Способ ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ из бульонной культуры патогенного штамма Pseudomonas aeruginosa

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ФИБРИНОГЕНОЛИТИЧЕСКИХ ПРОТЕИНАЗ ИЗ БУЛЬОННОЙ КУЛЬТУРЫ ПАТОГЕННОГО ШТАММА(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр эпидемиологии и микробиологии(72) Авторы Никандров Виталий Николаевич Пыжова Нелли Семеновна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии(56) ПЫЖОВА Н.С. и др. Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки. Международная конференция. Тез. докл. Минск, 2007. - С. 63-65.11032777 , 1999.751991 1, 1997.6031087 , 2000.2182598 2, 2002. НИКАНДРОВ В.Н. и др. Современные проблемы инфекционной патологии человека (вирусология, микробиология, иммунология, эпидемиология и клиника). Материалынаучно-практической конференции. - Минск, 2001. С. 318-338.(57) Способ ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ из бульонной культуры патогенного штамма, отличающийся тем,что в качестве ингибитора используют раствор Люголя, взятый в разведении 120-180. Изобретение относится к биологии и экспериментальной медицине, в частности к ингибированию активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ патогенных штаммовкак одного из факторов патогенности данного микроорганизма. Известен способ ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ патогенных штаммов данного микроорганизма. Он заключается в том, что при добавлении к бесклеточным супернатантам бульонных культур патогенных (госпитальных) штаммовсоли двухвалентной ртути в концентрации 10-3 М наблюдается полное ингибированию фибриногенолитической активности 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является ингибирование фибриногенолитической активности бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитальных штаммов псевдомонад при добавлении к этим супернатантам химического соединения. 14797 1 2011.10.30 Однако применяемый для ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитальных штаммов псевдомонад хлорид ртути 2 является высокотоксичным соединением, способным вызвать отравления человека вплоть до летального исхода для смертельного отравления достаточно уже 0,2 г хлорида ртути 2. То есть использование хлорида ртути в качестве ингибитора внеклеточных фибриногенолитических протеиназ этого микроорганизма небезопасно для медицинского персонала и пациента. Задачей заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего ингибировать активность внеклеточных фибриногенолитических протеиназ госпитальных штаммов псевдомонад малотоксичным соединением, являющимся фармакопейным препаратом. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ ингибирования активности внеклеточных фибриногенолитических протеиназ из бульонной культуры патогенного штамма. В качестве ингибитора используют раствор Люголя в конечном разведении 120-180. Использование раствора Люголя позволяет достичь резкого (на 72-100 ) ингибирования внеклеточных фибриногенолитических протеиназ госпитальных штаммов псевдомонад, исключив использование высокотоксичного соединения - хлорида ртути. Раствор Люголя представляет собой водорастворимую смесь 1 части йода, 2 частей калия йодида и 17 частей воды, он применяется в медицине главным образом для смазывания слизистой оболочки глотки, гортани, но может назначаться и для приема внутрь 3. Пример 1. Используют 2 образца ( 1, 2) объединенного пула бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитальных штаммов 12/1 гоб 1, 74/5 гоб 4, 26/2 гоб 1, 23/2 гоб 2,74/5 гоб 3, выращенных на питательном бульоне с гидролизатом кильки в стандартных условиях. К образцу 1 добавляют раствор Люголя в конечном разведении 120, а к образцу 2 - равный объем изотонического раствора хлорида натрия, образцы перемешивают. Аликвоты двух образцов наносят на фибриноген-агаровые пластины (концентрация фибриногена составляла 5 г/л, агар-агара - 10 г/л), приготовленные на 0,05 М трис-буфере 7,4, как описано нами ранее 4. Пластины с нанесенными пробами инкубируют при 37 С в течение 24 ч. Зоны лизиса визуализируют обработкой фибриноген-агаровых пластин 2 н. трихлоруксусной кислотой. Протеолитическую активность учитывают по площади зон лизиса фибриногена 4. Площадь зон (в мм 2) расщепления фибриногена в образцах составила (3) в 1 0 в 2 - 14413. Следовательно, фибриногенолитическая активность внеклеточных протеиназ госпитальных штаммовподавлялась на 100 . Пример 2. Используют 2 образца ( 1, 2) объединенного пула бесклеточных супернатантов бульонных культур госпитальных штаммов 12/1 гоб 1, 74/5 гоб 4, 26/2 гоб 1, 23/2 гоб 2,74/5 гоб 3, выращенных на питательном бульоне с гидролизатом кильки в стандартных условиях. К образцу 1 добавляют раствор Люголя в конечном разведении 180, а к образцу 2 - равный объем изотонического раствора хлорида натрия, образцы перемешивают. Аликвоты двух образцов наносят на фибриноген-агаровые пластины (концентрация фибриногена составляла 5 г/л, агар-агара - 10 г/л), приготовленные на 0,05 М трис-буфере 7,4, как описано нами ранее 4. Пластины с нанесенными пробами инкубируют при 37 С в течение 24 ч. Зоны лизиса визуализируют обработкой фибриноген-агаровых пластин 2 н. трихлоруксусной кислотой. Протеолитическую активность учитывают по площади зон лизиса фибриногена 4. 2 14797 1 2011.10.30 Площадь зон (в мм 2) расщепления фибриногена в образцах составила (3) в 1 418 в 2 - 14413. Следовательно, фибриногенолитическая активность внеклеточных протеиназ госпитальных штаммовподавлялась на 72 . При дальнейшем разведении раствора Люголя (160) его ингибирующая способность снижается до 50 . Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет подавлять активность внеклеточных фибриногенолитических протеиназ госпитальных штаммов псевдомонад на 72-100 , использовать доступный и безопасный для медицинского персонала и пациентов ингибитор, являющийся фармацевтическим препаратом. Данный способ может найти широкое применение при разработке рациональных путей борьбы в псевдомонадной инфекцией в локальном очаге. Источники информации 1. Пыжова Н.С., Никандров В.Н. Протеолитическая активность госпитальных штаммовдействие группоспецифических ингибиторов протеиназ и фармацевтических препаратов. Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки. Международная конференция. Тез. докл. -. Минск, 2007. - С. 63-65. 2. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические реактивы. - М. Госхимиздат,1955. - С. 464. 3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Ч. 2. - Минск Беларусь, 1987. - С. 115. 4. Никандров В.Н., Пыжова Н.С., Шапчиц Н.С. Расщепление белков внутриклеточными протеиназамивлияние группоспецифических ингибиторов и перехватчиков активных форм кислорода // Доклады НАН Беларуси. - 2007. - Т. 51.3. - С. 92-97. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3