БА, основанный на исследовании пролиферативной активности Т-лимфоцитов периферической крови (Кирковский В.В. и др. Актуальные вопросы современной медицины Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 80-летию БГМУ. Ч. 1. - Мн., 2001. - С. 184-186). Недостатками этого способа являются недостаточная чувствительность и специфичность, так как выявляемое снижение спонтанной пролиферативной активности отмечается не у всех больных и недостаточно коррелирует с динамикой выраженности клинических симптомов и показателей функции внешнего дыхания. Наиболее близким, принятым за прототип, является способ определения эффективности УФОК при БА, основанный на изучении динамики содержания среднемолекулярных пептидов в крови больных после лечения (Захараш М.П. и др. Лабораторная диагностика. - 1998. -2. - С. 21-23). Однако в связи с тем, что содержание среднемолекулярных пептидов в большей степени отражает выраженность эндогенной интоксикации, а не активность аллергического процесса в дыхательных путях, известный способ не обеспечивает высокой чувствительности и точности. Задачей изобретения является повышение точности способа. Поставленная задача достигается тем, что в способе контроля эффективности ультрафиолетового облучения крови при лечении бронхиальной астмы до и после ультрафиолетового облучения из периферической крови больного выделяют лимфоциты, культивируют в течение 72 ч на питательной среде с фитогемагглютинином и определяют процентное содержание апоптических лимфоцитов и, если после ультрафиолетового облучения крови оно увеличилось на 10 и более констатируют хороший эффект облучения, в пределах от 5 до 10- удовлетворительный, а до 5- недостаточный. При осуществлении способа, в динамике (до и после УФОК), определяется процентное содержание апоптических лимфоцитов в 72-часовой культуре этих клеток периферической крови больных БА, стимулированных фитогемагглютинином (ФГА). При увеличении количества апоптических клеток более, чем на 10 констатируют хороший эффект УФОК, от 5 до 10- удовлетворительный эффект, а до 5- недостаточную эффективность УФОК у больных БА. На сегодняшний день Т-лимфоциты рассматриваются в качестве главного звена прогрессирования БА у взрослых как на местном, так и на системном уровнях. Это позволяет использовать ФГА-индуцированный апоптоз этих клеток как интегральный показатель эффективности применяемого метода лечения, что значительно повышает точность исследования. Предлагаемый способ обладает высокой чувствительностью. Так, у больных БА показатель ОФВ 1 достоверно коррелировал с уровнем индуцированного ФГА апоптоза лимфоцитов крови через 72 ч наблюдения (0,667 р 0,01) и отрицательной динамикой выраженности клинических симптомов (приступы удушья, кашель, одышка, отхождение мокроты, хрипы в легких). Таким образом, предложенный способ при достаточной чувствительности и точности значительно упрощает и облегчает контроль эффективности УФОК при БА. Предложенный способ осуществляется следующим образом. Кровь из локтевой вены натощак путем венепункции забирают в полистироловую пробирку объемом 5 мл с 0,5 М раствора ЭДТА. Лимфоциты периферической крови выделяют центрифугированием на градиенте плотности фиколл-верографин при 400 в течение 30 мин. Клетки интерфазы отмывают питательной средой -1640 (1) с 1 АВ-сыворотки. Осадок ресус 2 9055 1 2007.04.30 пендируют в питательной среде -1640 с добавлением 10 АВ-сыворотки, 2 мм глутамина, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Процентное содержание апоптических клеток определяют в 72-часовой культуре стимулированных ФГА (10 мкг/мл) лимфоцитов. После двукратной отмывки холодным(без ионов Са 2) клетки (1106) фиксируют капельным добавлением 1 мл холодного 70 этанола ви инкубируют 30 мин при 4 С. После осаждения клетки дважды отмывают холодным(без ионов Са 2) и ресуспендируют в растворе пропидиум иодида (25 мкг/мл). Инкубируют 30 мин при 4 С. Аналитическую цитометрию проводят на проточном цитофлюориметре с аргонионным лазером (15 мВт 488 нм) и 585/42 ( 2) дискриминационным фильтром. Данные анализируют после выделения логического гейта бластной популяции в / распределении клеток по их линейному переднемуи боковомусветорассеиванию. На пробу анализируют минимум 10000 клеток. Сбор и анализ данных проводят с помощью программы( ). Пример 1. Больной М., 43 лет, поступил в клинику с диагнозом бронхиальная астма, смешанная форма, тяжелое течение, гормонозависимый вариант, фаза обострения ДН 3. Предъявлял жалобы на одышку в покое, приступы удушья каждые 3-4 ч, не купирующиеся однократным приемом 2-агонистов, потребность в бронходилятаторах до 12-15 раз в сутки, возникновение приступов удушья каждую ночь 1-2 раза. БА страдает в течение 12 лет, после перенесенной острой пневмонии. Из них в течение 6 последних лет в связи с тяжелым течением астмы принимает преднизолон внутрь в дозе 10 мг в сутки. При поступлении ФГА-индуцированный апоптоз Т-лимфоцитов периферической крови в их 72-часовой культуре составлял 6,1 . После включения в комплексное лечение курса УФОК на аппарате типа Надежда (5 процедур через 1 день, мощность облучения - 600 Дж/м 2, длина волны 250 нм) с использованием в качестве генератора УФ лучей лампы ПРК-2 и кюветы из кварцевого стекла размерами 100202 мм процентное содержание апоптических клеток в крови значительно повысилось и составило 18,9 . По окончании курса лечения установлено значительное улучшение клинико-лабораторных и функциональных показателей. Частота приступов удушья снизилась до 3-5 в неделю, ночные симптомы отсутствовали, исчезли одышка и тяжесть в грудной клетке, сухие хрипы в легких. При выписке поддерживающая доза глюкокортикостероидов составила 5 мг преднизолона в сутки. Суточный разброс ПОС составил 7 . В контрольной спирограмме выявлена существенная положительная динамика ЖЕЛ - 127 , ОФВ 1 - 113 , МОС 50 - 70 , МОС 75 - 79 ,ОФВ 1/ФЖЕЛ - 92 . Достигнутое улучшение сохранялось на протяжении года при постоянном приеме дозы преднизолона 5 мг в сутки внутрь, то есть в 2 раза ниже установившейся в качестве привычной до лечения. Значимой отрицательной динамики со стороны показателей ФВД и лабораторных данных в течение года не отмечалось, сохранялись признаки незначительной обструкции мелких и средних бронхов при отсутствии возрастания бронхиального сопротивления по данным ФВД. Пример 2. Больной П., 30 лет, доставлен в клинику с диагнозом бронхиальная астма, аллергическая форма, тяжелое течение, гормонозависимый вариант, фаза обострения, ДН 3. При поступлении жаловался на приступы удушья каждые 3-4 ч, в том числе и ночью, затяжного характера, плохо купирующиеся бронхолитиками, слабость, сердцебиение, одышку в покое. БА страдает с детства. В семье БА у отца и аллергический ринит у брата. Последние 1,5 года для контроля над заболеванием вынужден постоянно принимать преднизолон в дозе 5 мг в сутки. При поступлении одышка в покое 24-26 в 1 мин. Аускультативнорассеянные свистящие хрипы, больше на выдохе. Компьютерная спирография выявила резкое снижение ФВД по обструктивному типу ФЖЕЛ - 66 , ОФВ 1 - 34 , МОС 25 3 9055 1 2007.04.30 24 , МОС 50 - 19 , МОС 75 - 16 , ОФВ 1/ФЖЕЛ - 53 . Содержание апоптических лимфоцитов в периферической крови - 5,6 . Несмотря на проведенное лечение первые 3 дня преднизолон внутривенно капельно в суточной дозе 60 мг и внутрь 15 мг в сутки, теотард 600 мг в сутки, ингакорт 2000 мкг в сутки, 6 процедур УФОК через 1 сутки на аппарате Надежда, состояние больного улучшилось незначительно количество приступов удушья уменьшилось до 3-4 за сутки с эпизодами ночного пробуждения, сохранялся кашель с плохим отхождением мокроты, одышка при физической нагрузке, сухие хрипы в легких. Показатели ФВД улучшились незначительно. Процент апоптических лимфоцитов после их культивирования в среде с добавлением ФГА в течение 72 ч увеличился на 2,3 и составил 7,9 . Состояние больного несколько улучшилось только после включения в комплексное лечение курса лечебного плазмафареза, что позволило перевести его на амбулаторное лечение с поддерживающей дозой преднизолона 7,5 мг в сутки. Таким образом, предлагаемый способ позволяет увеличить точность и повысить чувствительность контроля эффективности применения УФОК при БА и отличается тем, что определяется динамика выраженности ФГА-индуцированного апоптоза лимфоцитов периферической крови больных через 72 ч их культивирования в процентах. При разнице показателя до и после применения УФОК менее 5 диагностируется низкая эффективность этого метода гемокоррекции, а при разнице более 10 процентов - высокая эффективность экстракорпорального вмешательства. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4