Трансплантат для восстановления кожи

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ТРАНСПЛАНТАТ ДЛЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ КОЖИ(71) Заявитель Государственное учреждение образования Белорусская медицинская академия последипломного образования(72) Авторы Гаин Юрий Михайлович Киселева Екатерина Петровна Демидчик Юрий Евгеньевич Богдан Василий Генрихович Шахрай Сергей Владимирович(73) Патентообладатель Государственное учреждение образования Белорусская медицинская академия последипломного образования. - 1974. - . 109. - . 370-372. СИТНИК Г.В. Медицинский журнал. 2006. -4. - С. 16-19. СИТНИК Г.В. и др. Организация работы городской клинической больницы на современном этапе. Материалы научно-практической конференции,посвященной 25-летию УЗ 10-я городская клиническая больница, 2010. С. 133-135.2230500 2, 2004.2234312 1, 2004.2271818 1, 2006.(57) Трансплантат для восстановления кожи, представляющий собой амниотическую мембрану с выращенными на ней в течение 7-10 дней мультипотентными мезенхимальными стромальными клетками жировой ткани, причем концентрация мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани, наносимых в среде ДМЕМ на амниотическую мембрану для выращивания, составляет 1106 ядросодержащих клеток в 1 мл. Изобретение относится к медицине, а именно к клеточной терапии, экспериментальной и клинической хирургии, комбустиологии, трансплантологии, и может быть использовано для восстановления поврежденных тканей путем применения сложного трансплантата, состоящего из выращенныхмультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани и амниотической мембраны, выделенной из амниотической оболочки. 18167 1 2014.04.30 Известен трансплантат для восстановления мягких тканей, представляющий собой амниотическую оболочку. Использование данного трансплантата позволяет обеспечить лишь защитную функцию кожи препятствовать потере физиологических жидкостей и биологически активных веществ, воздействию и проникновению механических, физических и инфекционных агентов 1. В связи с тем, что при обширных дефектах мягких тканей утрачиваются все слои кожного покрова, применение данного трансплантата не приводит к заживлению или полному восстановлению исходной структуры ткани, в результате чего раны остаются незаживающими в течение длительного времени. Задачей изобретения является создание трансплантата, который качественно и быстро позволит восстанавливать дефекты мягких тканей. Поставленная задача решается следующим образом. Предложен трансплантат для восстановления кожи, представляющий собой амниотическую мембрану с выращенными на ней в течение 7-10 дней мультипотентными мезенхимальными стромальными клетками жировой ткани, причем концентрация мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани, наносимых в среде ДМЕМ на амниотическую мембрану для выращивания, составляет 1106 ядросодержащих клеток в 1 мл. На фигуре представлена схема трансплантата. На амниотическую мембрану, выделенную из амниотической оболочки 1, нанесен слой мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани 2. Изготовление трансплантата амниотическую мембрану, выделенную из амниотической оболочки размером 25 см 2 укладывали в культуральную чашку. На нее наносили слой мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани, которые получали следующим образом гомогенизированную ЖТ, полученную при операции липосакции или абдоминопластики, инкубировали в течение 45 мин с 0,075 -ным раствором коллагеназытипа при 37 С. Клетки отмывали дважды центрифугированием и клеточный осадок засевали в культуральные чашки в концентрации 1-8104 ЯСК/см 2. Замену среды проводили через 24 ч после посева, а в дальнейшем - каждые третьи-четвертые сутки. По достижении культурами 80-90 -ной конфлюэнтности клетки пересевали для получения 1-3-го пассажей. Затем наносили на амниотическую мембрану в концентрации 1106 ЯСК в 1 мл среды . Замену среды проводили через 24 ч после посева, а в дальнейшем - каждые третьи-четвертые сутки. На 7-10 сутки трансплантант переносили на рану. Пример. Дефект мягких тканей моделировали на крысах-самцах с массой тела 200-230 г. Под внутримышечным комбинированным наркозом (фентанил 0,005 дроперидол 0,01 в соотношении 21, 0,5 мл на 100 г массы тела животного) кожа животного освобождалась от шерсти и в паравертебральной области спины на уровне ее середины выполнялся-образный разрез с длиной диагонального сечения 5 см, образовавшиеся кожные лоскуты отсепаровывались вверх и вниз с последующим раздавливанием зажимом Кохера дна раны. Животные были разделены на две группы 1-я группа - крысы с применением трансплантата, состоящего только из амниотической мембраны, и 2-я группа - крысы с применением сложного трансплантата, состоящего из выращенныхмультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани 2 и амниотической мембраны 1,выделенной из амниотической оболочки. Трансплантат укладывали таким образом, чтобы слой мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани прилегал непосредственно к ране. Результаты анализа планиметрического исследования показали, что при использовании сложного трансплантата при лечении дефекта мягких тканей происходит существенное ускорение репаративных процессов, что отражается в сроках полного восстановления кожи (полное заживление в первой группе наблюдалось лишь к 59-60-ым суткам, в то 2 18167 1 2014.04.30 время как во второй группе заживление наступило уже к 38-39-ым суткам). При гистологическом анализе выявляются изменения, манифестирующие выраженную биологическую активность сложного трансплантата, состоящего из выращенныхмультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани и амниотической мембраны, выделенной из амниотической оболочки, в отношении эпителиального и стромальнососудистого компонента кожи. Таким образом, применение сложного трансплантата, состоящего из выращенныхмультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани и амниотической мембраны, выделенной из амниотической оболочки, позволяет качественно и быстро восстановить дефект мягких тканей. Используемая литература 1.,3,,,... - . 109. - . 370-373. - 1974 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3