Способ получения пролонгированного гормонального препарата для стимуляции функциональной активности гипофиза и яичников у коров

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ГОРМОНАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ГИПОФИЗА И ЯИЧНИКОВ У КОРОВ(71) Заявитель Гродненский государственный университет им. Я. Купалы(73) Патентообладатель Гродненский государственный университет им. Я. Купалы(57) Способ получения пролонгированного гормонального препарата для стимуляции функциональной активности гипофиза и яичников у коров на основе гонадолиберина, отличающийся тем, что раствор гонадолиберина смешивают с фосфатидилхолином в весовом соотношении 501. путем внесения водного раствора гонадолиберина в стерильный стеклянный сосуд с покрывающей его внутренние стенки и дно сухой пленкой фосфатидилхолина и выдерживания в нем в течение 8 -10 часов до образования липосом. Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к ветеринарии, и может быть использовано для стимуляции секреторной активности гипофиза, активизации генеративной функции яичников и повышения оплодотворяемости животных. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату (прототипом) к предлагаемому техническому решению является способ получения препарата для стимуляции функциональной активности гипофиза и яичников у коров путем растворения в физиологическом растворе синтетического нонапептида аналога гонадотропин - релизинг гормона, известного под названием Сурфагон 1. Недостатком известного способа является то, что полученный таким образом препарат при введении его в организм в крови присутствует кратковременно и, в основном, стимулирует выработку гипофизом лютеинизирующего гормона (ЛГ) и за этот короткий промежуток времени не успевает активизировать секреторную функцию гипофиза по выработке фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), вследствие чего не происходит роста фолликулов и созревание яйцеклеток в яичниках. Овулируют только имеющиеся в половых железах фолликулы. В связи с этим сурфагон рекомендуется вводить через 48 часов повторно или же в комбинации с другими гормональными препаратами. Это снижает оплодотворяемость животных и является результатом недостаточного пролонгированного действия сурфагона, что вызывает необходимость его многократных инъекций или совместного использования других лекарственных средств. В предлагаемом препарате для стимуляции функциональной активности гипофиза и яичников у животных, включающем парэнтеральное введение сурфагона в дозе 75 мкг, согласно изобретению, раствор синтетического гонадолиберина, для придания ему пролонгирующих свойств, предварительно заключается в фосфатидилхолиновые липосомы. Сопоставительный анализ заявляемого решения с прототипом показал, что заявляемый способ получения препарата отличается от известного тем, что 10 мл раствора сурфагона с содержанием 75 мкг синтетического 2225 1 гонадолиберина, перед введением его животным, смешивается с фосфатидилхолином в весовом соотношении 501, для чего доза сурфагона помещается в стерильный стеклянный сосуд с покрывающей его внутренние стенки и дно сухой пленкой фосфатидилхолина и выдерживается в нем в течение 8-10 часов до полного растворения фосфолипида и образования липосом, которые в процессе своего образования включают в себя до 50 растворенного аналога гонадотропин - релизинг - гормона, а остальное его количество остается в несвязанном состоянии. При введении в организм сурфагоно - липосомный комплекс постепенно разрушается с высвобождением чистого гормона, способного оказывать стимулирующее действие на гипофиз и яичники, чем достигается пролонгирующий эффект. Анализ источников информации не выявил технических решений, порочащих новизну заявляемого объекта изобретения, что дает основание считать его соответствующим критерию новизна. Благодаря предварительному смешиванию раствора аналога гонадотропин - релизинг - гормона (сурфагона) с фосфатидилхолином в весовом соотношении 501 заявляемое решение обеспечивает достижение положительного эффекта - удлинение срока присутствия экзогенного синтетического гормона в животном организме до 4-5 суток, его продолжительное мягкое стимулирующее действие на гипофиз и яичники и повышение оплодотворяемости животных. Препарат используется следующим образом После акушерско-гинекологического обследования животные (через 40-60 дней после отла.) и установления диагноза Гипофункция яичников при отсутствии клинических признаков стадии возбуждения полового цикла (анафродизия) бесплодным животным для стимуляции гипофиза и половых желез назначают и вводят парэнтерально в дозе 10 мл приготовленный препарат, содержащий липосомо-сурфагонный комплекс, образующийся при контакте раствора синтетического гонадолиберина с фосфатидилхолином в весовом соотношении 501. На этапе отработки технологии приготовления липосомо-сурфагонного комплекса было установлено, что наилучший эффект от использования заявляемого препарата регистрировался при введении синтетического гонадолиберина, раствор которого не смешивался с фосфатидилхолином, а контактировал с фосфатидилхолиновой пленкой, нанесенной на стенки и дно стеклянного стерильного флакона, что увеличивало площадь соприкосновения раствора гонадолиберина с фосфолипидом и активизировало интенсивность образования липосом. Для образования фосфолипидной пленки в 100 мл органического растворителя (спирт-эфир в соотношении 12) растворяли 2 г фосфатидилхолина, полученный раствор с помощью пипетки вносили в стерильные пенициллиновые флаконы в дозе 10 мл и испаряли растворитель в слегка наклоненном положении флакона,чтобы дать возможность содержимому распределиться в виде тонкой пленки на нижней половине внутренней стенки и на дне сосуда. После этого флаконы продували азотом и герметически закупоривали пробками и алюминиевыми колпачками. В таком виде флаконы с фосфолипидом могут храниться длительный срок, причем фосфатидилхолин не окисляется. Повышение концентрации фосфатидилхолина не приводит к существенному повышению эффективности препарата по сравнению с рекомендуемым соотношением сурфагона и фосфолипида, а уменьшение этого соотношения приводит к снижению срока присутствия гормона в организме. Пример, подтверждающий возможность осуществления изобретения при использовании всей совокупности существенных признаков изобретения, указанной в его формуле Берут 2 г фосфатидилхолина и растворяют его в 100 мл органического растворителя (спирт-эфир в соотношении 12). Полученный раствор фосфолипида с помощью пипетки переносится в стерильные пенициллиновые флаконы в дозе 10 мл и испаряют растворитель, вращая флаконы в слегка наклоненном положении, чтобы дать возможность содержимому распределиться в виде тонкой пленки на нижней половине внутренней стенки и на дне сосуда. После образования пленки флаконы продуваются азотом, закупориваются резиновыми пробками и алюминиевыми колпачками. В таком виде флаконы с фосфатидилхолином хранятся до использования. Перед применением препарата во флакон с пленкой фосфолипида вносится доза сурфагона в количестве 10 мл с содержанием в ней 75 мкг синтетического аналога гонадолиберина, после чего содержимое флакона выдерживается при комнатной температуре в течение 8-10 часов. За это время происходит спонтанное образование липосом и раствор приобретает молочно-белый цвет, причем до 50 гонадолиберина оказывается включенным в липосомы, а остальное его количество остается в свободном состоянии. В приготовленном путем смешивания компонентов комплексном препарате сурфагон и фосфатидилхолин находятся в весовом соотношении 501. Препарат вводится однократно, подкожно в дозе 10 мл (75 мкг) животным с нарушенной воспроизводительной функцией, не проявляющим признаков стадии возбуждения полового цикла через 40-60 дней после отела. 2225 1 Производственное испытание эффективности предлагаемого препарата для стимуляции функциональной активности гипофиза и яичников у коров выявило, что по сравнению с наиболее часто применяемым для этой цели сывороточным гонадотропином, при использовании липоберина оплодотворяемость животных повышается на 13,1, в 2,7 раза снижается количество бесплодных коров, а выход телят от маточного поголовья увеличивается на 16,2 (акт испытания прилагается). оставитель А.И. Сорокин Редактор В.Н. Позняк Корректор Т.Н. Никитина Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 3