Способ получения зигот у козы-донора, пригодных для микроинъекции рекомбинантной ДНК

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗИГОТ У КОЗЫ-ДОНОРА, ПРИГОДНЫХ ДЛЯ МИКРОИНЪЕКЦИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК(71) Заявитель Республиканское унитарное предприятие Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по животноводству(72) Авторы Будевич Александр Иванович Шейко Иван Павлович Чарторийский Василий Геннадьевич Пайтеров Сергей Николаевич Кирикович Юрий Константинович Шевцов Игорь Николаевич Заремба Наталья Леонидовна Сапсалев Сергей Александрович Козлов Сергей Владимирович Михедова Ирина Владимировна Лукашевич Татьяна Николаевна Петрушко Елена Владимировна(73) Патентообладатель Республиканское унитарное предприятие Научнопрактический центр Национальной академии наук Беларуси по животноводству(56) ГОЛЬДМАН И.Л. и др. Доклады академии наук. - 2002. - Т. 384. -5. . 699-703. ЧАРТОРИЙСКИЙ В.Г. Актуальные проблемы интенсификации производства продукции животноводства. Тезисы докладов международной научно-производственной конференции. - Жодино, 2005. - . 77. БУДЕВИЧ А.И. и др. Зоотехническая наука Беларуси Сб. научн. трудов. Т. 42. - Жодино, 2007. - С. 15-21.(57) Способ получения зигот у козы-донора, пригодных для микроинъекции рекомбинантной ДНК, включающий индукцию суперовуляции у козы-донора зигот фолликулостимулирующим гормоном, выделенным из гипофиза свиньи, выявление наступления охоты, осеменение козы-донора зигот двукратно с интервалом в 6 ч, извлечение зигот после окончания эструса, отличающийся тем, что зиготы, пригодные для микроинъекции рекомбинантной ДНК, извлекают хирургическим путем через 16-18 ч после окончания эструса. Изобретение относится к животноводству, в частности к биотехнологии трансгенеза по пересадке микроинъецированного генной конструкцией биоматериала коз. В последнее время исследователи разных стран проявляют большой интерес к вопросам трансплантации эмбрионов с целью поиска путей повышения эффективности технологии создания трансгенных сельскохозяйственных животных. Один из этих вопросов - непредсказуемость результатов гормональной обработки животных с целью вызывания суперовуляции и трудность точного определения времени вымывания зигот из яйцеводов животных-доноров. Известен способ получения датированных зигот у коз-доноров для проведения микроинъецирования генной конструкции в пронуклеусы, включающий вызывание множественной овуляции у коз-доноров, определение сроков начала и окончания охоты у животных, осеменение животных и расчет времени извлечения биоматериала хирургическим способом 1. Недостатками данного способа являются трудоемкость при проведении осеменения животных, повышение их стрессчувствительности, существенная сложность при расчете 17889 1 2013.12.30 временных параметров извлечения биоматериала и вследствие этого низкий выход пригодных для микроинъекции рекомбинантной ДНК зигот коз, снижающий общую эффективность проведения работ по трансгенезу. Задача изобретения - повышение выхода биоматериала коз на стадии пронуклеусов с целью своевременного проведения процедуры микроинъекции чужеродной ДНК. Сущность изобретения. Способ получения зигот у козы-донора, пригодных для микроинъекции рекомбинантной ДНК, включающий индукцию суперовуляции у козы-донора зигот фолликулостимулирующим гормоном, выделенным из гопофиза свиньи, выявление наступления охоты, осеменение козы-донора зигот двукратно с интервалом в 6 ч, извлечение зигот после окончания эструса, отличающийся тем, что зиготы, пригодные для микроинъекции рекомбинантной ДНК, извлекают хирургическим путем через 16-18 ч после окончания эструса. Способ осуществляют следующим образом. После отбора коз-доноров подвергают гормональному вызыванию суперовуляции с использованием ушного импланта и фолликулостимулирующего гормона, полученного из гипофиза свиней, после извлечения ушного импланта проводят контроль начала охоты и двукратно с интервалом 6 ч проводят осеменение доноров, через 16-18 ч после выявления окончания эструса проводят извлечение биоматериала у животных. Пример. Для проверки эффективности предложенного способа был проведен научно-производственный опыт по изучению выхода зигот на стадии пронуклеусов. Для этого коз-доноров биоматериала разделили на две группы опытную и контрольную. Опытная группа доноров была обработана фолликулостимулирующим гормоном,полученным из гипофиза свиней. Осеменение доноров в опытной группе осуществляли сразу после выявления в охоте двукратно с интервалом 6 ч. Извлечение биоматериала проводилось через 16-18 ч после окончания эструса у животных. В контрольной группе доноров осеменение животных осуществлялось общепринятыми методами, а извлечение биоматериала проводилось через 28-30 ч после окончания охоты у коз. Результаты по выходу пригодных для микроинъекции зигот приведены в таблице. Показатели Опыт Контроль Обработано коз-доноров,21 12 Количество овуляций на донора,16,792,49 15,912,26 Количество пригодных к микроинъецированию 4,571,43 3,180,80 зигот на донора,0,01. Из данных таблицы видно, что использование разработанного способа позволяет достоверно (0,01) увеличить выход пригодных для микроинъекции зигот на донора. Таким образом, результаты опыта показывают, что снижение кратности осеменения(четырежды в контрольной группе и два в опытной) не влияет на оплодотворяемость клеток при индукции суперовуляции у животных и снижает трудозатраты при проведении работ, а использование ФСГ, полученного из гипофиза свиней, позволяет в 1,6-1,7 раза сократить время до извлечения биоматериала с увеличением выхода зигот на стадии пронуклеусов и тем самым повысить вероятность получения первичных трансгенных животных в биотехнологии трансгенеза. Источники информации 1. Гольдман И.Л., Садчикова Е.Р., Кадулин С.Г., Гнучев Н.В. Технология получения датированных по времени зигот у коз для выполнения микроинъекций рекомбинантной ДНК с целью создания трансгенных животных // Доклады академии наук. - М. - 2002. - Т. 384.5. - С. 699-703. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 2