Гомогенный биологически активный человеческий белок или его фрагмент

07 14/47, 12 21/02 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ГОМОГЕННЫЙ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ БЕЛОК ИЛИ ЕГО ФРАГМЕНТ(72) Авторы Артур КЭМПФИЛДРене ДЕВО(57) 1. Гомогенный биологически активный человеческий белок или его фрагмент, в котором упомянутый белок или фрагмент характеризуется рекомбинантным биологически активным человеческим или мышиным противодействующим ожирению белком, свободным от белков или фрагмента белка других млекопитающих, причем фрагмент имеет биологическую активность упомянутого белка. 2. Белок по п. 1, в котором человеческий белок содержит 6. 3. Белок по п. 1, в котором мышиный белок содержит 3. 4. Последовательность оснований ДНК, содержащая первую и вторую часть, в которой а) первая часть является последовательностью гена 7, кодирующей пептиди ) вторая часть является нуклеотидной последовательностью, кодирующей мышиный о-белок, или нуклеотидной последовательностью, кодирующей человеческий о-белок. 5. Последовательность оснований ДНК по п. 4, в которой мышиный о-белок содержит 3. 6. Последовательность оснований ДНК по п. 4, в которой человеческий о-белок содержит 6. 7. Экспрессионный вектор, содержащий а) промоторную последовательность и ) последовательность оснований ДНК, кодирующую соединенный белок, причем соединенный белок содержит мышиный о-белок 3 или человеческий о-белок 6 и маркерный пептид для белка А наружной мембраны . , упомянутый экспрессионный вектор способный экспрессировать соединенный белок в клетках хозяина. 8. Экспрессионный вектор по п. 7, в котором промоторная последовательность состоит из -промотораоператора и липопротеинового промотора. 9. Способ получения биологически активного рекомбинантного человеческого или мышиного противодействующего ожирению белка, свободного от белков других млекопитающих, содержащий этапы а) конструирование экспрессионного вектора, имеющего промоторную последовательность и последовательность оснований ДНК, кодирующую соединенный белок, причем этот соединенный белок содержит 3 или 6 и маркерный пептид для белка А наружной мембраны Е.) введение экспрессионного вектора в клетку хозяина Е. , для трансформирования клетки хозяина Е.с) экспрессирование соединенного белка в клетке хозяина Е.) обработку клетки хозяина Е.буфером холодового осмотического шока, для выделения в свободном состоянии мышиного или человеческого о-белка, свободного от белков других млекопитающих и свободного от маркерного пептида. 10. Способ по п. 9, включающий в себя обработку осмотической жидкости, содержащей человеческий или мышиный противодействующий ожирению белок, сочетанием анионообменной колоночной хроматографии, колоночной хроматографии с гидрофобным взаимодействием и гель-фильтрации. 3957 1 11. Соединенный белок, содержащий мышиный противодействующий ожирению белок или человеческий противодействующий ожирению белок, и маркерный пептид для белка А наружной мембраны. 12. Соединенный белок по п. 11, в котором мышиный противодействующий ожирению белок содержит 3 и в котором человеческий противодействующий ожирению белок содержит 6. 13. Композиция, содержащая одно или несколько соединений полиэтиленгликоля и/или полипропиленгликоля с человеческим или мышиным о-белком по пп. 1-3, причем средняя молекулярная масса полиэтилен- или полипропиленгликолевых звеньев в упомянутых соединениях в пределах этой композиции находится между 15 кДа и 60 кДа. 14. Композиция по п. 13, содержащая одно или несколько соединений с формулой в которойозначает человеческий или мышиный о-белок по пп. 1-6,иявляются целыми числами, сумма которых составляет от 300 до 1500, средняя молекулярная масса полиэтиленгликолевых звеньев в упомянутых соединениях в пределах упомянутой композиции составляет от 15 кДа до 60 кДа,иявляются низшими алкилами. 15. Композиция по п. 14, в которой суммаисоставляет от 800 до 1200, а средняя молекулярная масса полиэтиленгликолевых звеньев в упомянутом соединении в пределах упомянутой композиции составляет от 35 до 45 кДа. 16. Композиция по п. 13, содержащая одно или несколько соединений с формулой,в которойозначает человеческий или мышиный о-белок по пп. 1-6,является целым числом, имеющим сумму от 300 до 1500, средняя молекулярная масса полиэтиленгликолевых звеньев в упомянутых соединениях в пределах упомянутой композиции составляет от 15 кДа до 60 кДа, аявляется низшим алкилом. 17. Композиция по п. 16, в которойимеет величину от 850 до 1000, а средняя молекулярная масса полиэтиленгликолевых звеньев в упомянутых соединениях в пределах упомянутой композиции составляет от 35 до 45 кДа.