Способ диагностики асцитной карциномы Эрлиха у лабораторной мыши в эксперименте

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АСЦИТНОЙ КАРЦИНОМЫ ЭРЛИХА У ЛАБОРАТОРНОЙ МЫШИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Терпинская Татьяна Ильинична Кашевский Борис Эдуардович Жолудь Антон Михайлович Кульчицкий Владимир Адамович(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(57) Способ диагностики асцитной карциномы Эрлиха у лабораторной мыши в эксперименте, включающий анализ клеток селезенки, отличающийся тем, что анализ проводят с помощью магнитофореза, при этом в магнитофоретическую ячейку помещают суспензию клеток селезенки в физиологическом растворе Эрла в концентрации 1-3 млн/мл, воздействуют на них магнитным полем напряженностью 8 кЭ, рассчитывают в суспензии долю клеток, движущихся в положительном направлении относительно градиента магнитного поля, и при ее значении, равном или меньшем 24 , диагностируют наличие асцитной карциномы Эрлиха. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к области экспериментальной онкологии. Известен способ диагностики опухолевого роста, основанный на анализе изменений клеточного состава периферических лимфоидных органов - лимфоузлов или селезенки. Он заключается в идентификации и подсчете количества клеток различных типов в клеточных суспензиях периферических лимфоидных органов. Изменения количества клеток различных типов или появление атипичных и нехарактерных для данного органа клеток расценивается как один из признаков роста опухоли 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является анализ состава суспензий клеток вторичного лимфоидного органа селезенки. Однако этот способ основан на анализе морфологических признаков исследуемых клеток, поэтому он трудоемок и требует высокой квалификации и опыта сотрудника,который оценивает визуально каждую клетку и относит ее к определенной группе, что вносит субъективизм в точность оценки. 14740 1 2011.08.30 Задачей заявляемого способа является повышение точности диагностической процедуры за счет исключения субъективной оценки при анализе изменений клеточного состава периферических лимфоидных органов. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ диагностики асцитной карциномы Эрлиха у лабораторной мыши в эксперименте, включающий анализ клеток селезенки, когда анализ проводят с помощью магнитофореза, при этом в магнитофоретическую ячейку помещают суспензию клеток селезенки в стандартном физиологическом растворе Эрла в концентрации 1-3 млн/мл,воздействуют на них магнитным полем напряженностью 8 кЭ, рассчитывают в суспензии долю клеток, движущихся в положительном направлении относительно градиента магнитного поля, и при ее значении, равном или меньшем 24 , диагностируют наличие опухоли. Основанием для разработки данного способа явилось следующее. На тело (в том числе на клетку) с объемоми магнитной восприимчивостью , взвешенное в жидкости с магнитной восприимчивостью 0 в неоднородном магнитном поле с напряженностью , действует сила(0). Под действием этой силы возникает магнитофоретическое движение клетки со скоростью 18 Здесь- диаметр клетки,- вязкость жидкости 2. Направление скорости магнитофореза зависит от знака величины 0, т.е. определяется как восприимчивостью клетки, так и восприимчивостью дисперсионной среды. При условии 0 клетка движется в направлении градиента напряженности поля(парамагнитные клетки), при условии 0 - в противоположном направлении (диамагнитные клетки), при условии 0 скорость магнитофореза равна нулю. Магнитная восприимчивость клеток определяется их молекулярным и субмолекулярным строением и зависит от типа клеток, их физиологического состояния. Изменение состава клеток селезенки вследствие развития злокачественной опухоли приведет к изменению их распределения по магнитным восприимчивостям. Эти изменения могут быть зарегистрированы по изменению процентного содержания клеток, движущихся под действием высокоградиентного магнитного поля в положительном, в сторону увеличения напряженности поля, и отрицательном, в сторону уменьшения напряженности поля, направлениях, а также процентного содержания клеток, которые практически не испытывают силового магнитного воздействия из-за близости их магнитной восприимчивости к восприимчивости дисперсионной среды. На фигуре представлены а) гистограмма распределения клеток селезенки в пробе, полученной от 20 интактных,т.е. здоровых животных, по направлениям скорости магнитофореза б) гистограмма распределения клеток селезенки в пробе, полученной от 27 мышей носителей асцитной карциномы Эрлиха по направлениям скорости магнитофореза, где серый цвет обозначает диамагнитные, с отрицательной скоростью магнитофореза, белый немагнитные, с нулевой скоростью магнитофореза, черный - парамагнитные, с положительной скоростью магнитофореза, клетки. Пример 1 В опыте использовали мышей линиимассой 18-25 г, самок. Для отбора пробы клеток животное забивают, вскрывают брюшную полость, извлекают селезенку, измельчают,продавливают через капроновое сито стеклянным пестиком, смывая клетки в пробирку стандартным физиологическим раствором Эрла 3. Затем суспензию центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин, жидкость сливают, а клетки ресуспензируют в стандартном физиологическом растворе Эрла. Для магнитофоретического анализа используют суспензию с концентрацией клеток 1-3 млн/мл. Для этого в магнитофоретическую ячейку помещают 2 14740 1 2011.08.30 исследуемую суспензию и воздействуют магнитным полем напряженностью 8 кЭ, при этом ведут съемку движения частиц в магнитном поле, после чего проводят анализ полученного изображения. Подсчет проводят не менее чем по 500 клеткам. Согласно полученным данным, при подсчете 500 клеток суспензии процентное содержание клеток с отрицательной, нулевой и положительной скоростями магнитофореза составляет соответственно 173350 . Так как доля клеток с положительным направлением движения относительно градиента магнитного поля составляет 50 , может быть сделано заключение об отсутствии в организме опухоли. Результат анализа представлен на фигуре (а) в форме диаграммы распределения клеток по направлению скорости магнитофореза. Пример 2 В опыте использовали мышей линиимассой 18-25 г, самок, и опухоль - асцитную карциному Эрлиха (АКЭ). Животному прививают опухоль подкожно в дозе 6 млн/на мышь. Пробу клеток селезенки берут на 9-й день роста опухоли животное забивают,вскрывают брюшную полость, извлекают селезенку, измельчают, продавливают через капроновое сито стеклянным пестиком, смывая клетки в пробирку стандартным физиологическим раствором Эрла. Затем суспензию центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин,жидкость сливают, а клетки ресуспензируют в стандартном физиологическом растворе Эрла. Для магнитофоретического анализа используют суспензию с концентрацией клеток 1-3 млн/мл. Для этого в магнитофоретическую ячейку помещают исследуемую суспензию и воздействуют магнитным полем напряженностью 8 кЭ, при этом ведут съемку движения частиц в магнитном поле, после чего проводят анализ полученного изображения. Подсчет проводят не менее чем по 500 клеткам. Согласно полученным данным, процентное содержание клеток с отрицательной, нулевой и положительной скоростями магнитофореза составляет 146224 . Результат анализа 500 клеток представлен на фигуре (б) в форме диаграммы распределения клеток по направлению скорости магнитофореза. Так как доля клеток с положительным направлением движения относительно градиента магнитного поля составляет 24 , может быть сделано заключение о развитии в организме опухоли. Из полученных данных видно, что доля клеток, обладающих положительной скоростью магнитофореза, снизилась с 50 у интактных мышей до 24 у опухоленосителей,т.е. уменьшилась в результате заболевания более чем в 2 раза (на 52 , 0,01). Это доказывает, что развитие опухоли сопровождается значительными изменениями характеристики магнитной восприимчивости клеток селезенки, а именно значительным уменьшением доли парамагнитных клеток. Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет сделать вывод о развитии в организме опухоли исходя из результатов анализа магнитофоретических характеристик суспензий клеток селезенки. Данный способ может найти применение в экспериментальной онкологии и медицине. Источники информации 1. Чиркин А.А. Клинический анализ лабораторных данных. - Москва Мед. литература, 2004. 2. Кашевский Б.Э., Прохоров И.В., Кашевский С.Б., Александрова Е.Н., Истомин Ю.П.,Магнитофорез и магнитная восприимчивость опухолевых клеток// Биофизика. 2006. - Т. 51. -6. - С. 1026-1032. 3. Методы культивирования клеток Сборник научных трудов // Под ред. Г.П. Пинаева. - Ленинград Наука, 1988. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4