Способ комплексной оценки качества спермы хряков

05 0 0 СПОСОБ КОМПЛЕКСНОЙ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ0 0 0 Заявитель Республиканское унитар ное предприятие Институт животноводства Национальной академии наук Беларуси 003 0 000 2 0 Авторы Шейко Иван Павлович Будевич Александр Иванович Будевич Иван Иванович Минина Наталья Генриховна Богданович00 3 0 Патентообладатель Республиканское унитарное предприятие Институт животноводства Национальной академии наук Беларуси 003 0 0Способ комплексной оценки качества спермы хряков 0 включающий смешивание спермы с флуоресцентным индикатором с последующим микроскопическим анализом 0 отличающийся тем 0 что сначала свежеполученную сперму разбавляют глюкозо-хелатоцитратно-сульфатной средой и оценивают спермии на подвижность 0 а затем при получении положительной оценки определяют степень повреждения акросомной области живых спермиев 0 при этом сперму в соотнощении 0 5 на предметном стекле смещивают с 0 00 5 0 00 0 5 раствором флуоресцентного индикатора акридинового желтого 0 приготовленным на 000 М фосфатном буфере 0 накрывают покровным стеклом 0 фиксируют на столике с обогревом при температуре 5 0 С и просматривают в темном поле микроскопа при увеличении в 0 0 0 - 0 0 0 0 раз 0 подсчитывая живые спермии 0 флуоресцирующие розовым цветом 0 в 0 0 -0 2 полях зрения 0 и если степень повреждения их акросом составляет не более 00 то сперму считают пригодной для осеменения.Изобретение относится к животноводству 0 в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных 0Известен способ оценки качества замороженно-оттаянной спермы крупного рогатого скота 0 включающий морфологическую оценку сперматозоидов по состоянию акросом на движущихся спермиях в разбавленной жидкой фракции белка куриного яйца с использованием микроскопа с темнопольным конденсором 0 0 0 0Недостатком данного способа является невозможность дифференцировки степени и форм нарушения целостности акросом спермиев ввиду недостаточной четкости отображения акросомного аппарата сперматозоидов вследствие чего можно определить только лищь отсутствие или набухание акросомной области 0 а не ее деформацию 0 перфорацию и зернистый распад 0 что является одной из причин отсутствия оплодотворения ооцитов и из-за чего оценка и прогноз качества спермы могут быть неточнь 1 ми 0Известен также способ определения оплодотворяющей способности спермы. включающий смешивание спермы с флуоресцентным красителем. и по скорости изменения окраски спермиев судят об оплодотворяющей способности эякулятов 2 1 .Недостатком данного способа является полное отсутствие видимости акросомной области спермиев на живых окрашенных спермиях. без чего невозможна оценка полноценности спермы по акросоме. отвечающей за проникновение сперматозоида через оболочку яйцеклеткиЗадача изобретения - повышение эффективности оценки разбавленной спермы в биотехнологии искусственного осемененияСущность изобретения Способ комплексной оценки качества спермы хряков. включающий смешивание спермы с флуоресцентным индикатором с последующим микроскопическим анализом. Причем сначала свежеполученную сперму разбавляют глюкозохелато-цитратно-сульфатной средой и оценивают спермии на подвижность. а затем при получении положительной оценки определяют степень повреждения акросомной области живых спермиев При этом сперму в соотношении 1 5 на предметном стекле смешивают с 12.05-11.12 15 раствором флуоресцентного индикатора акридинового желтого. приготовленным на 1 .8 М фосфатном буфере. накрывают покровным стеклом. фиксируют на столике с обогревом при температуре 5 0 С и просматривают в темном поле микроскопа при увеличении в 8 0 0 - 1 0 0 0 раз. подсчитывая живые спермии. флуоресцирующие розовым цветом. в 1 0 - 1 2 полях зрения Если степень повреждения их акросом составляет не более 1 то сперму считают пригодной для осемененияСпособ осуществляют следующим образом.После положительной оценки спермы на подвижность на обезжиренное предметное стекло наносят некоторое количество флуоресцентного индикатора 0 .0 0 5 -0 .0 1 5 раствора акридинового желтого. приготовленного на 1 .8 М растворе фосфатного буфера затем к нему добавляют сперму в 5 раз меньшего объема. осторожно смешивают. делают мазок. накрывают покровным стеклом и на 1 0 -1 5 секунд помещают на столик с обогревом при температуре 5 0 С для фиксации. Далее переносят образец под люминесцентный микроскоп. например Люмам-РЭоснащенный контрастно-фазовым устройством КФ-д У 4 2 или направляющей с отражателем темного поля Г ТП 1. при этом используются светофильтры БСБ -2 и ФС 1 - 1 . а на окулярах - ЖС-Э с целью наиболее контрастно-яркой флуоресценции спермиев и свечения акросом В темном поле микроскопа видны живые спермии. которые флуоресцируют розовым цветом. а мертвые - голубым. причем их окраска со временем не изменяется. Отчетливо различаются спермии с нормальной акросомой и с различными формами ее повреждения В 1 0-1 2 полях зрения при увеличении в 8 0 0 1 0 00 раз подсчитывают количество живых спермиев с неповрежденной и поврежденной акросомой отсутствие набухание. деформация. перфорация. зернистый распад). мертвые спермии не учитываются Пригодной для использования считается сперма с наличием повреждений акросомы не более 1. При превышении этого показателя доза спермы для осеменения свиноматок увеличивается на величину с учетом принятого в хозяйстве количества подвижных спермиев в спермодозеТаким образом. предложенный способ позволяет с высокой точностью определить пригодность спермы к использованию в технологии искусственного осеменения. принять меры по повышению эффективности воспроизводства стада и рационально использовать высокоценный генетический материал в совершенствовании разводимых пород.Национальный центр интеллектуальной собственности. 2 2 0 0 3 4 . г Минск. ул Козлова. 2 0 .