Способ диагностики злокачественной трансформации костно-хрящевого экзостоза коленного сустава

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ КОСТНО-ХРЯЩЕВОГО ЭКЗОСТОЗА КОЛЕННОГО СУСТАВА(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр травматологии и ортопедии(72) Авторы Пашкевич Людмила Антоновна Воронович Иосиф Робертович Голутвина Наталья Олеговна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии(56) ТРОФАИЛА И.А. Клиническое значение определения содержания ДНК в остеосаркомах Автореферат диссертации. - Москва, 2002. - С. 3-20.95111156 1, 1997.38309 , 2001.(57) Способ диагностики злокачественной трансформации костно-хрящевого экзостоза коленного сустава, заключающийся в том, что проводят предварительную клиникорентгенологическую диагностику, а после операции - гистохимическое исследование гистотопографических срезов хрящевых клеток из удаленного операционного материала,причем определяют содержание ДНК в ядре клетки по методу Фельгена, РНК в цитоплазме - по методу Браше, содержание гликогена - по Бесту, ферментативную активность кислой фосфатазы - по методу Гомори, и при невысоком или незначительно увеличенном содержании ДНК и РНК, единичных мелких зернах гликогена, низкой активности кислой фосфатазы диагностируют отсутствие злокачественной трансформации костно-хрящевого экзостоза, а при повышенном содержании ДНК и РНК, увеличении количества и размеров зерен гликогена и повышении активности кислой фосфатазы диагностируют наличие злокачественной трансформации костно-хрящевого экзостоза. Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для диагностики характера опухолевого процесса коленного сустава. При выявлении опухолей нередко встречаются диагностические ошибки, особенно в начальном периоде развития патологического процесса. В настоящее время нет общепринятых патогистологических признаков для определения начальной стадии злокачественной трансформации доброкачественных опухолевых процессов, на основании которых можно было бы с достаточной уверенностью говорить о возможности злокачественного течения опухолевого процесса. Для выбора наиболее адекватной технологии хирургического лечения ранняя диагностика опухолей, а также дифференциация между доброкачественными и злокачественными новообразованиями весьма актуальна и представляет большие сложности. Это 11499 1 2009.02.28 обусловливает необходимость выработки дополнительных диагностических критериев для верификации опухолевого процесса. Известны способы диагностики злокачественных новообразований, основанные на сопоставлении клинико-рентгенологических проявлений в сопоставлении с морфологической структурой опухолей костей 1, 2. Однако из-за отсутствия характерных гистологических признаков для опухолей коленного сустава, на основании которых можно было бы с достаточной уверенностью говорить о возможности доброкачественного или злокачественного течения опухоли, ранняя их диагностика представляет большие сложности. В настоящее время морфологические данные являются основой, на которой строятся наши представления о патогенезе и развитии опухоли, доброкачественного или злокачественного течения опухоли. Наиболее близким к предлагаемому является способ исследования опухолевых клеток с помощью ДНК-проточной цитофлуорометрии, в котором определяют содержание ДНК и индекс пролиферации в клетках опухоли, а также уровень щелочной фосфатазы в сыворотке крови, что позволяет в течение 20-30 мин получить дополнительную объективную информацию о биологических характеристиках остеосаркомы, важную для клинициста с точки зрения прогноза течения остеосаркомы, оценки риска метастазирования 3, но не позволяет выделить переходную форму между доброкачественным и злокачественным течением опухолевого процесса, в частности, коленного сустава. Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, - ранняя диагностика по лабораторным признакам доброкачественного или злокачественного течения опухолевого процесса коленного сустава. Поставленная задача решается предлагаемым способом диагностики злокачественной трансформации костно-хрящевого экзостоза коленного сустава, включающим предварительную клинико-рентгенологическую диагностику, а после операции - гистохимическое исследование гистотопографических срезов хрящевых клеток из удаленного операционного материала, причем определяют содержание ДНК в ядре клетки по методу Фельгена,РНК в цитоплазме - по методу Браше, содержание гликогена - по Бесту, ферментативную активность кислой фосфатазы - по методу Гомори, и при невысоком или незначительно увеличенном содержании ДНК и РНК, единичных мелких зерен гликогена, низкой активности кислой фосфатазы диагностируют отсутствие злокачественной трансформации костно-хрящевого экзостоза, а при повышенном содержании ДНК и РНК, увеличении количества и размеров зерен гликогена и повышении активности кислой фосфатазы диагностируют наличие злокачественной трансформации костно-хрящевого экзостоза. Способ осуществляют следующим образом. У больного с начальными симптомами опухолевого процесса после изучения анамнеза заболевания с помощью рентгенографии или томографии выясняют локализацию, протяженность и характер патологического процесса. Диагноз верифицируют путем гистохимических и иммуногистохимических исследований гистотопографических срезов операционного материала больных, удаленных костно-хрящевых экзостозов и прилегающей части материнской кости, в которых определяют характер новообразования. Для гистохимического исследования берут мягкотканевые кусочки из периферической и центральной части новообразования. Определяют содержание ДНК по методу Фельгена, РНК - по методу Браше, контрольные срезы обрабатывают рибонуклеазой. Содержание гликогена в хрящевых клетках определяют по Бесту, контрольные срезы обрабатывают диастазой, ферментативную активность кислой и щелочной фосфатаз выявляют по методу Гомори. Если экзостоз в исследуемом образце характеризуется невысоким содержанием ДНК в ядре и РНК в цитоплазме, наличием мелких, единичных зерен гликогена, невысокой ферментативной активностью кислой фосфатазы, это указывает на типичный костнохрящевой экзостоз, если отмечают незначительное увеличение содержания нуклеиновых 2 11499 1 2009.02.28 кислот и гликогена в хрящевых клетках, повышенная активность кислой фосфатазы, это указывает на экзостоз с хондромным ростом, при выявлении повышенного содержания ДНК в ядре и РНК в цитоплазме, а также увеличение количества и размеров зерен гликогена и более высокой ферментативной активности килой фосфатазы можно говорить о начинающемся озлокачествлении процесса в хрящевой части экзостоза. Способ был исследован и подтвержден в клинике ГУ БелНИИТО на 210 больных (3 группы). При диагностике заболеваний основное внимание уделялось исследованию взаимосвязи между клиническими проявлениями новообразований, рентгенологическими изменениями и результатами гистохимического анализа гистотопографических срезов операционного материала больных. С целью выявления начальных признаков опухолевого роста на гистотопографических срезах особое внимание обращалось на содержание нуклеиновых кислот и гликогена в хрящевых клетках, ферментативную активность кислой фосфатазы. Первая группа больных характеризовалась невысоким содержанием ДНК в ядре и РНК в цитоплазме, наличием мелких, единичных гранул гликогена, невысокой ферментативной активностью кислой фосфатазы в хрящевых клетках. У второй группы отмечено незначительное увеличение содержания нуклеиновых кислот и гликогена в хрящевых клетках, повышенная активность кислой фосфатазы. У третьей группы экзостозов, с настоящей злокачественной опухолью, выявлено повышенное содержание ДНК в ядре и РНК в цитоплазме, а также гранул гликогена, и более высокая ферментативная активность килой фосфатазы. Примеры выполнения способа. Пример 1 Больной Б. Госпитализирован с наличием безболезненного опухолевидного образования, плотного при пальпации, интимно спаянного с костью, медленно увеличивающегося в размерах по мере роста ребенка. Появлялись ноющего характера периодические боли при направленности роста образования в сторону нервных стволов. Наблюдалась ограниченность подвижности в коленном суставе. Проведенные лабораторные исследования периферической крови и мочи отклонений от нормальных показателей не выявили. Рентгенологическая диагностика не вызвала затруднений, и картина была характерной для экзостозной хондродисплазии. Было проведено удаление костно-хрящевого экзостоза в пределах здоровой кости. Морфологическому исследованию подвергся удаленный костно-хрящевой экзостоз и прилегающая часть материнской кости. Микроскопически изучались гистотопограммы всего экзостоза. В связи с тем, что имеются случаи злокачественной трансформации костно-хрящевых экзостозов, была поставлена задача определить характер новообразования. Для этого определяли содержание нуклеиновых кислот и гликогена в хрящевых клетках, ферментативную активность кислой фосфатазы. Данный экзостоз характеризовался невысоким содержанием ДНК в ядре и РНК в цитоплазме, наличием мелких, единичных гранул гликогена, невысокой ферментативной активностью кислой фосфатазы, что указывало на типичный костно-хрящевой экзостоз. Пример 2 Больной В. Госпитализирован с наличием безболезненного опухолевидного образования, плотного при пальпации, интимно спаянного с костью. При микроскопическом изучении гистотопограммы всего экзостоза отмечено незначительное увеличение содержания нуклеиновых кислот и гликогена в хрящевых клетках,повышенная активность кислой фосфатазы, что указывало на экзостоз с хондромным ростом. Гистологически по своему строению хрящевая ткань экзостоза в отдельных участках 3 11499 1 2009.02.28 напоминала хондрому. Это еще не настоящая опухоль - хондрома, но уже и не типичный костно-хрящевой экзостоз, а переходная стадия (или грань перехода) от пограничного процесса, каковым является экзостоз, к опухолевому. Назначено дальнейшее наблюдение за больным. Пример 3 Больной С. У больного были боли, нарастающие по интенсивности, на рентгенограмме отмечена нечеткость наружного контура экзостоза и его крапчатость. Выявлено повышенное содержание ДНК в ядре и РНК в цитоплазме, а также гранул гликогена, и высокая ферментативная активность кислой фосфатазы, что позволило сделать заключение о начинающемся озлокачествлении процесса. Это подтверждено гистологически. Сопоставление особенностей клинического течения, рентгенологических изменений и гистохимического анализа показало наличие агрессивных и озлокачествленных костнохрящевых экзостозов. Таким образом, предлагаемый способ диагностики позволяет определить по гистохимическим признакам наличие доброкачественного и озлокачествленного течения опухолевого процесса коленного сустава, а также выделить переходную между ними форму,особенно в затруднительных ситуациях. Источники информации 1.. Первичные опухоли костей // . - 1997. - Вып. 4. С. 221-230. 2.. Морфометрия в гистологии. Рабочая установка для анализа изображений в патологоанатомической лаборатории // .... - 1996. - Вып. 6. - . 471-480. 3. Трофаила И.А. Клиническое значение определения содержания ДНК в остеосаркомах Дис канд. мед. наук. - 2002. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4