Ингибитор вируса лимфоцитарного хориоменингита

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ИНГИБИТОР ВИРУСА ЛИМФОЦИТАРНОГО ХОРИОМЕНИНГИТА(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Авторы Рустамова Лариса Михайловна Богданова Наталья Леонидовна Петкевич Александр Сергеевич(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(56)5162 1, 2003. БОГДАНОВА Н.Л. и др. Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы. Материалы международной научно-практической конференции. Мн., 1997. - С. 55-56. Зудин Б.И. и др. Современные проблемы инфекционной патологии человека (эпидемиология, клиника, микробиология, вирусология и иммунология). Статьи и тезисы докладовитоговой научно-практической конференции. Мн., 1998. - С. 580. БОГДАНОВА Н.Л. и др. Принципы и перспективы диагностики новых и вновь появляющихся инфекционных заболеваний. Статьи и тезисы докладов международной научно-практической конференции. - Мн., 1997. - С. 89. САБЫНИН В.М. и др. Современные проблемы инфекционной патологии человека (вирусология, микробиология,иммунология, эпидемиология и клиника). Материалынаучно-практической конференции по итогам выполнения ГНТП Инфекционные болезни 1998-2000. - Мн. ФилСерв плюс, 2001. С. 181-186.(57) Применение пищевой добавки Цинк-спирулина в качестве ингибитора вируса лимфоцитарного хориоменингита. Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано как эффективный ингибитор вируса лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ) в культуре клеток и в живом организме. Разработка эффективных химио- и других препаратов для терапии и профилактики инфекций, вызванных РНК-вирусом ЛХМ (семейство ), является задачей актуальной. Средства лечения и профилактики при этой инфекции практически отсутствуют 1. Геморрагическая лихорадка, развивающаяся при инфицировании этим вирусом, характеризуется поражением центральной нервной системы, паренхиматозных органов, развитием 11156 1 2008.10.30 геморрагического синдрома, высоко контагиозна - передается воздушно-капельным путем,протекает на фоне высокой температуры, сопровождается развитием менингита, менингоэнцефалита, могут сопутствовать артрит, миокардит и др., относится к малым иммунодефицитам. Инкубационный период составляет 7-10 дней. Источником и резервуаром инфекции, вызываемой вирусом ЛХМ, являются мыши 2-5. Кроме того, инфекция, вызываемая вирусом ЛХМ, регистрируется на территории Республики Беларусь. Наиболее близким по противовирусному эффекту является соединение оригинального синтеза изоникотиноил-гидразон 5-нитро-2-фуральдегид (изогидрофурфурол), представленный в качестве прототипа 6, 7. Недостатком прототипа является его очевидная токсичность по сравнению с заявляемым. Терапевтические дозы прототипа близки к токсичным. Соединение нерастворимо в воде, слабо - в спирте, диметилсульфоксиде, растворяется в щелочах. Задачей изобретения является поиск и расширение арсенала средств, эффективных в отношении вируса ЛХМ. Результат достигается применением препарата Цинк-спирулина в качестве ингибитора вируса лимфоцитарного хориоменингита. Препарат -спирулина , является биологически активной добавкой к пище с эссенциальным микроэлементом - цинком, представляющей собой природный растительный комплекс микроводоросли спирулины (150 мг) и двухвалентного металла цинка (5 мг). Выпускается в капсулах. Препарат нетоксичен, хорошо растворим в воде 8.-спирулина применяется при повышенном уровне сахара в крови плохих пищеварении, аппетите, обонянии, снижении функции вкусовых рецепторов нарушении функции половой системы склонности к злоупотреблению алкоголем частых простудных заболеваниях, герпесе ухудшении памяти, гиперактивности аллергических реакциях задержке роста и развития проблемах с волосами (выпадение, плохой рост), кожей (угри,псориаз), ногтями, заживлением ран. Продукция ООО БИОТИКА-С, Россия. Предложенное решение является новым и неочевидным, так как до сих пор не описано применение указанного препарата в качестве средства, которое может быть применено в качестве ингибитора вируса ЛХМ, вызывающего геморрагическую лихорадку, и предлагается к использованию по новому назначению. Это свойство выявлено впервые. Результат изобретения выражается в подавлении -спирулиной размножения вируса ЛХМ в культуре клетоки на белых беспородных мышах, является новым и высоким химиотерапевтический индекс препарата равен 16. Он достигается применением препарата в концентрациях 1600, 800, 400, 200 и 100 мкг/мл. Сущность изобретения поясняется следующими примерами. Пример 1. Токсичность исследуемого препарата изучали на культуре клеток , выращенных на дне флаконов объемом 10 мл. Разведения препарата -спирулина готовили на среде Д/МЕМ с добавлением 2 эмбриональной телячьей сыворотки в концентрациях 1600,800, 400, 200, 100 мкг/мл и в объеме 1 мл вносили на отмытый от ростовой среды клеточный монослой. Через 96 часов регистрировали под микроскопом цитодеструктивное действие препарата. Максимально переносимой концентрацией (МПК) считали 1/2 наивысшей концентрации, не вызывающей цитодеструктивных изменений клеток. Таким образом,было установлено, что МПК исследуемого препарата составляет 1600 мкг/мл. Пример 2. Двухсуточную культуру клетокзаражали вирусом ЛХМ с множественностью инфекции 0,1-0,01 бляшкообразующих единиц (БОЕ) на клетку. После адсорбции вируса на культуре клеток вносили вышеописанный препарат в концентрациях 1600-800, 400,200, 100 мкг/мл. После 72-часовой инкубации отбирали пробы и определяли инфекционную активность вируса методом редукции бляшек под агарозным покрытием. Контролем служили культуры клеток, зараженные вирусом ЛХМ в аналогичных условиях, но без 2 11156 1 2008.10.30 препарата в культуральной среде. Результат оценивали по значению химиотерапевтического индекса (ХТИ), который вычисляли в отношении максимально переносимой концентрации (МПК) к минимально активной концентрации (МАК), эффект которой находили в диапазоне 1,5-1,7 подавления размножения вируса. Установлено, что препарат -спирулина обладает выраженным ингибирующим действием в отношении аренавируса ЛХМ (табл. 1). Как видно из табл. 1 заявляемый препарат полностью подавляет размножение вируса в концентрации 1600 и 800 мкг/мл, а в концентрациях 400, 200 и 100 мкг/мл наблюдается снижение инфекционного титра на 2,5, 2,1 и 1,5 соответственно, по сравнению с контролем, где титр вируса составляет 5,5 . ХТИ препарата -спирулина, таким образом,равен 16. В то же время изогидрофурфурол (прототип) имеет ХТИ, равный 12, и обладает рядом токсических свойств. Таблица 1 Ингибирование размножения вируса ЛХМ в присутствии препарата -спирулина Концентрация Титр вируса Снижение титра ХТИ МПК/МАК мкг/млБОЕ/кл) вирусаБОЕ/кл Стандартный вирус 0 5,5 1600 0 5,5 800 0 5,5 Пример 3. Исследования препаратов в экспериментахбыли выполнены на белых беспородных мышах массой 9-11 г. Животных заражали интрацеребрально в дозе 1000 БОЕ/мышь,что составляло 10 50, в объеме 0,03 мл. Это обеспечивало 100 гибель контрольных животных. Препарат разводили на бидистиллированной воде и вводили по схеме - за 1 час до заражения, далее через 24, 48, 72, 96 часов и 5-9 сутки после заражения в дозе 500 мкг/мышь. Противовирусную активность препарата оценивали по увеличению выживаемости животных, средней продолжительности жизни (СПЖ), удлинению срока жизни(УСЖ) по сравнению с контрольной группой, не получавшей лечения (табл. 2). Таблица 2 Влияние препаратов на выживаемость белых беспородных мышей,зараженных вирусом ЛХМ Препарат В результате проведенных исследований было установлено, что -спирулина защищает от гибели животных на 70 , СПЖ - 13 дней, УПЖ - 5 дней, в то время как при при 3 11156 1 2008.10.30 менении прототипа защита значительно ниже и составляет лишь 25 , СПЖ при этом 12 дней, а УПЖ - 4 дня, по сравнению с контрольной группой животных, не получавших лечение. Таким образом, противовирусная активность предложенного препарата значительно превосходит таковую изогидрофурфурола. Источники информации 1.,,,, .,//.// , 1987. 2. Кочеровская М.Ю. Аренавирусы и их значение в патологии человека. - М. Медицина, 1991. 3. Букринская А.Г. Вирусология. - М. Медицина, 1986. - С. 302-307. 4.,,.,,,, ,,, . ,1974, 4. - . 207-213. 5., // . . . . - 1992. - -116. - . 486-488. 6. Богданова Н.Л., Сабынин В.М., Рустамова Л.М., Петкевич А.С. Поиск активных противовирусных веществ на модели вируса лимфоцитарного хориоменингита. Современные проблемы инфекционной патологии человека. Материалынаучно-практической конференции. - Мн., 2001. - С. 208-312. 7. Патент 5162, 2003. 8. Каталог природных биологически активных добавок к пище Российского производства. - М., 2002. - С. 69-70. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4