Способ получения водорастворимых олигосахаридов

госмдАРствЕнный номитвт по масона-гениям и отгытинм при пннт сосе.(71)-Всесоюзньй научно-исследовательский институт биотехнологии и Московский технологический институт мясо ьюлочной промышленности(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИ ОПИГОСАХАРИДОВ(57) Изобретение относится к получе нию низкомолекулярных олиг 9 саХаРН дон со степенью полимеризации 4-3,которые могут быть использованы самостоятелъно или.в качестве промежуточнъш продуктов при получении разнообразных биологически активны веществ под действием ферментов типа хитиназ лизоцнмов, Ы-ацетил-Д-глюкозиминидаз трансгликоэилаэ и других подобных ферментов. Изобретение позволлетупростить процесс за счет исключения из процесса ультразвукового воздействия при сохранении высокого вышода водорастворим олигосахаридов хитина за счет того, что обработку хитина проводят 65 ным раствором серной кислоты в количестве 2710 мл на 1 г хитина при д 050 св течение 20-120 мин с последующей обработкой реакционной смеси ацетоном при объемном соотношении ацетона и раствора серной кислоты (5-7)1.Изобретение относится к полученю полисахаридов из хитина, а именно низкомолекулярных олнгосахаридов со степенью полимеризации 4-8, ко торые могут быть нспользованы.само стоятельно или в качестве промежуточны продуктов при получении разнообразным биологически активных веществ под действием ферментов типа хитиназ, лизоциов, Ыацетил-Д-тлюкозамнидаэ трансгликозилаэ и других подобныш ферментов.Изобретение иллюстрНрУШТ ПРИМЕРЫ П р и м е р 1. 2 г хитина крабов смешивают с 20 мл 65-ного раствпраН 404 В ВОДЕ, Вьщгржнвают 20 мин при 50 С, к образовавшейся однородной массе добавляют 100 мл ацетона, осадок слипается в комок, жидкость отделяют декантацией, осадок растворя ют в 100 мл воды, нерастворивпуюся часть отделяют центрифугированием,СУПернатант пропускают через колонку(213 18 см) с анионитом 1 ВА 4 О 0 в 0 Нформе, колонку промывают водой. ЭЛЮЗТЛИ 0 ФИли 3 ирУЮТП 0 лУчаютводорастворимые хитиновые олмгосахариды, выход 1,1 г, т.е. 552. Препарат служит хорошим донором В реакциях трансглит козилнрования, катализируемых лизоцином (фиг. 11.На фиг.-1 показаны хроматограмм реакционнъш смесей, полученны дей Нумароцьхйнът.Г 171 3ствием куриного лизоцима на смесь растворимого хитодекстрина и ПНФГА. Пик 1 принадлежит лиэоциму пик Ч ПНФГА, пики 11, 111 и 1 - продуктам трансгликозилированни. Кривые 1-5 получены соответственно при увеличивающемся времени реакции с лизоци МОН П р н м е р 2. 3,74 г хитина креветок смешивают с 10 мл 65 ной Н 504 выдерживают 2 ч при 4000, добавляют 70 мл ацетона. Осадок отделяют декантированием жидкости и обрабатывают 80 мл воды при перемешивании. Нерастворившуюся часть отделяют центрифугированием, высушивают (масса 1,5 Г,т.е. 40), а раствор пропускают черездонку с анионитом 12114130, высушиЦв ют лиофильно и получают 2 г, т.е. 53 растворимого хитодекстрина олигосахаридный состав которого приведен тв таблице и на фиг. 2 и 3.На фиг. 2 показана высокоэффектив ная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) смеси растворимых хитодекстринов полученных в примере 2. Сорбент силосорбтН 1, Концентрация хитодекстрннов 10 мг/мл, нанесено 0,01 мл. Пунктир ВЭЖХ ЫацетилДглюкозамина в тек же условияк концентрация 10 мг/мл, наиесено 0,001 мм. Римскими цифрами обозначены места выхода олигосахаридов с соответствующей степенью полимеризаЦиива фиг. 3 гель-ХР 0 МаТ 0афия растворимк хитодекстринов, йлучеиньп в примере 2. Гель тоеперл 11-40 (файн), колонка 11539 см. Прадедлы олекулнриык масс разделяемых веществ для данного геля от 100 до 7000. Нулевой объем колонки 11 мл,объемы ашоирования гпкозы, мальтозы н хитодекстринов 35, 2 Э и 15 мл соответственно. Средняя степень полимеризации хитодекстринов равна 7-8. Обозначения абсцисса - объем элиро ванна ордината оптическая плотность для Уфгпоглощения при 190 нм(сплошная линия) и для колориметритеских измерений восстанавливающей способности по Шомоди (пунктир).Номер Время удерживания Содержафракции основного пика иие фракгндроли- ции в хизата фракции свидете- тодекст хитодекст- ля- рине, 2 рина 1 1 о з 15 0,17 п 2 о г. 30 0, 67 111 55 о ь 00 не рассчнтано п тов в 3 о 10Аналиэ показывает, что препарат полученный в примере 2, содержит мот но- и дисанарида в сумме меньше тетрасахарида около 10, трисахарида примерно половину от тетрасакарида. ДжШешштщтшющш(шд 3) вместе с данными ВЭЖХ (фиг. 2 итаб лица) свидетельствуют о том, что полученны препарат представляет смесъ водорастворим хитодекстринов со степенью полимеризации больше четырек.П р и м е р 3. Опыт проводят как в примере 1, температура 40 С времяобъем кислоты. Выход продукта 30. Предлагаемый способ является болееПРОСТЫМ, ЧЕМ ИЗВВСТНЫ за СЧЕТ НСключения из процесса воздействия уль тразвуке И ИСПОЛЬЗОВЕНИН ПРОСТЫХ приемов ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЦЕЛЕВОГО ПРО дукта присохраиении егокачества и выжодаСпособ получения водорастворимых опигосахаридов включающий обработку хитина концентрированным раствором минеральной кислоты при нагревании Н ВЫДЕЛЕНИЕ ЦЕЛВЕОГО ПРОДУКТЗ, О Т л и ч а ю Щ и й с я тем, что, с целью упрощения процесса, обработку проводят 65-иым раствором серной кнслоты в количестве 2,7-10 мл на 1 г хитина при 40-50 С в течение 20 120 мн с последующей обработкой реакционной смеси ацетоном при объемом соотношении ацетона и раствора сердной кислоты 5-71.ВНИНИ Государственного комитета по изобретениям И открьпням при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж 35 Раушская наб. Д. 4/5