Способ прогнозирования вероятности формирования у плода врожденного порока развития

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВЕРОЯТНОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ У ПЛОДА ВРОЖДЕННОГО ПОРОКА РАЗВИТИЯ(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Плоцкий Андрей Романович Егорова Татьяна Юрьевна Наумов Александр Васильевич Дорошенко Евгений Михайлович(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(57) Способ прогнозирования вероятности формирования у плода врожденного порока развития, представляющего собой расщелину верхней губы и твердого неба, порок передней брюшной стенки или шейную гигрому, отличающийся тем, что в околоплодных водах беременной женщины определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентной детекцией уровень общего гомоцистеина и при его значении менее 2,5 мкмоль/л прогнозируют вероятность формирования у плода врожденного порока. Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, гинекологии и пренатальной диагностике, и может использоваться для прогнозирования вероятности формирования у плода врожденного порока развития. Проведя патентный поиск, нами не выявлено близкого к предлагаемому способу прогнозирования вероятности формирования у плода врожденного порока развития. Задача изобретения - обеспечение возможности прогнозирования вероятности формирования врожденного порока развития у плода в целях проведения качественной и своевременной диагностики. Указанная задача решается путем определения уровня общего гомоцистеина в околоплодных водах беременных женщин методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ( - -) с флуоресцентной детекцией. При уровне общего гомоцистеина в околоплодных водах менее 2,5 мкмоль/л прогнозируют высокую вероятность формирования у плода врожденного порока развития, представляющего собой расщелину верхней губы и твердого неба, порок передней брюшной стенки (омфалоцеле, гастрошизис) или шейную гигрому. Способ осуществляют следующим образом. Околоплодные воды могут быть получены при трансабдоминальном амниоцентезе. Околоплодные воды в количестве 1 мл отбирают автоматической пипеткой, помещают в пробирку, замораживают при температуре - 18 С. В дальнейшем образцы околоплодных 12750 1 2009.12.30 вод хранят при температуре - 78 С до момента проведения анализа. Уровень общего гомоцистеина в околоплодных водах определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ( - -) с флуоресцентной детекцией с использованием высокореагентного восстановителяфосфина и флуоресцентного маркра - ( 721,34-) фирмы(Германия) на аппарате 1100. В день проведения анализа образцы замороженных околоплодных вод размораживали при комнатной температуре. 50 мкл околоплодных вод смешивали с 5 мкл раствора ТСЕР 2- (100 мг/мл), после чего оставляли при комнатной температуре на 30 минут. Затем осаждали белки добавлением 50 мкл 10 раствора ТХУ (трихлоруксусная кислота) и центрифугировали при 4 С в течение 15 мин при 16000 . В микропробирку объемом 200 мкл, содержащую 2 мкл 1,55 М , 12,5 мкл 0,125 М боратного буфера с 200 мг/л ЭДТА, рН 9,5 и 5 мкл раствора - ( 721,34-) (1 мг/мл) в аналогичном буфере, вносили 10 мкл супернатанта и инкубировали 1 час при 60 С. После охлаждения при комнатной температуре в систему вводили 10 мкл реакционной смеси,,/ . . - 1997.- . 43(4). - . 687-688. Разделение осуществляли на колонке Диасорб 130 С 16 Т, 3250 мм, 7 мкм. Подвижная фаза 0,1 М 24, 17 мМ СН 3 СООН, рН 3,65, 40 мг/л ЭДТА, 3 ацетонитрила. Скорость потока 0,6 мл/мин, температура колонки 30 С. Детектирование осуществлялось по флуоресценции, 379/510 нм. Определения проводили на хроматографической системе 1100, содержащей 4-канальный градиентный насос, термостат колонок, автосамплер и детектор флуоресценции. Регистрация хроматограмм и их количественная обработка осуществлялись с помощью 10.01. При уровне общего гомоцистеина в околоплодных водах менее 2,5 мкмоль/л прогнозируют высокую вероятность формирования у плода врожденного порока развития, представляющего собой расщелину верхней губы и твердого неба, порок передней брюшной стенки или шейную гигрому. Полученные результаты обработаны с помощью методов непараметрической статистики с использованием стандартных компьютерных программ 6.0,. Рассчитывались медиана, 25 и 75 процентили (, 25 , 75 ). Сравнение групп осуществляли с помощью критерия Манна-Уитни. При помощи метода четырехпольных таблиц рассчитывались основные операционные характеристики теста определения уровня общего гомоцистеина в околоплодных водах чувствительность,специфичность, прогностическая ценность положительного результата. Для доказательства заявляемого способа проведено исследование уровня гомоцистеина в околоплодных водах у 36 пациенток, которые были разделены на 2 группы. Основную группу составили 18 пациенток, у которых имелись различные виды врожденных пороков развития плода, подтвержденные при патологоанатомическом исследовании абортусов. Группу сравнения составили 18 пациенток, у которых беременность была прервана по немедицинским показаниям, и при проведении патологоанатомического исследования врожденных пороков развития плода выявлено не было. Околоплодные воды были получены у всех пациенток при проведении трансцервикального амниоцентеза под ультразвуковым контролем. Уровень общего гомоцистеина в околоплодных водах у пациенток основной группы и группы сравнения представлены в таблице. 12750 1 2009.12.30 Значения уровня общего гомоцистеина (мкмоль/л) в околоплодных водах у пациенток основной группы и группы сравнения Гомоцистеин Исследуемые группы Р(25- 75 ) Расщелины верхней губы и твердого неба (6) 2,18(1,93-2,33) р 0,05 Пороки развития передней брюшной стенки (8) 2,27(1,83-2,86) р 0,05 Шейная гигрома (4) 1,97(1,96-2,04) р 0,01 Всего (18) 2,04(1,39-2,50) р 0,001 Группа сравнения (18) 3,74(2,87-6,93) При уровне общего гомоцистеина в околоплодных водах менее 2,5 мкмоль/л диагностическая чувствительность теста составляет 71,4 , диагностическая специфичность 83,3 , прогностическая ценность положительного результата теста - 76,96 . Таким образом, заявляемый способ прогнозирования вероятности формирования у плода врожденного порока развития позволяет сформировать группы риска среди беременных женщин для проведения дополнительных диагностических мероприятий с целью подтверждения или исключения некоторых видов врожденных пороков развития плода. Данный способ может быть применен в работе медико-генетических консультаций и перинатальных центров для прогнозирования высокой вероятности формирования врожденных пороков развития плода и в качестве дополнительного диагностического критерия для выявления расщелин верхней губы и твердого неба, пороков передней брюшной стенки и шейной гигромы у плода. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3