4,6-Ди-трет-бутил-2-[(N-ацетил)амино]фенол, проявляющий противовирусную активность

61 31/16, 31/22 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем(72) Авторы Бореко Евгений Иванович Ксендзова Галина Анатольевна Николаева Светлана Николаевна Павлова Наталья Ильинична Полозов Генрих Иванович Савинова Ольга Владимировна Сорокин Виктор Леонидович Цодова Надежда Николаевна Шадыро Олег Иосифович(73) Патентообладатель Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем проявляющий активность при подавлении размножения вирусов герпеса и гриппа.(56)4199574, 1980.4551552, 1985.2145963 1, 1995.2125565 1, 1999.03047174 , 1991.0508334 2, 1992. Изобретение относится к области медицины, в частности вирусологии, и может быть использовано при подавлении размножения вирусов герпеса и гриппа. Известны противовирусные свойства противогерпетического препарата ацикловира 2 2 2 1. .4 199 574 - А 61 К 31/52 С 07 413/18 22.04.1980. Известны также свойства средства против вируса гриппа препарата ремантадина 2 2. .4 551 552 - С 07 С 85/11 05.11.1985. Задачей изобретения является расширение ассортимента средств, обладающих противовирусным действием. Поставленная задача достигается синтезом 4,6-ди-трет-бутил-2-(-ацетил)аминофенола формулы 3 для подавления размножения вирусов герпеса и гриппа. Указанное соединение, его свойства и способ получения в литературе не описаны. Заявляемое соединение получают в результате известной реакции ацилирования по азоту производных аминофенола. В качестве исходного соединения используют 4,6-дитрет-бутил-2-аминофенол, который ацилируют уксусным ангидридом с последующим выделением заявляемого соединения известными приемами. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. Пример 1. Получение заявляемого соединения. К 10 мл (0,1060 моль) уксусного ангидрида при перемешивании на магнитной мешалке добавляли 1 г (0,0045 моль) 4,6-ди-трет-бутил-2-аминофенола. Реакционную смесь перемешивали при нагревании 1 час и охлаждали до -15 С. Кристаллический продукт отфильтровывали и перекристаллизовывали из петролейного эфира. Получали 0,73 г (61 ) 4,6-ди-трет-бутил-2-(-ацетил)аминофенола, т.пл. 147-148 С. УФ 290(5788286). Спектр ПМР ( м.д., 3)8.36 с (1 Н,ОН), 7.75 уш.с. (1,), 7.20 д (1 Н,СН), 6.76 д (1 Н,СН), 2.17 с (3 Н,СН 3), 1.42 с (9 Н,3 СН 3), 1.24 с (9 Н,3 СН 3). Масс-спектр (/,)263 (М, 16). Пример 2. При проведении испытаний с вирусом герпесатипа (ВПГ, штамм 1 С) и его вариантом со сниженной чувствительностью к действию известного противогерпетического препарата ацикловира используют перевиваемую культуру клеток рабдомиосаркомы . Монослойную культуру клеток , выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют 0.01-0,001 ТЦИД 50/клетка вирусов путем нанесения на клетки разведения вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 час при 37 С. Затем жидкость удаляют и клетки покрывают средой поддержки (среда 199), содержащей различные концентрации исследуемых веществ. После 48 час инкубации при 37 С регистрируют мор 2 6506 1 фологические изменения монослоя клеток (цитопатическое действие (ЦПД) вируса, увеличение 80). Находят минимальную концентрацию соединений, подавляющую развитие ЦПД вируса на 50(ТЦД 50). Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса. Таблица 1 Противовирусные свойства 4,6-ди-трет-бутил-2-(-ацетил)аминофенола и ацикловира в отношении вируса герпеса Противовирусное действие ВПГ ВПГр Концентрация,Вещество Титр вируса Разность с Титр вируса Разность с мкг/мл-0,17 5,470,26 1,0 2,53 0 4,700,10 5,300,11 Ацикловир 0,5 2,39 5,300,11 0 4,840,07 0,25 2,07 0 5,160,05 5,300,11 Контроль 5,300,11 7,230,23 Обозначение ВПГр - вариант ВПГ вариант со сниженной чувствительностью к действию известного противогерпетического препарата ацикловира. Как видно, 4,6-ди-трет-бутил-2-(-ацетил)аминофенол обладает способностью тормозить размножение вируса герпеса и его варианта со сниженной чувствительностью к действию ацикловира в культуре клеток. Пример 3. При проведении испытаний с вирусом гриппа //34 (71) и его вариантом,устойчивым к действию известного противогриппозного препарата ремантадина, используют культуру клеток первичных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК). Испытания проводят методом редукции количества бляшек под агаровым покрытием. Монослойную культуру ФЭК, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют различными разведениями вируса в пределах 0,01-0,00001 БОЕ/клетка вируса путем нанесения на клетки вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 час при 37 С. Затем жидкость удаляют и клетки покрывают расплавом питательной среды на основе концентрата среды 199 с добавлением 1 бактагара и 0,005 нейтрального красного (все реактивы - ) и различных концентраций исследуемых соединений. После застывания покрытия флаконы помещают в термостат на 36 час и затем подсчитывают количество бляшек, видимых благодаря присутствию в покрытии витального красителя. На основе количества бляшек вычисляют титр вируса. Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса. Полученные результаты приведены в таблице 2. 6506 1 Таблица 2 Противовирусные свойства 4,6-ди-трет-бутил-2-(-ацетил)аминофенола и ремантадина в отношении вируса гриппа Противовирусное действие Концентрация,Вещество Титр вируРазность с Титр виру- Разность с мкг/мл са,контролем,са,контролем, БОЕ/млБОЕ/млБОЕ/млБОЕ/мл 800 5,00 2,59 4,60 2,03 400 5,00 2,59 4,60 2,03 4,6-Ди-трет 200 5,00 2,59 4,60 2,03 бутил-2-(100 6,250,02 1,34 5,430,10 1,20 ацетил)ами 50 6,400,10 1,19 5,480,12 1,15 нофенол 25 6,590,10 1,00 5,650,008 0,98 0 7,590,03 6,630,05 25 н.и. н.и. 7,24 0,26 12 н.и. н.и. 7,27 0,23 6 н.и. н.и. 7,46 0,04 Ремантадин 0,7 н.и. н.и. 7,45 0,05 0,1 5,160,12 3,48 7,39 0,11 0,01 4,650,65 3,99 7,41 0,09 0 8,640,03 7,50 Обозначения- вариант , устойчивый к действию ремантадина н.и. - не исследовали. Как видно, 4,6-ди-трет-бутил-2-(-ацетил)аминофенол обладает способностью тормозить размножение вируса гриппа и его варианта, устойчивого к действию ремантадина. Таким образом, заявляемое решение позволяет решить поставленную задачу. При использовании 4,6-ди-трет-бутил-2-(-ацетил)аминофенола удается получить подавление размножения вирусов герпеса и гриппа в культуре клеток. 4,6-Ди-трет-бутил-2-(ацетил)аминофенол проявляет противовирусное действие также и в отношении вариантов вирусов герпеса и гриппа, устойчивых к действию известных противовирусных препаратов, ацикловира и ремантадина, соответственно. Заявляемое химическое соединение может быть использовано в исследовательской лабораторной практике непосредственно в настоящий момент для подавления размножения вирусов герпеса и гриппа. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4