Антитело против интерферон-?/?-связывающего белка II

Настоящее изобретение касается нового интерферон-а/Вювязывающего белка,способного модулировать активность различных подтипов интерферона-ос НМ-а), а также активность интерферона-В. Изобретение, в частности, касается клонирования молекул ДНК,кодирующих указанный белок, его экспрессии в клетках-хозяевах и антитела против указанного белка.В заявке на выдачу патента Израиля 103052 описывается и заявляется растворимый рецепторный белок интерферона-ц с молекулярной массой около 45000 Да, выявленный по методу вестерн-блоттинга с помощью моноклональных антител против рецептора интерфероначх. В указанной заявке описывается и заявляется также другой растворимый связывающий интерферона белок, имеющий молекулярную массу около 4 0000 Да,который выявили с помощью связывания с 1251-1 Р 1 Ччх 2 и иммуноосаждением с помощью анти-ШМ-а моноклональных антител. Если их выделяют из сыворотки крови, то указанные соединения имеют молекулярную массу 50 кДа. В заявке на выдачу патента Израиля 106591 описывается и заявляется указанный выше интерферона-связывающий белок с молекулярной массой 40000 Да (далее обозначается ЧРЫАВ-ВР или ЧРМАВ-ВРП),который выделяется из мочи в гомогенном виде И имеет последовательность, которая отличается от любого Известного белка. ШЫАВ-ВР связывает И блокирует активность различных подтипов интерферона-а, а также Интерферона-В. По этой причине характеристики связывания РМАВ-ВР значительно отличаются от ранее описанныхрСЦСПТОрОВ интерферона на поверхности КЛСТОК, КОТОрЫС СООТВЕТСТВУЮТ ЛИШЬ 2В соответствии с настоящим изобретением две комплементарные молекулы ДНК(кДНК), кодирующие предшественники ШЫАВ-ВР, клонируют и определяют последовательность их аминокислотных остатков. Вероятно, обе они получаются из одного и того же гена, например, путем альтернативного сплайсинга. Описывается также продуцирование двух рекомбинантных белков, обозначаемых РЫАВ-ВРШ и ЕРЫАВ-ВРП, в клетках млекопитающих и других клетках-хозяевах. Заявляются также поликлональные и моноклональные антитела, направленные против ШРМАВ-ВР, применимые для блокирования рецептора интерферона, для проведения иммуноанализов и иммуноочистки 1 РМАВ-ВР 1 и ШЫАВ-ВРП.1 РМАВ-ВР 1 и ПЭЫАВ-ВРП способны модулировать активность интерферонов типа 1, т.е. различных подтипов интерферона-а, а также интерферона-В. Таким образом, они могутподавлять НСЖСЛЗТСЛЬНОС ВОЗДСЙСТВИС ИНТСрфСрОНОВ типаИнтерфероны типа 1 НМ-а, ШЫ-В, И 1 РЫ(0) составляют семейство близких по своей структуре цитокинов, которые обычно выделяют по их способности придавать устойчивость к вирусным инфекциям. Сообщалось о разнообразной биологической активности интерферонов типа 1, включая подавление пролиферации клеток, индукцию антигенов МНС класса 1 и некоторых других иммунорегулирующих активностях (1). Интерферон-ос и интерферон-р применимы для лечения различных вирусных заболеваний,в том числе гепатита С (2,3) и бородавок (4,5) а также некоторых злокачественных заболеваний, таких как волосато-клеточный лейкоз (6), хронический злокачественныйаутоиммунными заболеваниями, такими как системная красная волчанка (9), а такжебольных СПИД (10). Интерферон-а принимает участие в развитии ювенильного диабета 3(11). Кроме того, сообщалось, что повышенная экспрессия интерферона-о. в белом веществе микроглии может вносить вклад в патологию болезни Альцгеймера. Далее, было показано,что терапия с использованием интерферона-а приводит в ряде случаев к нежелательным побочным эффектам, в том числе к лихорадке и неврологическим заболеваниям (12). Следовательно, существуют патологические состояния, в которых нейтрализация активности интерферона может принести пользу пациенту.Как и в случае других цитокинов, интерферон-ц проявляет свою биологическую активность путем связывания на поверхности клетки с рецептором, который является специфическим для всех подтипов интерферона-а, а также для интерферона-В (13). Рецептор интерферона-ц человека (ПЧЧАК) был идентифицирован и клонирован из клеток Дауди (14). Клонированный рецептор имеет одну трансмембранную область, внеклеточную и внутриклеточную область. При экспрессии в мышиных клетках указанный рецептор придает восприимчивость по отношению к интерферону-а человека, однако оказывает незначительное воздействие по отношению к другим видам интерферона-о и интерферонаВ, указывая на то, что в реакции на воздействие интерферона-а и различных подтипов Интерферона-В могут принимать участие дополнительный компоненты.В других исследованиях показано, что дополнительные компоненты или субъединицы рецептора вовлекаются в связывание интерферона-ц и интерферона-В (15-17). Более того,сообщалось, что уже описанный рецептор (14) принимает участие в связывании всех видов интерферона-ос И интерферона-В (18).Связывающие цитокины белки (растворимые рецепторы цитокинов) соответствуют областям связывания внеклеточного лиганда соответствующих рецепторов цитокина на поверхности клетки. Их получают либо альтернативным сплайсингом пре-мРНК, общей для рецептора на поверхности клетки, либо протеолитическим расщеплением рецептора на поверхности клетки. Подобные растворимые рецепторы ранее были описаны, в том числесреди прочих растворимые рецепторы 1 Ь-6 и ШЫ-у (19-21), ТМР (22-24), ВУ 14530 С 1 2011.06.30В настоящем изобретении заявляются Молекулы ДНК, кодирующие известные ТМоъ/Вювязывающие белки (1 Ь 1 О 6591). Указанные молекулы ДНК на самом деле кодируют два различных белка, 1 РМАВ-ВР 1 И 1 РМАВВРП получаемые, вероятно, от одинаковой преМРНК путем альтернативного сплайсинга, который приводит к образованию двух молекул мРНК, одна из которых имеет размер приблизительно 1,5 тыс. нуклеотидов, а другая имеет размер приблизительно 4,5 тыс. нуклеотидов, при этом каждая из них кодирует один из связывающих белков м-РНК размером 1,5 тыс. нуклеотидов кодирует ТРЫАВ-ВРТ, а мРНК размером 4,5 тыс. нуклеотидов кодирует ТРЪТАВ-ВРП. Термин РМАВ-ВР относится как к ТРМАВ-ВРТ, так и к ТРЫАВ-ВРП. ТРЫАВ-ВР, выделенный из мочи, идентифицирован как ТРМАВ-ВРП.Таким образом, в настоящем изобретении заявляется молекула ДНК, кодирующая ТРЫ-а/В-связыватощие белки, выбранные из ТРЫАВ-ВРТ, ТРМАВ-ВРП, слитых белков и мутеинов ШЫАВ-ВРТ и РМАВ-ВРП, их функциональных производных и их активных фракций.В изобретении также заявляются реплицируемые экспрессирующие векторы,включающие указанные молекулы ДНК, трансформированные с их помощью клеткихозяева и белки, продуцированные указанными трансформированными клеткамихозяевами. Термин молекулы ДНК включает геномные ДНК, комплементарные ДНК,синтетические ДНК и их комбинации.Изобретение относится также к молекулам ДНК, которые гибридизируются в жестких условиях с указанными выше молекулами ДНК и кодируют белки, обладающие той же биологической активностью, что и молекулы ТРМАВ-ВР.В настоящем изобретении заявляются также способы получения функциональноактивных 1 РЫАВ-ВР 1 и ТРМАВ-ВРП, слитых белков, мутеинов или их активных фракций в