Способ моделирования механической желтухи в эксперименте у млекопитающего

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ МЕХАНИЧЕСКОЙ ЖЕЛТУХИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ У МЛЕКОПИТАЮЩЕГО(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Визгалов Сергей Александрович Юрченко Валерий Петрович Смотрин Сергей Михайлович Лис Руслан Евгеньевич(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) Шалимов С.А. и др. Руководство по экспериментальной хирургии. - М. Медицина, 1989. - С. 189.5402 1, 2003.2232430 1, 2004.2192669 1, 2002.(57) Способ моделирования механической желтухи в эксперименте у млекопитающего,включающий лапаротомию и выделение общего желчного протока, отличающийся тем,что обходят выделенный проток синтетической нитью на расстоянии 2-2,5 см от латерального края двенадцатиперстной кишки, проводят концы нити через полихлорвиниловую трубку с внутренним диаметром 0,5 см, введенную в брюшную полость между желчным протоком и кожным покровом, и осуществляют компрессию желчного протока дозированным натяжением нити, которую фиксируют узлом на трубке подкожно. 11088 1 2008.08.30 Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно экспериментальной хирургии. Известен способ комбинированного нарушения внешсекреторной функции печени патент 5402, 2003. Суть способа - желчный проток дренируется катетером и опускается в желчеприемник так моделируется ахолия, а при герметичном закрытии катетера моделируется холестаз. Недостатком способа является то, что возникает необходимость в повторной операции, т.е. возникает необходимость восстанавливать пассаж желчи путем реконструктивных или восстановительных операций. Во-вторых, в данном случае в послеоперационном периоде развивается ахолия, что не соответствует нашим целям и задачам. В-третьих, в представленной модели возникает необходимость дренировать тонкостенный, малого диаметра желчный проток трубкой, что является технически непростой задачей и может привести к разрыву желчного протока. Также в данном случае находящиеся снаружи трубка и желчеприемник могут быть повреждены или оторваны животным и являться источником восходящей инфекции. Наиболее близким к заявляемому является способ моделирования механической желтухи путем перевязки и пересечения общего желчного протока в сочетании с холецистэктомией Руководство по экспериментальной хирургии / под ред. С.А. Шалимова, 1989. С. 189. Недостатками данного способа является необходимость в повторной операции на животном для того, чтобы восстановить естественный пассаж желчи в двенадцатиперстную кишку и ликвидировать желтуху невозможность создавать дозированную компрессию желчного протока, а следовательно, и моделировать желтуху различной интенсивности. Задача изобретения - создание адекватной модели механической желтухи, которая позволит изучить возникающее при этом нарушение гомеостаза, разработать в соответствие с этим комплекс профилактических и терапевтических мер, а также изучить влияние декомпрессии протоков в сочетании с применением разработанной на основе модели терапии на динамику возникающих нарушений гомеостаза. Поставленная задача решается путем осуществления лапаротомии и выделения общего желчного протока у экспериментального животного (кролик). При этом отличительным моментом является то, что выделенный проток обходят синтетической нитью на расстоянии 2-2,5 см от латерального края двенадцатиперстной кишки, в брюшную полость вводят между кожным покровом и желчным протоком полихлорвиниловую трубку с внутренним диаметром до 0,5 см, в ее просвет проводят нить, после чего нить подтягивают до определенной степени компрессии или до полной обтурации протока, что позволяет моделировать механическую желтуху различной степени выраженности, формируют узел, который располагают на фиксаторе, узел с фиксатором проводят подкожно через канал в мягких тканях со стороны брюшной полости. На фигуре показан способ моделирования механической желтухи. Способ осуществляют следующим образом. Беспородным кроликам (самцы и самки) средней массой 3600 г после премедикации с использованием 50 раствора анальгина 1 мл и 1 раствора димедрола 0,5 мл внутримышечно за 20 минут до операции под внутривенным наркозом (использовался раствор тиопентала в дозе от 110 до 140 мг и раствор калипсола в дозе от 50 до 70 мг за период всего оперативного вмешательства) производят доступ к внепеченочным желчным протокам путем выполнения лапаротомии в правом подреберье. С помощью микрохирургического инструментария, после предварительного рассечения брюшины по обе стороны от протока (1), последний выделяют из окружающих тканей и производят измерение его диаметра (в среднем эта величина составляет 3 мм). Выделенный проток обходят синтетической нитью дексон (2). Синтетическую нить проводят в просвет полихлорвиниловой 2 11088 1 2008.08.30 трубки (3) с внутренним диаметром до 0,5 см. Из нити, выведенной через отверстие полихлорвиниловой трубки, которая находится подкожно (5), формируют узел (7), который располагают на фиксаторе (6) (полихлорвиниловая трубка длиной 1,5 см, внутренний диаметр 0,5 см). При подтягивании нити на 2 мм, в результате натяжения узла, диаметр протока (средняя величина 3 мм) уменьшался на 1/3 подтягивание нити на 3 мм приводило к сужению протока на 1/2, а укорочение нити на 4 мм приводило к полной обтурации протока. Узел с фиксатором проводят подкожно (5) через канал в мягких тканях (8),сформированный со стороны брюшной полости. Компрессию протока осуществляют на расстоянии 2-2,5 см от латерального края двенадцатиперстной кишки (9). В зависимости от степени сужения внепеченочного желчного протока моделируется механическая желтуха различной степени выраженности. Препятствие току желчи, а следовательно и желтуха ликвидируется в результате рассечения кожи (10) в проекции фиксатора узла (6), ликвидации узла (7) и извлечения из брюшной полости полихлорвиниловой трубки и дексоновой нити. Выше обозначенный доступ в условиях отсутствия миорелаксантов позволяет беспрепятственно выполнять манипуляции на протоках. Длина трубки определяется расстоянием между желчным протоком (1) и кожным покровом (4) переднебоковой стенки живота. Наличие фиксатора узла позволяет придавать нити, находящейся в полихлорвиниловой трубке, состояние постоянного натяжения и следовательно постоянно необходимую степень компрессии протока. Более дистальная компрессия протока приводит к развитию не только механической желтухи, но и тяжелого панкреатита, что приводит к ранней 100 послеоперационной летальности животных, а также искажает изменение гомеостаз, которые вызывает изолированная механическая желтуха. Дистальный конец полихлорвиниловой трубки, обращенный к желчному протоку, имеет форму полукруга, что позволяет избегать травмы желчного протока краями трубки, а также способствует воссозданию регулируемой компрессии желчного протока. Адекватность модели оценивали клиническим, биохимическим и морфологическим методами. Через 36 часов от момента компрессии внепеченочного желчного протока у животных развивалась выраженная желтушность склер, слизистых оболочек и кожных покровов. При биохимическом исследовании крови определялся ряд изменений характерных для механической желтухи повышение общего билирубина за счет прямой фракции,умеренно выраженная гипоальбуминемия, повышение уровня щелочной фосфатазы, гиперхолестеринемия, снижение уровня холинэстеразы, повышалась активность АсТ, АлТ в коагулограмме отличалось снижение уровня протромбинового индекса и как следствие склонность к гипокоагуляции. При морфологическом исследовании печеночной паренхимы определялись следующие характерные изменения появлялись поля некротизированных, пропитанных желчью гепатоцитов происходило скопление желчи в просвете желчных протоков, т.е. происходило формирование тромбов. Перипортально определялись единичные нейтрофилы, а в паренхиме печени встречался диффузный нейтрофилез. Также происходило нарушение балочной структуры печени. Из вышесказанного видно, что предлагаемый способ обструкции внепеченочных желчных протоков вызывает характерные изменения для механической желтухи, а следовательно, предлагаемая модель действительно позволяет изучать патогенетические механизмы возникающие при холестазе, а также влияние декомпрессии протоков в сочетании с применением до и послеоперационной патогенетически обоснованной терапии на возникающие изменения в гомеостазе и функцию печени. Приводим пример, подтверждающий возможность использования предлагаемого способа. 3 11088 1 2008.08.30 Пяти беспородным кроликам, сходным по возрасту и весу под внутривенным калипсоловым и тиопенталовым наркозом выполняли лапаротомию в правом подреберье. Выделялся магистральный внепеченочный желчный проток на расстоянии 2-2,5 см от наружного края двенадцатиперстной кишки, после чего выполнялась компрессия последнего по предложенной нами методике. Через 36 часов животных оценивали клинически, производили забор крови и печени для биохимического и морфологического исследований соответственно. При этом обнаруживалось, что у всех животных наблюдалось интенсивное желтушное окрашивание слизистых и кожного покрова, в биохимическом анализе крови отмечался значительный рост общего билирубина за счет прямой фракции, гиперхолестеринемия, гиперфосфатоземия, гипоальбуминемия, увеличивалась активность АлТ, АсТ,снижался протромбиновый индекс. При морфологическом исследовании, обнаруживались поля некрозов гепатоцитов, формирование желчных тромбов в расширенных желчных дуктулах, нарушение балочной структуры печени. Преимуществами предлагаемого способа по сравнению с прототипом является то, что нет необходимости повторно оперировать животное, чтобы ликвидировать непроходимость протоков и появляется возможность создавать дозированную компрессию желчных протоков. Также в нашей модели в отличие от прототипа желчный проток не перевязывался и не пересекался, так что в дальнейшем не требовалось восстанавливать пассаж желчи в двенадцатиперстную кишку путем выполнения реконструктивных или восстановительных операций, что технически представляется сложным и небезопасным (разрыв протока и, как следствие, вывод животного из опыта) оперативным вмешательством. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4