Способ получения средства для профилактики инсулинорезистентности

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИНСУЛИНОРЕЗИСТЕНТНОСТИ(72) Авторы Чиркин Александр Александрович Буко Вячеслав Ульянович Балаева-Тихомирова Ольга Михайловна Толкачва Татьяна Александровна Паршонок Дмитрий Иванович(57) Способ получения средства для профилактики инсулинорезистентности, преимущественно при метаболическом синдроме или инсулиннезависимом сахарном диабете 2 типа,при котором измельчают куколки шелкопряда, экстрагируют при температуре кипения 0,85 -ным водным раствором хлорида натрия в три последовательных приема в соотношении масса - объем соответственно 15, 13 и 12, смешивают три полученные фракции экстрактов, смесь фильтруют, выдерживают в течение 24-48 часов при 3-5 С, снова фильтруют, нормируют полученный раствор 0,85 -ным раствором хлорида натрия путем доведения до содержания альфа-аминоазота 70-110 мг/л или суммы свободных аминокислот 550-850 мг/л, либо треонина 150-250 мг/л, или глутаминовой кислоты 120-180 мг/л,разливают по флаконам и стерилизуют готовый экстракт. Изобретение относится к области фармакологии, в частности к способам получения веществ, обладающих лечебными и профилактическими свойствами, и может быть использовано при изготовлении препаратов медицинского и ветеринарного назначения,предназначенных для профилактики инсулинорезистентности при лечении метаболического синдрома или инсулиннезависимого сахарного диабета 2-го типа. Известен наиболее близкий по совокупности существенных признаков и достигаемому результату к изобретению способ получения лечебного экстракта 1, который включает измельчение куколок шелкопряда, экстракцию дистиллированной водой в три последовательных приема путем нагрева до температуры кипения, предусматривающую первое экстрагирование в соотношении масса - объем 15 и слив полученного экстракта,долив к биомассе воды в соотношении масса - объем 13 и слив второй фракции экстракта,долив воды в соотношении масса - объем 12 и смешивание третьей фракции экстракта с предыдущими экстрактами, фильтрацию смеси экстрактов, выдерживание в течение 1815645 1 2012.04.30 20 часов при 2-5 С, повторную фильтрацию, доведение объема фильтрата водой до 1 литра, введение в экстракт хлорида натрия для получения изотонического раствора, разлив по флаконам и стерилизацию готового экстракта. Данный способ характеризуется сравнительной простотой осуществления, эффективностью получения экстрагируемых веществ из биомассы и предназначен для изготовления препаратов ветеринарного назначения, обладающих удовлетворительной антитоксической активностью. Существенным недостатком этого способа является то, что он, в силу присущих ему приемов осуществления, например применения дистиллированной воды, наличия отдельной операции введения хлорида натрия и др., имеет узкую область применения, т.к. изначально предназначен для получения ветеринарных препаратов с антитоксической активностью, а также не предусматривает возможность нормирования экстракта по концентрации основной фармакологически активной субстанции, что ограничивает эффективность способа по расширению области применения и спектра лечебного действия препаратов, получаемых данным способом. При этом не достигается существенное улучшение внешнего вида экстракта из-за появления буро-черного цвета, что связано с образованием пигмента меланина из аминокислоты тирозин ферментативным тирозиназным комплексом особенно в присутствии водной среды. Введение хлорида натрия в экстракт на конечной стадии его изготовления не влияет на этот процесс потемнения, а лишь создает изотоничность, но в то же время повышает длительность и стоимость процесса, т.к. предусматривает применение дополнительной операции и вещества. Технической задачей, на решение которой направлено изобретение, является создание способа получения средства для профилактики инсулинорезистентности, обладающего расширенной областью применения и спектром профилактического и лечебного действия препаратов как ветеринарного, так и медицинского назначения на его основе, например для профилактики инсулинорезистентности при лечении метаболического синдрома или инсулиннезависимого сахарного диабета 2-го типа, а также позволяющего осуществить нормирование экстракта по концентрации основной фармакологически активной субстанции, улучшить качество его внешнего вида, упростить и снизить стоимость процесса изготовления. Поставленная задача достигается тем, что при использовании существенных признаков, характеризующих известный способ получения средства для профилактики инсулинорезистентности, в соответствии с изобретением измельчают куколки шелкопряда,экстрагируют при температуре кипения 0,85 -ным водным раствором хлорида натрия в три последовательных приема в соотношении масса - объем соответственно 15, 13, 12,смешивают три полученные фракции экстрактов, смесь фильтруют, выдерживают в течение 24-48 часов при 3-5 С, снова фильтруют, нормализуют полученный раствор 0,85 ным раствором хлорида натрия путем доведения до содержания альфа-аминоазота 70110 мг/л или суммы свободных аминокислот 550-850 мг/л, либо треонина 150-250 мг/л,или глутаминовой кислоты 120-180 мг/л, разливают по флаконам и стерилизуют готовый экстракт. Сопоставительный анализ показывает, что заявляемый способ отличается от прототипа применением 0,85 -го водного раствора хлорида натрия, введением нормирования экстракта по концентрации в нем основной фармакологически активной субстанции (свободных аминокислот), иной временной выдержкой смеси экстрактов и иным процессом получения изотонического раствора, что свидетельствует о наличии признаков, отличающих заявленное изобретение от прототипа. В данном случае применение 0,85 -го раствора хлорида натрия позволяет устранить почернение экстракта и совместить с процессом экстракции операцию получения изотонического раствора, что исключает применение хлорида натрия как отдельного реагента,приводящее к снижению стоимости и упрощению процесса в целом. При этом увеличение 2 15645 1 2012.04.30 выдержки смеси экстрактов до 24-48 часов при 3-5 С и нормирование экстракта по концентрации в нем основной фармакологически активной субстанции (свободных аминокислот) позволяет расширить область применения способа и спектр профилактического и лечебного действия препаратов на его основе, т.к. повышается эффективность получения экстрагируемых веществ и обеспечивается возможность их нормирования в заданных величинах. Все это свидетельствует о достижении неочевидного, более высокого технического результата. Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Пример 1 Предварительно тщательно измельчают, например, 100 г куколок шелкопряда и заливают 500 мл 0,85 -ным водным раствором хлорида натрия в соотношении масса - объем 15. Затем смесь нагревают до температуры кипения ( 100 С), сливают полученный экстракт, а в оставшуюся биомассу доливают 300 мл 0,85 -го раствора хлорида натрия в соотношении масса - объем 13, кипятят, сливают экстракт и смешивают с первым экстрактом. В оставшуюся биомассу доливают 200 мл 0,85 -го раствора хлорида натрия в соотношении масса - объем 12, кипятят, сливают экстракт и смешивают с предыдущими экстрактами. Смесь экстрактов фильтруют, выдерживают в течение 24 часов при 3 С и повторно фильтруют для полного отделения осадка. После этого нормируют раствор по концентрации в нем основной фармакологически активной субстанции (суммы свободных аминокислот), например, способом высокоэффективной жидкостной хроматографии или нингидриновой реакции и доводят 0,85 -ным раствором хлорида натрия до объема, содержащего не менее 70 мг/л альфа-аминоазота или 550 мг/л суммы свободных аминокислот, либо 150 мг/л треонина, или 120 мг/л глутаминовой кислоты. Полученный таким образом экстракт разливают по флаконам, стерилизуют и используют в качестве средства для профилактики инсулинорезистентности. Пример 2 Предварительно тщательно измельчают, например, 100 г куколок шелкопряда и заливают 500 мл 0,85 -ным водным раствором хлорида натрия в соотношении масса - объем 15. Затем смесь нагревают до температуры кипения ( 100 С), сливают полученный экстракт, а в оставшуюся биомассу доливают 300 мл 0,85 -го раствора хлорида натрия в соотношении масса - объем 13, кипятят, сливают экстракт и смешивают с первым экстрактом. В оставшуюся биомассу доливают 200 мл 0,85 -го раствора хлорида натрия в соотношении масса - объем 12, кипятят, сливают экстракт и смешивают с предыдущими экстрактами. Смесь экстрактов фильтруют, выдерживают в течение 48 часов при 5 С и повторно фильтруют для полного отделения осадка. После этого нормируют раствор по концентрации в нем основной фармакологически активной субстанции (суммы свободных аминокислот), например, способом высокоэффективной жидкостной хроматографии или нингидриновой реакции и доводят 0,85 -ным раствором хлорида натрия до объема, содержащего не более 110 мг/л альфа-аминоазота или 850 мг/л суммы свободных аминокислот, либо 250 мг/л треонина, или 180 мг/л глутаминовой кислоты. Полученный таким образом экстракт разливают по флаконам, стерилизуют и используют в качестве средства для профилактики инсулинорезистентности. Возможность применения средства на основе заявляемого способа в медицине и ветеринарии для профилактики инсулинорезистентности при лечении метаболического синдрома или инсулиннезависимого сахарного диабета 2 типа подтверждается лабораторными испытаниями, в которых участвовало три группы крыс-самок с массой тела 215 г,по 10 животных в каждой группе. В данном случае для воспроизведения метаболического синдрома (инсулинорезистентности) животным первой группы скармливали жидкую высокожировую диету по Либеру-Де Карли в течение 90 дней и производили еженедельное взвешивание животных и определение глюкозы крови. Животным второй группы также скармливали высокожировую диету, но в течение последних 30 дней ежедневно дополни 3 15645 1 2012.04.30 тельно энтерально вводили экстракт куколок шелкопряда в дозе 7 мкг/мл (по сумме аминокислот) на 100 г массы тела. Животные третьей группы служили контролем. При этом сравнительный статистический анализ результатов экспериментальной проверки показал,что при введении экстракта, полученного предлагаемым способом, у крыс второй группы имело место статистически достоверное снижение массы тела на 8,9 , концентрации глюкозы на 12 , концентрации инсулина на 26,7 и инсулинорезистентности на 29,6 . Таким образом, экстракция куколок шелкопряда предлагаемым способом дает возможность обеспечить расширение области применения способа и спектра профилактического и лечебного действия конечного продукта на его основе. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4