Способ получения почек дуба черешчатого, пригодных для использования в качестве эксплантов

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЧЕК ДУБА ЧЕРЕШЧАТОГО,ПРИГОДНЫХ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В КАЧЕСТВЕ ЭКСПЛАНТОВ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт леса Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Кулагин Дмитрий Валерьевич Падутов Владимир Евгеньевич(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт леса Национальной академии наук Беларуси(57) Способ получения почек дуба черешчатого, пригодных для использования в качестве эксплантов, заключающийся в том, что механически отделенные от побега дуба черешчатого почки промывают последовательно моющим средством, проточной водой, стерилизующим раствором и стерильной водой, удаляют кроющие чешуи почек в 50 -ном этаноле, проводят стерилизацию поверхности почек путем их выдерживания в течение 13 мин в диациде, после чего отмывают почки от диацида стерильной водой. Изобретение относится к области культуры клеток, тканей и органов растений и может быть использовано в лесной селекции и биотехнологии, при производстве лесного посадочного материала и озеленении для получения асептической культуры меристем дуба черешчатого. Большинство известных способов стерилизации эксплантов, выделяемых из почек, на начальном этапе включают обработку материала раствором поверхностно-активных веществ с последующим промыванием проточной водой. В имеющихся источниках литературы описаны два основных варианта последующей стерилизации. В первом из них сначала осуществляется основной этап стерилизации, а затем проводится снятие кроющих чешуй, во втором последовательность действий обратная (сначала снятие чешуи, а затем стерилизация). Основным этапом стерилизации является последовательная обработка эксплантов раствором этанола в концентрации 70 , затем растворами, содержащими активный хлор в концентрации, близкой к 2 , или соединениями ртути 1-5. Недостатком данных способов стерилизации при работе с почечными эксплантами дуба черешчатого является высокий процент эксплантов, загрязненных нежелательной микрофлорой и не способных давать начало культуре меристем. Задача, на решение которой направлено наше изобретение, заключается в таком способе стерилизации эксплантов дуба черешчатого, при котором значительно снижается уровень контаминации во вновь получаемых культурах тканей. 18213 1 2014.06.30 Задача решается выполнением технологических операций, приведенных ниже, в две стадии. Для выполнения первой из них производится механическое отделение верхушечных и боковых почек от побега растения. Для удаления пыли и других нежелательных загрязнений почки сначала промывают в растворе моющего средства, а затем в проточной воде в течение 40-60 мин. После чего проводится поверхностная стерилизация эксплантов (первая стадия) посредством их промывания в растворе 1-3 -ного хлорсодержащего агента (гипохлорид натрия) и детергента в течение 10-15 мин, остатки стерилизующего раствора удаляют с поверхности эксплантов посредством их промывания стерильной водой. Последующая стерилизации проводится в условиях ламинарного шкафа. Кроющие чешуи почек удаляют в 50 -ном растворе этанола, после чего проводят поверхностную стерилизацию полученных эксплантов посредством их выдерживания в течение 1-3 мин в растворе ртутьсодержащего стерилизующего агента диацида. Остатки стерилизующего раствора удаляют с поверхности эксплантов путем их промывания стерильной водой. На фигуре изображен сравнительный анализ использования различных способов стерилизации почечных эксплантов дуба черешчатого. Пример. Эффективность предложенного способа иллюстрирует фигура, где 1 - одноэтапная стерилизация до снятия кроющих чешуй (последовательно 70 -ный р-р этанола и диацид), 2 - одноэтапная стерилизация проводится после снятия кроющих чешуй (последовательно 70 -ный р-р этанола и раствор моющего средства ), 3 - одноэтапная стерилизация проводится после снятия кроющих чешуй (последовательно 70 -ный р-р этанола и диацид), 4 - стерилизация осуществляется до и после снятия кроющих чешуй, которое производится в условиях ламинар-бокса (заявляемый способ стерилизации). Описанный способ стерилизации отличается простотой и позволяет без освоения особых навыков в значительной мере (в 2-5 раз) повысить выход эксплантов, не имеющих признаков микробной контаминации. Источники информации 1. Самусь В.А. Методика микроразмножения подвоев яблони// Плодоводство. 2006. - Т. 18. - Ч. 2. - С. 146-155. 2..// . - 2008. - . 22. - . 597-602. 3..// Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 2