Антитело против интерферон-?/?-связывающего белка I

Настоящее изобретение касается нового интерферон-остсвязывающего белка, способного модулировать активность различных подтипов интерферона-ос (ШК-ос), а также активность интерферона-В. Изобретение, в частности, касается клонированияантитела против указанного белка.В заявке на выдачу патента Израиля 103052 описывается И заявляется растворимый рецепторный белок интерферона-ос с молекулярной массой около 45000 Да, выявленный по методу вестерн-блоттинга с помощью моноклональных антител против рецептора интерферона-от. В указанной заявке описывается и заявляется также другой растворимый связывающий интерферон-ос белок, имеющий молекулярную массу около 40000 Да,который выявили с помощью связывания с 1251-1 РМ-ос 2 и иммуноосаждением с помощью аНТИ-ПЭМЮЪ моноклональных антител. Если их выделяют из сыворотки крови, то указанные соединения имеют молекулярную массу 50 кДа. В заявке на выдачу патента Израиля 106591 описывается и заявляется указанный выше интерферон-ос-связьхвающий белок с молекулярной массой 40000 Да (далее обозначается ШЫАВ-ВР или ШЫАВВРП), который выделяется из мочи в гомогенном виде и имеет последовательность,которая отличается от любого известного белка. ШЫАВ-ВР связывает и блокирует активность различных подтипов интерферона-ос, а также интерферона-В. По этой причине характеристики связывания ПЧЧАВ-ВР значительно отличаются от ранее описанныхрСЦСПТОРОВ интерферона на ПОВСрХНОСТИ КЛЕТОК, КОТОрЫС СООТВСТСТВУЮТ ЛИШЬВ соответствии с настоящим изобретением две комплементарные молекулы ДНКПОСЛСДОВаТСЛЬНОСТЬ ИХ ЗМИНОКИСЛОТНЬШ ОСТЗТКОВ. ВЩЗОЯТНО, обе ОНИ получаются ИЗпродуцирование двух рекомбинантных белков, обозначаемых 1 РМАВ-ВР 1 и ЕРМАВ-ВРН, в клетках млекопитающих и других клетках-хозяевах. Заявляются также поликлональное и моноклональное антитела, направленные против ШЫАВ-ВР, применимые дляблокирования рецептора интерферона, для проведения иммуноанализов и иммуноочистки1 РЫАВ-ВР 1 и ШМАВ-ВРП. 1 РМАВ-ВР 1 и РМАВ-ВРП способны модулировать активность интерферонов типа 1,т.е. различных подтипов интерферона-ос, а также интерферона-В. Таким образом, онимогут подавлять нежелательное воздействие интерферонов типа 1.Интерфероны типа 1 (ЕМ-ос, ШМ-В, и РЫ-оэ) составляют семейство близких по своей структуре цитокинов, которые обычно выделяют по их способности придавать устойчивость к вирусным инфекциям. Сообщалось о разнообразной биологической активности интерферонов типа 1, включая подавление пролиферации клеток, индукцию антигенов МНС класса 1 и некоторых других иммунорегулирующих активностях (1). Интерферон-ос и интерферон-В применимы для лечения различных вирусных заболеваний,в том числе гепатита С (2,3) и бородавок (45), а также некоторых злокачественных заболеваний, таких как волосато-клеточный лейкоз (6), хронический злокачественный лейкоз (7) и саркома Калоши (8).аутоиммунными заболеваниями, такими как системная красная волчанка (9), а такжедиабета (11). Кроме того, сообщалось, что повышенная экспрессия интерферона-ос в белом веществе микроглии может вносить вклад в патологию болезни Альцгеймера. Далее, было показано, что терапия с использованием интерферона-ос приводит в ряде случаев к нежелательным побочным эффектам, в том числе к лихорадке и неврологическим заболеваниям (12). Следовательно, существуют патологические состояния, в которых нейтрализация активности интерферона может принести пользу пациенту.Как И в случае других цитокинов, интерферон-а проявляет свою биологическую активность путем связывания на поверхности клетки с рецептором, который являетсяспецифическим для всех подтипов интерферона-ос, а также для интерферона-В (13).Дауди (14). Клонированный рецептор имеет одну трансмембранную область, внеклеточную и внутриклеточную область. При экспрессии в мыШинЫх клетках указанный рецептор придает восприимчивость по отношению к интерферону-ос человека,однако оказывает незначительное воздействие по отношению к другим видам интерферона-ос и интерферона-В, указывая на то, что в реакции на воздействие интерферона-ос и различных подтипов интерферона-В могут принимать участие дополнительный компоненты.В других исследованиях показано, что дополнительные компоненты или субъединицы рецептора вовлекаются в связывание интерферона-ос и интерферона-В (1517). Более того, сообщалось, что уже описанный рецептор (14) принимает участие в связывании всех видов интерферона-ос и интерферона-Б (18).Связывающие цитокины белки (растворимые рецепторы цитокинов) соответствуют областям связывания внеклеточного лиганда соответствующих рецепторов цитокина на поверхности клетки. Их получают либо альтернативным сплайсингом пре-мРНК, общей для рецептора на поверхности Клетки, либо протеолитическим расщеплением рецепторана ПОВСрХНОСТИ КЛЕТКИ. ПОДОбНЫС РЗСТВОрИМЫС рецепторы ранее бЫЛИ ОПИСЗНЫ, В ТОМчисле среди прочих растворимые рецепторы Пгб и 1 Р 11-у (1921), ТМР (22-24), 1 Ь 1 (2527), 1 Ь-4 (25, 28), 1 Ь-2 (29, 30), 1 Ь-7 (31) и БЫ-ос (32).В настоящем изобретении заявляются молекулы ДНК, кодирующие известные ШМос/В-связывающие белки (114106591). Указанные молекулы ДНК на самом деле кодируют два различных белка, ТРМАВ-ВРТ и ТРЫАВ-ВРП, получаемые, вероятно, от одинаковой пре-мРНК путем альтернативного сплайсинга, который приводит к образованию двух молекул мРНК, одна из которых имеет размер приблизительно 1,5 тыс. нуклеотидов, а другая имеет размер приблизительно 4,5 тыс. нуклеотидов, при этом каждая из них кодирует один из связывающих белков мРНК размером 1,5 тыс. нуклеотидов кодирует ТРМАВ-ВРТ, а мРНК размером 4,5 тыс. нуклеотидов кодирует 1 РМАВ-ВРП. Термин ТРМАВ-ВР относится как к ПЧЧАВ-ВРТ, так И К ТГЫАВ-ВРП. ТРЫАВ-ВР, выделенный из мочи, идентифицирован как РЫАВ-ВРП.Таким образом, в настоящем изобретении заявляется молекула ДНК, кодирующая ШЫ-о/В-связывающие белки, выбранные из 1 РЫАВ-ВР 1, ТРЫАВ-ВРП, слитых белков И мутеинов ТРМАВ-ВРТ и ТРЫАВ-ВРП, их функциональных производных и их активных фракций.В изобретении также заявляются реплицируемые экспрессирующие векторы,включающие указанную молекулу ДНК, трансформированные с ее помощью клеткихозяева и белки, продуцируемые указанными трансформированными клетками-хозяевами.Термин молекула ДНК включает геномные ДНК, комплементарные ДНК, синтетические ДНК И их комбинации.Изобретение относится также к молекулам ДНК, которые гибридизируются вЖССТКИХ УСЛОВИЯХ С указанными ВЫШС молекуламиИ КОДИрУЮТ бСЛКИ, ОбЛЗДЗЮЩИСтой же биологической активностью, что и молекулы ТРЫАВ-ВР.В настоящем изобретении заявляются также способы получения функционально