Способ оценки качества ооцитов крупного рогатого скота

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ООЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(71) Заявитель Республиканское унитарное предприятие Институт животноводства НАН Беларуси(72) Авторы Голубец Леонид Викторович Шпаковская Ольга Анатольевна Будевич Иван Иванович(73) Патентообладатель Республиканское унитарное предприятие Институт животноводства НАН Беларуси(57) Способ оценки качества ооцитов крупного рогатого скота, отличающийся тем, что оценку осуществляют по величине внутриклеточного потенциала (ВКП), измеряемого перед поставкой ооцитов на созревание, при этом к отличному качеству (5 баллов) относят ооциты, ВКП которых составляет более 7,0 мВ, к хорошему качеству (4 балла) - ооциты,ВКП которых измеряется в пределах от 4,0 до 7,0 мВ, и к удовлетворительному качеству(3 балла) - ооциты, ВКП которых измеряется в пределах от 1,5 до 4,0 мВ.(56) Методические рекомендации по оценке качества эмбрионов крупного рогатого скота при трансплантации. - Дубровицы, 1984. - С. 21, 22.5541081 , 1996.95/2810 1.1768153 1, 1992.96/15732 1. Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к биотехнологии воспроизводства крупного рогатого скота. Известен морфологический метод оценки качества и жизнеспособности половых клеток сельскохозяйственных животных, полученных от коровы-донора, при культивировании вне организма. Жизнеспособность ооцитов из яичников коров определяют с помощью голубого красителя Эванса, по состоянию хроматина культивируемых ооцитов при цитогенетическом анализе, включающем выдерживание ооцит-кумулюсных комплексов 1015 мин в 0,9 -ном растворе цитрата натрия, освобождение ооцитов от кумулюса, перенесение их на предметное стекло, нанесение на 5 минут нескольких капель смеси, состоящей из ледяной уксусной кислоты и метанола в соотношении 13, окрашивание в течение 10 мин 0,2 -ным раствором азурэозина с последующим микроскопическим исследованием. Оценку хорошего качества (4 балла) ооциты получают, если кумулюс компактный,многослойный, плотно прилегающий к ооциту, ооплазма имеет мелкозернистый вид и 5700 1 равномерно заполняет прозрачную оболочку, которая равномерно распределена по ширине, округлая по форме и опалесцирует. Отклонения от выше перечисленных требований снижает качество ооцитов и величину их бальной оценки (Методические рекомендации по оценке качества эмбрионов крупного рогатого скота при трансплантации. - Дубровицы,1984. - С. 21-23). Однако данный способ оценки довольно субъективный, зависит от квалификации оценщика, сложен и дорог в исполнении. Задача изобретения - повышение точности оценки качества ооцитов крупного рогатого скота. Сущность изобретения заключается в том, что оценка качества ооцитов крупного рогатого скота осуществляется по величине внутриклеточного потенциала (ВКП), измеряемого перед поставкой ооцитов на созревание, при этом к отличному качеству (5 баллов) относят ооциты, ВКП которых составляет более 7,0 мВ, к хорошему качеству (4 балла) ооциты, ВКП которых измеряется в пределах от 4,0 до 7,0 мВ, и к удовлетворительному качеству (3 балла) - ооциты, ВКП которых измеряется в пределах от 1,5 до 4,0 мВ. Способ осуществляют следующим образом. Ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) получают из яичников коров сразу же после убоя животного на мясокомбинате. Внутриклеточный потенциал определяют с использованием микроэлектродного усилителя ИС-01 И в милливольтах (мВ). После регистрации ВКП, ооциты помещают в питательную среду ТС-199 и культивируют в течение 24 ч при 38,7 С, максимальной влажности и в присутствии 5 СО 2 в воздухе. После этого ооциты оплодотворяют спермой проверенного быка-производителя и продолжают культивирование до стадии морулы-бластоцисты. При величине ВКП выше 7,0 мВ ооциты относят к отличному качеству (5 баллов), при ВКП от 4,0 до 7,0 мВ ооциты относят к хорошему качеству (4 балла), при ВКП от 1,5 до 4,0 мВ - к удовлетворительному (3 балла). Ооциты с бальной оценкой 5 и 4 оплодотворяют в первую очередь. По мере необходимости используют и ооциты с 3-х бальной оценкой. Ооциты с ВКП меньше, чем 1,5 мВ выбраковывают. Эффективность способа определяли по выходу жизнеспособных ооцитов после созревания вне организма животного. Данные опыта приведены в табл. 1. Таблица 1 Величина ВКП, мВ 4,0-7,0 Более 7,0 Отличная 50 7 12,5 14 25,0 29 51,8 Жизнеспособных 1 14,3 13 99,8 27 93,1 Хорошая 54 5 9,2 26 48,1 23 42,6 Жизнеспособных 24 92,3 22 95,6 Удовлетворительная 48 33 68,7 11 22,9 4 8,3 Жизнеспособных 4 12,1 10 90,9 4 100,0 Всего 152 45 29,6 51 33,6 56 36,8 Жизнеспособных 5 11,1 47 92,2 53 94,6 Кроме того, высокую точность способа оценки качества ооцитов крупного рогатого скота подтверждают показатели исследований, доказывающих, что абсолютное большинство эмбрионов, полученныхна стадии морулы-бластоцисты, получены из ооцитов, бальная оценка которых соответствовала 4-5 баллам, величина ВКП у которых была не ниже 4 мВ (табл. 2). Морфологическая оценка ооцитов Величина ВКП, мВ 4-7 Оценка Получено ооцитов эмбрионов Таким образом, использование предложенного способа оценки качества ооцитов в биотехнологии воспроизводства крупного рогатого скота позволит точнее определять качество будущих эмбрионов и получать более жизнеспособный молодняк. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.