Способ ингибирования активности внеклеточных гемолизинов патогенного штамма Pseudomonas aeruginosa

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ГЕМОЛИЗИНОВ ПАТОГЕННОГО ШТАММА(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр эпидемиологии и микробиологии(72) Авторы Никандров Виталий Николаевич Пыж Анна Эдуардовна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Международный Евро-Азиатский конгресс по инфекционным болезням. Т.1. Актуальные вопросы инфекционной патологии. - Витебск, 2008. - С. 25-26. НИКАНДРОВ В.Н. и др. Совершенствование осуществления государственного санитарного надзора в Республике Беларусь. Материалысъезда гигиенистов и эпидемиологов Республики Беларусь. - Минск Минсктиппроект, 2007. - С. 205-211.2180849 2, 2002.(57) Способ ингибирования активности внеклеточных гемолизинов патогенного штамма, включающий добавление ингибитора в бесклеточный супернатант бульонной культурыс последующим инкубированием при 37 С в течение 24 часов, отличающийся тем, что в качестве ингибитора используют раствор метиленового синего в конечной концентрации 10-3-510-3 М. Изобретение относится к биологии и экспериментальной медицине, в частности к ингибированию активности гемолизинов патогенных штаммовкак одного из факторов патогенности данного микроорганизма. Известен способ ингибирования активности гемолизинов патогенных штаммов данного микроорганизма. Он заключается в том, что при добавлении к бесклеточным супернатантам бульонных культур госпитальных штаммов псевдомонад нитротетразолиевого синего в концентрации 10-3 наблюдается ингибирование гемолитической активности на 451. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является ингибирование активности гемолизинов супернатантов бульонных культур госпитальных штаммов псевдомонад при добавлении к реакционной системе вещества химической природы. Однако применяемый для ингибирования активности гемолизинов бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитальных штаммов псевдомонад нитротетразолие 15350 1 2012.02.28 вый синий является дефицитным и дорогостоящим реактивом, вызывающим гибель клеток и не относящимся к разряду фармацевтических препаратов. То есть использование нитротетразолиевого синего в качестве ингибитора гемолизинов этого микроорганизма для лечебных целей невозможно. Задачей заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего ингибировать активность внеклеточных гемолизинов патогенных (госпитальных) штаммовфармацевтическим препаратом. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ ингибирования активности внеклеточных гемолизинов патогенного штамма, включающий добавление ингибитора в бесклеточный супернатант бульонной культурыс последующим инкубированием при 37 С в течение 24 ч. В качестве ингибитора используют раствор метиленового синего в конечной концентрации 10-3-510-3 . Метиленовый синий - химическое соединение с общей формулой 1618332 является фармацевтическим препаратом - витальным красителем. В медицине метиленовый синий используется в качестве антисептического средства наружно при ожогах, пиодермии, фолликулитах, для промывания полостей при циститах и уретритах и внутривенно в качестве антидота при отравлениях цианидами, окисью углерода и сероводородом, нитритами, анилином и его производными 2. Использование метиленового синего позволяет достичь ингибирования активности гемолизинов госпитальных штаммов псевдомонад на 50-65 , исключив использование нитротетразолиевого синего, являющегося дефицитным и дорогостоящим реактивом. Пример 1. Используют образцы бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитального штамма 23/2 гоб 2, выращенного в течение 10 ч на питательном бульоне с гидролизатом кильки в стандартных условиях. Готовят две пластины мясо-пептонного агара, содержащие 3 взвесь эритроцитов барана, приготовленные как описано ранее 3. Для одной пластины эритроцитарноагаровую смесь готовят на 0,15 растворе 7,2, содержащем метиленовый синий в концентрации 10-3 . (опыт). Для второй пластины эритроцитарно-агаровую смесь готовят на 0,15 растворе 7,2 (контроль). Аликвоты образцов наносят в предварительно вырезанные в агаре лунки на обе эритроцитарно-агаровые пластины. Пластины с нанесенными пробами инкубируют при 37 С в течение 24 ч. Гемолитическую активность учитывают по площади зон лизиса эритроцитов 3. Площадь зон (в мм 2) лизиса эритроцитов (3) на опытной эритроцитарно-агаровой пластине - 437 на контрольной эритроцитарно-агаровой пластине - 2256. Следовательно, гемолитическая активность госпитального штаммаподавлялась на 81 . Пример 2. Используют образцы бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитального штамма 23/2 гоб 2, выращенного в течение 22 ч на питательном бульоне с гидролизатом кильки в стандартных условиях. Готовят две пластины мясо-пептонного агара, содержащие 3 взвесь эритроцитов барана, приготовленные как описано ранее 3. Для одной пластины эритроцитарноагаровую смесь готовят на 0,15 растворе 7,2, содержащем метиленовый синий в концентрации 510-3(опыт). Для второй пластины эритроцитарно-агаровую смесь готовят на 0,15 растворе 7,2 (контроль). Аликвоты образцов наносят в предварительно вырезанные в агаре лунки на обе эритроцитарно-агаровые пластины. Пластины с нанесенными пробами инкубируют при 37 С 15350 1 2012.02.28 в течение 24 ч. Гемолитическую активность учитывают по площади зон лизиса эритроцитов 3. Площадь зон (в мм 2) лизиса эритроцитов (3) на опытной эритроцитарно-агаровой пластине - 17010 на контрольной эритроцитарно-агаровой пластине - 3360. Следовательно, гемолитическая активность госпитального штаммаподавлялась на 50 . Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет подавлять активность внеклеточных гемолизинов госпитального штамма псевдомонад, использовать доступный ингибитор, являющийся лекарственным препаратом и безопасный для медицинского персонала и пациентов. Данный способ может найти широкое применение при разработке рациональных путей борьбы с системной псевдомонадной инфекцией. Источники информации 1. Никандров В.Н., Пыжова Н.С., Пыж А.Э. Проявление гемолитической и протеолитической активности госпитальными штаммами. В кн. Материалы Международного Евро-Азиатского конгресса по инфекционным болезням. Т. 1. Актуальные вопросы инфекционной патологии. - Витебск, 2008. - С. 24-26. 2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Изд. 15-е, перераб., испр., доп. - М. Новая Волна, 2005. - С. 950. 3. Евченко Т.А., Лютов А.Г., Алешкин В.А. Оценка качества иммуноглобулинов методом радиальной диффузии в геле. Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов. Матер. конф. Ч. 1. - Уфа,2000. - С. 148-152. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3