Способ комплексного лечения туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ С МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр пульмонологии и фтизиатрии(72) Авторы Скрягин Александр Егорович Исайкина Янина Ивановна Скрягина Елена Михайловна Солодовникова Варвара Валерьевна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр пульмонологии и фтизиатрии(57) Способ комплексного лечения туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью, включающий полихимиотерапию и аутологичную трансплантацию культивированных мезенхимальных стволовых клеток, суспендированных в физиологическом растворе с добавлением гепарина, отличающийся тем, что используют мезенхимальные стволовые клетки, которые культивируют 27-30 дней и трансплантируют в количестве(0,7-1,2)106 на 1 кг массы пациента. Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может использоваться для лечения туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью. Актуальность проблемы туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью обусловлена высокой заболеваемостью, смертностью, неудовлетворительными результатами лечения этой формы заболевания и негативным влиянием на общую эпидемиологическую ситуацию. Больные туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью представляют собой наиболее опасный источник туберкулезной инфекции, в значительной мере определяя уровень инвалидности и смертности от туберкулеза. Кроме этого, лечение туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью характеризуется большой продолжительностью (до трех лет), частыми побочными эффектами противотуберкулезных препаратов, высокой стоимостью и низкой эффективностью. В связи с неэффективными результатами стандартной терапии возникла необходимость поиска новых методов лечения больных туберкулезом. Одним из перспективных путей в этом направлении является трансплантация больным мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, в результате которой восстанавливается популяция стромальных клеток в различных органах, в том числе и в легких. Они являются источником цитокинов и ростовых факторов, которые участвуют в регуляции 15703 1 2012.04.30 иммунного ответа, а также в развитии регенераторных процессов в поврежденной ткани легкого. Известен способ комплексного лечения туберкулеза легких с применением аутологичной трансплантации мезенхимальных стволовых клеток путем медленного внутривенного введения клеток, суспендированных в 200 мл физиологического раствора с добавлением гепарина 1. Источником клеток костного мозга послужил стернальный пунктат, который был взят у больной в стерильных условиях в количестве 1 мл и выращивался в течение 40 суток. Данный способ приводит к прекращению массивного бактериовыделения, стабилизации основного процесса у больных с остропрогрессирующими хроническими формами туберкулеза легких. Такой срок выращивания (40 суток) способствует большей дифференцировке стволовых клеток, что отрицательно сказывается для данного способа лечения с множественной лекарственной устойчивостью, т.к. полученные мезенхимальные стволовые клетки не способны развиваться по любой линии дифференцировки. Данный способ недостаточно эффективен и в плане воздействия на патогенетические механизмы лекарственно устойчивого туберкулеза быстроту ликвидации клинических признаков заболевания инволюцию инфильтративно-деструктивных изменений в легочной ткани прекращение бактериовыделения. Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в усилении эффекта химиотерапии у больных туберкулезом легких с множественной лекарственной устойчивостью. Поставленная задача решается предлагаемым способом комплексного лечения туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью, включающим полихимиотерапию и аутологичную трансплантацию культивированных мезенхимальных стволовых клеток, суспендированных в физиологическом растворе с добавлением гепарина мезенхимальные стволовые клетки культивируют 27-30 дней и трансплантируют в количестве(0,7-1,2)106 на 1 кг массы пациента. Хоуминг мезенхимальных стволовых клеток происходит преимущественно в места наибольшего повреждения ткани, в случае туберкулеза - в очаги туберкулезного поражения легких. На месте деструктивных повреждений происходит не только замещение полостей фиброзной тканью, но и регенерация легочной ткани. В результате более короткого срока культивации мезенхимальных стволовых клеток, который составил 27-30 дней, в отличие от 40 дней по способу-прототипу, клетки остаются мультипотентными, т.е. способными развиваться по любой линии дифференцировки, в том числе с такими конечными элементами, как эндотелиальные клетки, клетки альвеолярного и бронхиального эпителия, миоциты,фибробласты и адипоциты. В случае побочных эффектов химиотерапии (гепатотоксичность, нефротоксичность, нейротоксичность, энтеропатия, ретинопатия и др.) хоуминг мезенхимальных стволовых клеток может также осуществляться в пораженные органы. Этому способствует мультипотентность мезенхимальных стволовых клеток - результат более короткой культивации (при достаточной клеточной дозе). Кроме того, мезенхимальные стволовые клетки являются источником цитокинов и ростовых факторов, которые участвуют в регуляции иммунного ответа. Способ осуществляется следующим образом. Во время проведения основного или поддерживающего курса полихимиотерапии четырьмя и более противотуберкулезными препаратами больному проводят забор костного мозга из подвздошной кости в объеме 40-60 мл (антикоагулянт - сухой гепарин). В дальнейшем проводят процессирование костного мозга, включающее выделение мононуклеаров костного мозга, культивирование мезенхимальных стволовых клеток до 30 дней,морфологический и иммунофенотипический анализ культур клеток, определение жизнеспособности и стерильности клеток. После наращивания мезенхимальных стволовых кле 2 15703 1 2012.04.30 токдо оптимальной клеточной дозы (0,7-1,2)106 МСК на кг массы пациента, клетки, снятые с поверхности культурального слоя, отмывают в физиологическом растворе и переносят в шприц в объеме 20 мл в физиологическом растворе для дальнейшей инфузии пациенту. Аутологичную трансплантацию мезенхимальных стволовых клеток пациенту проводят в условиях отделения интенсивной терапии и реанимации. Полученную из лаборатории в 20 мл шприце суспензию мезенхимальных стволовых клеток предварительно встряхивают несколько раз (для предотвращения клеточных клампов) и вводят внутривенно медленно в течение 3 минут. За 30 минут до реинфузии больной получает 1 димедрол 1 мл в/м. Наблюдение за пациентом в условиях отделения интенсивной терапии и реанимации продолжают не менее 2 часов, после чего больного переводят в свое отделение. Предлагаемый способ был применен на базе клиники ГУ РНПЦ пульмонологии и фтизиатрии при лечении 15 больных туберкулезом легких с множественной лекарственной устойчивостью (опытная группа). До проведенного лечения у всех больных отмечалось прогрессирование процесса. Всем пациентам было проведено комплексное лечение предлагаемым способом. На фоне базовой противотуберкулезной терапии, состоящей из 4-6 основных и резервных противотуберкулезных препаратов, им провели аутологичную трансплантацию МСК в количестве не менее (0,7-1,2)106 на кг массы больного. Контрольную группу составили 10 больных с аналогичными патологическими процессами, которым проводилось лечение только противотуберкулезными препаратами, без применения аутологичной трансплантации МСК. Под влиянием комплексного лечения с применением аутологичной трансплантации мезенхимальных стволовых клеток, проведенного больным туберкулезом легких с множественной лекарственной устойчивостью, происходило следующее стабилизация процесса ускорение сроков абациллирования положительная рентген-динамика в виде рассасывания инфильтративных изменений и закрытия мелких полостей распада исчезновение клинических симптомов заболевания. Переносимость заявленного способа лечения была расценена как очень хорошая. Все обследуемые больные прошли полный курс лечения. Ни у одного из пациентов не было отмечено побочных эффектов или нежелательных явлений, связанных с применением аутологичной трансплантации мезенхимальных стволовых клеток. Пример 1. Больной К., 1978 г.р., история болезни 933/90, 10.04.2009 поступил в клинику ГУ РНПЦ пульмонологии и фтизиатрии с диагнозом инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе распада и обсеменения, с явлениями казеозной пневмонии,МБТ , ДНст., ШЛУ. При поступлении больной предъявлял жалобы на боль в грудной клетке, кашель, повышение температуры тела до 37,5 С. Со слов пациента, считает себя больным около месяца, когда появились вышеперечисленные симптомы. Лечился в 5-й КБ, когда после обнаружения КУБ в мокроте был переведен в РНПЦ пульмонологии и фтизиатрии. Общее состояние больного на момент поступления расценивалось как удовлетворительное. При объективном обследовании патологии не выявлено. При обзорной и боковой рентгенограмме органов грудной клетки (ОГК) от 1.04.2009 выявлена неоднородного характера массивная инфильтрация верхней доли правого легкого, более интенсивная в основании доли, междолевая борозда выгнута, не смещена, участки просветления, усилен и деформирован рисунок в 1-2. При рентгенограмме ОГК от 12.05.2009 наблюдается прогрессирование процесса в виде нарастания инфильтративных изменений в верхней доле справа, на этом фоне сохранялись участки просветления по типу небольших полостей, появилась инфильтрация в проекции 6 справа. Результаты посева мокроты от 15.04.2009 - обильный рост МБТ. Результат определения лекарственной чувствительности МБТ выявил устойчивость к изониазиду, стрептомицину, рифампицину, этамбутолу, амикацину, канамицину, офлоксацину, капреомицину, циклосерину. 3 15703 1 2012.04.30 Во время проведения курса полихимиотерапии шестью противотуберкулезными препаратами (авелокс - 0,4/день, амоксиклав - 0,625/3 раза в день, ПАСК - 5,52/2 раза в день, клацид - 0,5/день в/в, линезолид - 0,6/день в/в, протионамид - 0,25/3 раза в день) больному провели пункцию подвздошной кости. Был забран костный мозг в объеме 50 мл. После процессинга аутологичных мезенхимальных стволовых клеток,29.07.09 в условиях ОИТР была проведена системная трансплантация аутологичных МСК(0,75106 на кг массы тела больного). Результаты посева мокроты на МБТ показали, что больной был абациллирован с августа месяца 2009 г. При рентгенологическом обследовании ОГК от 23.09.09 отмечалась положительная динамика в виде частичного рассасывания очагово-инфильтративных изменений в 6 справа. На рентгенограмме ОГК от 19.11.09, отмечается дальнейшее рассасывание воспалительных изменений. На момент выписки из стационара у больного сохранялась положительная рентгендинамика. Результатом проведенного лечения явилось повышение эффективности лечения туберкулеза с множественной и широкой лекарственной устойчивостью (МЛУ/ШЛУ-ТБ) за счет тканевой пластики и иммуномодуляции МСК. Преимущества предлагаемого способа комплексного лечения множественно лекарственно-устойчивого туберкулеза легких с применением аутологичной трансплантации МСК зафиксированы в историях болезни. Результаты исследования доказали эффективность этого метода при реабилитации больных лекарственно-устойчивыми формами туберкулеза органов дыхания. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4