Ингибитор вируса бешенства

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Авторы Мишаева Нина Павловна Азарова Ирина Андреевна Счесленок Елена Павловна Усеня Михаил Михайлович(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(57) Применение 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5-дибензо-,е 1,4-диазепина в качестве ингибитора вируса бешенства. Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано для ингибирования вируса бешенства с помощью химиопрепаратов. Бешенство (гидрофобия) - тяжелая нейровирусная инфекция с раневым механизмом передачи и летальным исходом. Известно, что репродукцию вируса бешенства можно подавить с помощью рифампицина. Введение рифампицина лабораторным животным, зараженным вирусом бешенства,повышало их выживаемость на 601. Рифампицин применяется в комплексе с антирабической вакциной для превентивного лечения бешенства в инкубационном периоде у людей, покусанных больными бешенством животными 2, 3. Недостатком рифампицина является его сравнительно невысокая эффективность, особенно при введении больших доз вируса, а также быстрое развитие резистентности к нему. Имеется ряд других противопоказаний к назначению рифампицина 6. Известно ингибирующее действие на вирус бешенства резерпина 7. Недостатком резерпина является его недостаточно высокая эффективность, особенно при пероральном способе введения препарата (40 ), а также наличие побочного действия(снижает артериальное давление) 5. Задача изобретения - повышение эффективности ингибирования вируса бешенства с помощью химиопрепаратов. Результат достигается применением 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5 Н-дибензо,е 1,4-диазепина (коммерческое название - азалептин) для ингибирования вируса бешенства. 9522 1 2007.08.30 Результат выражается в блокаде путей проникновения вируса в центральную нервную систему (ЦНС), в повышении выживаемости животных, в удлинении продолжительности инкубационного периода заболевания. Азалептин обладает сильной нейролептической активностью в сочетании с седативными свойствами оказывает расслабляющее действие на мышцы потенцирует действие снотворных и анальгетиков. Препарат применяют при галлюцинаторно-бредовых, кататоногаллюцинаторных состояниях и состояниях психимоторного возбуждения при шизофрении, при маниакальном синдроме, при аффективной напряженности и расстройствах настроения, при психопатиях у возбужденных больных 4. Химическая формула 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5 Н-дибензо-,е 1,4 диазепин. Ингибирующее действие азалетина в отношении вируса бешенства выявлено авторами впервые и подтверждается следующими примерами. Пример 1. В опытах ин витро на культуре клеток фибробластов эмбриона курицы, зараженной вирусом бешенства (штамм ), было показано, что вирус интенсивно репродуцируется в клетках при инкубировании их при 37 С в течение 48-72 ч, при этом содержание вируса возрастает в 100 и более раз, что доказано интрацеребральным титрованием клеточной суспензии на беспородных белых мышах массой 6-7 г (метод биопробы). Наличие рабического вируса в инфицированных клетках определяли также методом флюоресцирующих антител (МФА). Если же на клеточный монослой наносили вирус бешенства и одновременно добавляли азалептин в дозе 5 мкг/мл, репродукция вируса бешенства не происходила, что было показано методом биопробы и МФА. Пример 2. В экспериментах на белых мышах, зараженных 10 ЛД 50 вируса бешенства (штамм) и получавших азалептин в дозе 250 мкг/мышь один раз в сутки в течение 5 суток (по схеме 1 ч 24 ч 48 ч 72 ч 96 ч) после заражения животных, показано антивирусное действие препарата, выражающееся в повышении выживаемости животных на 70,0 и удлинении продолжительности инкубационного периода в 1,9 раза по сравнению с контролем. В контроле, где зараженным животным не назначали азалептин, все животные погибли. Различия между опытом и контролем статистически достоверны (Р 0,01). Пример 3. Изучали действие азалептина на выживаемость инфицированных животных при комбинированном применении препарата с антирабической вакциной. Установлено, что назначение животным, зараженным 10 ЛД 50 вируса бешенства, антирабической вакцины в виде монопрепарата приводило к выживаемости 30 животных при выживаемости в контроле 8,3 белых мышей (различия между показателями выживаемости мышей в опыте и контроле статистически недостоверны). При комплексном применении азалептина с антирабической вакциной все подопытные животные выжили, в то время как в контроле погибло 90- зараженных мышей (различия статистически достоверны, Р 0,01). Пример 4. Исследовали защитное действие азалептина в комплексе с другим ингибитором вируса бешенства - метрагилом. В опыт взяли 4 группы белых мышей (по 10 особей в группе),зараженных 10 ЛД 50 вируса бешенства. Первой группе зараженных животных назначали азалептин, второй группе - метрагил, третьей - комплекс метрагила с азалептином. Четвертая группа, получавшая плацебо, служила контролем. Установлено, что в контроле выжила одна мышь из 10 (10 ). В группе мышей, получавших метрагил, выжило 2 мыши(20 ), а выживаемость животных, получавших азалептин, составила 70 . Если же зараженным белым мышам назначали азалептин в комплексе с метрагилом, все животные выживали, т.е. наблюдали аддитивный эффект. 2 9522 1 2007.08.30 Пример 5. Для оценки антивирусного действия азалептина были проведены исследования на молекулярном уровне. Исследовали наличие РНК в мозге животных, зараженных вирусом бешенства и получавших азалептин, а также азалептин в комплексе с метрагилом и антирабической вакциной. Выявление РНК вируса в мозге зараженных мышей проводили методом ПЦР с использованием тест-системы(ПЦР-ИФА) производства Всесоюзного государственного научного контрольного института (Москва). Продукты ПЦР анализировали визуально (по изменению цвета) и количественно методом ИФА по оптической плотности. Установлено, что в контроле (зараженные белые мыши, не получавшие лечения) вирус бешенства интенсивно накапливался в мозге (Е 0,4), а в мозге животных,получавших азалептин в виде монопрепарата или в комплексе с метрагилом или вакциной, показатель оптической плотности был на уровне отрицательного контроля (соответственно 0,624 0,511 и 0,427). Таким образом, впервые показано, что нейролептик азалептин обладает выраженным ингибирующим действием на вирус бешенства, подавляя репродукцию вируса в системе ин витро и ин виво. В опытах на белых мышах показано, что азалептин, применяемый в виде монопрепарата, достоверно повышает выживаемость инфицрованных животных, удлиняет инкубационный период почти в 2 раза, препятствует проникновению вируса из места инфицирования в ЦНС. Азалептин пвышает также эффективность антирабической вакцины и дает аддитивный эффект при комплексном применении с другими химиопрепаратами. Источники информации 1. Зубович И.К., Мишаева Н.П., Вотяков В.И., Самойлова Т.И. Защитное действие рифампицина при экспериментальной рабической инфекции белых мышей // Антибиотики и химиотерапия. - 1989. - Т 34. -2. - С 123-125. 2. Вотяков В.И., Самойлова Т.И., Зубович И.К. Применение рифампицина для протективного комплексного лечения бешенства в инкубационном периоде Информ. письмо / Белорус. НИИЭМ. - Мн., 1989. - 7 с. - Соавт. 3. Нехай М.Р. Рифампицин как этиотропное средство в постэкспозиционном лечении гидрофобии у людей, покусанных бешеными волками.съезд работников профилактической медицины РБ (70 лет санитарно-эпидемиологической службы). Мн., 26-27 сентября 1996. - Т. 3. Ч. 1. Современные проблемы эпидемиологии и эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями. - С. 115-119. 4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т. 1. - М. 2003. С. 71-72. 5. Зубович И.К., Мишаева Н.П., Вотяков В.И., Ковалев Н.А., Шашенько А.С., Головнева Г.П. Изучение действия резерпина при экспериментальной рабической инфекции // Вопр. вирусологии. - 1993. - Т.38. -2 - С.81-83. 6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т. 1. - М., 2003. С. 434-436. 7. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т. 2. - М., 2003. С. 317-318. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3