Биоаффинный сорбент для избирательного выделения иммуноглобулина Е

(51)01 30/48 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ БИОАФФИННЫЙ СОРБЕНТ ДЛЯ ИЗБИРАТЕЛЬНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА Е(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Кирковский Валерий Васильевич Гапанович Владимир Николаевич Голубович Владимир Петрович Мартинович Вера Павловна Ровда Игорь Михайлович Гурманчук Ирина Евгеньевна Царев Владимир Петрович(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси(57) Биоаффинный сорбент для избирательного выделения иммуноглобулина Е из плазмы крови, в котором участок полимерной цепи с лигандом представляет собой звено формулы где 1-70 - число звеньев полиакриламидной цепи между центрами иммобилизации триптофана,в виде гранулированного геля со следующим соотношением компонентов, мас. 8287 1 2006.08.30 Изобретение относится к области биоорганической химии и медицины и может быть использовано для избирательного удаления иммуноглобулинаиз плазмы крови больных бронхиальной астмой и, возможно, при лечении других аллергозависимых заболеваний. В последнее время при лечении таких заболеваний широко используются методы экстракорпоральной коррекции гомеостаза с целью удаления патологически значимых субстанций, таких как . Восстановление нормального уровня , посредством которого запускаются иммунопатологические механизмы бронхиальной астмы, является, с точки зрения современной медицины, необходимым условием для лечения этого заболевания. Наиболее эффективным методом избирательного удаленияявляется биоаффинная хроматография с использованием сорбентов, лигандами которых являются соединения,способные прочно связываться с . Известны сорбенты, специфичные относительно , где в качестве лигандов используются ковалентно пришитые к матрице такие антигены, как бытовая пыль, анти антигены белковой природы 1,2. Такие сорбенты созданы в основном для лабораторных исследований и не находят широкого применения в клинической практике из-за сложности получения, невозможности стандартизации, высокой стоимости. Близким к настоящему изобретению является иммуносорбент для , лигандом которого является триптофан, а матрицей - поливиниловый спирт 3. Однако этот сорбент обнаружил невысокую адсорбционную способность относительно , его синтез является довольно сложным процессом, кроме того, поливиниловый спирт не является полностью биологически инертным. Задачей изобретения является получение нового сорбента для избирательной сорбции из плазмы крови больных бронхиальной астмой иммуноглобулина . Задача решается тем, что в качестве полимера-матрицы используют полиакриламидный гель, а в качестве биоаффинного лиганда - -триптофан при следующем соотношении компонентов (мас. ) полиакриламид - от 5 до 10, -триптофан - от 0,1 до 0,5, вода - остальное. В заявляемом сорбенте участок полимерной цепи с лигандом имеет следующую структурную формулу где 1-70 - число звеньев полиакриламидной цепи между центрами иммобилизации триптофана. Выбор полиакриламидной матрицы обусловлен ее стабильностью, биологической инертностью, возможностью введения лиганда на стадии полимеризации. Для превращения вводимого в качестве лиганда триптофана в мономер проводят его ацилирование акрилоилхлоридом, получая -акрилоилтриптофан. Далее полученное производное используют как мономер при сополимеризации акриламида, ,-метиленбисакриламида в присутст 2 8287 1 2006.08.30 вии персульфата аммония и -тетраметилендиамина в качестве инициаторов полимеризации. Сорбент изготавливают следующим образом. Пример 1 Берут 0,204 г (1,0 ммоль) триптофана, растворяют его при перемешивании в 100 мл 2 раствора бикарбоната натрия, в раствор прибавляют каплями при перемешивании 0,192 мл (2,5 ммоль) акрилоилхлорида и перемешивают раствор магнитной мешалкой в течение 25 мин, затем фильтруют. В реакционный сосуд последовательно вносят 4,5 г акриламида, 0,5 г метиленбисакриламида. После полного их растворения прибавляют 0,36 г персульфата аммония и 0,24 мл тетраметилендиамина. Все компоненты перемешивают и оставляют для полимеризации, которая происходит спустя 3-5 мин. Гель оставляют на 30 мин, затем измельчают с использованием шприца с диаметром выходного отверстия 3 мм, опалесцирующие гранулы промывают многократно дистиллированной водой (общий объем 3 л), а затем 0,9(общий объем 1,5 л). Полноту отмывания контролируют измерением оптической плотности промывных вод на спектрофотометре в области 300-380 нм. Содержание триптофана в набухшем геле составляет 0,2-0,4 мг/мл. Отмытый гель хранят в 0,9 в холодильнике. Пример 2 Изучение сорбционных характеристик триптофансодержащего сорбента проводят в серии стендовых экспериментов по определению содержанияв сыворотке крови больных бронхиальной астмой до и после иммуносорбции. В экспериментах использовалась плазма больных с заведомо высоким уровнем(свыше 500 ке/л), полученная в результате плазмафереза. Параметры сорбции Объем плазмы - 500 мл 5 мл, скорость перфузии сыворотки через массообменник 15 мл/мин, время - 60 мин, режим перфузии - рециркуляция. Объем сорбента в колонке 10 мл. Содержаниев плазме крови изучалось методом ИФА в лаборатории иммунологии ЦНИЛ МГМИ. Исходный уровеньсоставлял 500 ке/л и выше, после сорбции 390270 ке/л. Таким образом, перфузия сыворотки больных бронхиальной астмой через триптофансодержащий иммуносорбент приводит к достоверному - на 25-49- снижению содержания . Отсутствие побочных явлений при проведении перфузии позволяет также предположить, что сорбент обладает хорошей гемосовместимостью. Источники информации 1. Чучалин А.Г. Новые методы лечения экстракорпоральная специфическая иммуносорбция // Итоги науки и техники. С. Иммунология. - 1987. - . 16. - С. 146-178. 2.,,,// . . 1991. . 563.1. . 166-171. 3..,.,. . .// . .. . 1997. . 15.1. . 101-111 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3