Способ получения антибиотика S541, штаммы стрептомицетов – продуценты антибиотика S541

более конкретно формулы 11Изобретение распространяется на соединения, ИЕЮЩЕ указанные ВЫШЕ формулы, как индивидуальные, так и их сочетания. Для определенных областей использования, например в землет В СЗДОВОДСТЕЕ ИЛИ В ветеринарной медицине, более удобным может быть применение Антнбиотиков Зддд без рюаления на индивидуальные КОМПО Ненты, однако для других областей ис пользования, напрншер в гуманитарной медицине, может быть предпочтительнымиспользование нндивидУаЛьых СОЕДИЧВ ний.Первоначально выделенные антибиотики 554, легко разделяются посредством хроматографии на силикагеле на два компонента, которые обладают например, противогельминтной активностью и тушат ультрафиолетовую флуоресценцию при 254 нм. Компонент 1 характеризуется значением КБ 0,7 0,75, а компонент 11 0,39 0 д 6 что было определено методом тонкослойной хроматографии на пластинах ФИРМЫ Мерк 5735 из силикагеля 60, элюируееКомпоненты 1 И 11, где На являетсп соответственно группой -СН 3 н Н, антибиотиков 554, могут быть доПОПНИТВЛЬЪПО ОЧИЩЕНЫ С образованием шести веществ формулы 1, обладающих активностью антибиотика, например протнвогельминтной, иеющих общую формулу 111где Ед - метнльная, этильная или изопропилъная группа К 2 - водород или метильная группа.Эти шесть веществ формулы 111 обозначим как фактор А (Е, - изопропил К 2 водород), фактор В (К, метил, На - метил), фактор С Ед метил, На водород), фактор В (К, этил, На - водород), фактор Е (Е, этил, К 2 метил) и фактор Е (Н, иэопропил, К 2 метил). Факторы А и С являются особенно предпочтительныътът. .Факторы В, Е и Р получают из компонента 1, а факторы А, С Н П. из компонента 11.Вещества по изобретению обладают активностью антибиотиков, например протпвогельминтной, в частности, против нематод, и в особенности активностью против внутренних и внешних паразитовкВ частности обнаружено, что такие веществаявляются активнымипротив па.РаЗИТИРУЮЩНхНеМатод,например Наешоп спин сопЬогсца 05 егса 51 а с 1 гсишс 1 пека, Тг 1 сЬо 5 Егоп 5 у 1 ц 5 со 1 цЬ 1 Еогш 15. В 1 скуосац 1 ц 5 у 1 у 1 раг 1 в Соорег 1 а опсоръега, 05 ега 31 а озегЕа 31, Мрро 5 Егоп 3 у 1 и 5 1 ога 2111 еп 515, и параэирующих клещиков, таких как 5 агсорсев 5 р. Рвогорсеэ ар. Следовательно,ЭТИ БЕЩЕСТВЗ МОГУТ бЫТЬ ИСПОЛЬЗОВЕНЪ при лечении животным и людей, пора женных внутренними и/или внешними па разитами. Крометого, было обнаружено, чтотакие вещества обладают противофун гицндной активностью, например противШТЗММОВ СаПд 1 д 3 5 Р- таких как Сап 1.на а 1 Ь 1 сапэ Сапо 1 оа 51 аЬгаСа, и против дрожжей, таких как БассЬагошчсев саг 15 Ьег 3 епв 1 в.Эти вещества также активны против свободно живущих нематод СаепогЬаЬд 1 рте е 1 е 3 ап. Кроме того, былонайдено, что веполученные по предлагаемому. способу являются эффективньми при борьбе с-насекомыми, клещевидныд Н нематодными вредителями в продуктах земледелия, садоводства, лесоводства,В ХПНННЩИХСЛ ПродУктах и для общего здравоохранения. Вредители почвы и растительных плодов, включая Ьдакисовые), а также корнеплоды (например,сахарная свекла, картофель) МОГУТ быть эффективно уничтожены.В частности, обнаружено, что прерлагаеыые вещества являются актнвныи,например, против фруктовых нлещиков н тлей, таких как Арлйе Еаьае, Ац 1 асогснцш сцгишЕ 1 ехнш, Нугцз рег 1 сае ес а 11, и представителей рода Тг 1 а 1 ецго 1 аез нематод, таких как пред-ставителя рода АрЬе 1 епсо 1 оее, С 1 оЬо тдега Несегооега ес а 1., чешуекрылых,таких как Не 11 осЬ 1 е Р 1 оСе 11 а, Броаорсега, каландрин, таких как АпсЬопопив 3 гапб 15, 51 орЬ 11 це 3 гапаг 1 ц 5,мучных хрущаков, таких как Тг 1 Ьо 11 от се 5 апецш мух, таких как Мцвса ботезс 1 са, муравьев Риктера,узкокрылых молей-мннеровр-Реаг реу 11 а Тлг 1 рз саЪас 1, тараканов таких как В 1 ае 113 5 егтап 1 са Рет 1 р 1 апеса ашег 1 сапа и комаров, таких как Аеоез ае 3 ур 1.Вообще эти вещества могут применлться как в отношении хозяина (животного или человека, или растения,или другой растительности), так и в отношении самих вредителей или их очага. Особенно предпочтительными ивляются факторы А, В, С, П, Е И Р, которые указаны выше. Вещества, полу- 1 ченные по предлагаемому способу, могут быть использованы в вице различных лекарственных форм для введения любым удобным способом в ветеринарии или медицине.Композиции, в состав которых вхоДНЧ НРЕДЬПНГЦЕЬПЫЕ БЕЩЕСТВЗ, МОГУТ бЫТЬ использованы для парзнтерапьного(Включая внутрнгрупное, орального,ректального, местного или нмплантного введения. При составлении композиции,которая должна быть стериальной, например инъекция, глазные капли н ма зи, активньй компонент сам может быть приготовлен антисептическим или сте рильны например, после обработки гаммаиэпуцеНИеМ или окисью этилена.по предлагаемому способу, могут быть включены в рецептуры сухого ипп 1 жидкого типов, например пусты, включающие основы пуста, или концентраты,порошки, включающие растворные нли увлажненные порошки, грануляты, вклюЧшогцнхе ЬШКрОГраНУЛЫ ИЛЛ ГРЕДНУЭЪЕ, СПО собные писпергнроваться таблетки,текучие жидкости, эмульсии, такие какты, способные эмульгироваться жидкости для погружения, такие как погружные жидкости для корней или для семян, оболочки семян, семенные таб летки, масляные концентраты, масляные растворы, инъекции, например инъекции в стебель, аэроэоли,дъош 1 и туманы Обычно такие рецептуры включаютд соединениев сочетании с подходящим носителем или разбавителем. Такие носители могут быть жидкими или твердыМН И предназначаются для облегчении применении вещества или посредствомдиспергирования там, Где ОНО-ДОЛЖНО быть нанесено, или для обеспечения Рецептуры, которая может быть составпена потребителем В ВИДЕ препарата,способного к диспергированшо. ТакиеЮ рецептуры ХОРОШО НЗВЕСТНЫ И МОГУТ быть получены традиционныи методами,такими как, например, смешивание н/или размалывание активного компонента(тов) вместе с носителем или25 разбавителем например твердьщ носителем, растворителем или поверхност НОЗ.КТИВНЪ 114 ВЕЩСТВОМ. Твердые НОСИТЕЛИ, ПОДХОДЯЩИЕ ДЛЯиспользовании В рецептурах, таких как пусты, грануллты И порошки, могут быть выбраны, например, из природных минеральных наполнителей, таких как диатомит Тальк, каолин, монтморилпонит, пиройиллнт или аттапульгит. Сильно диспергироваиная кремневая35 кислота или сильно днспергированные поглощающие полимеры могут быть включены в композици. Используемые гранулированные адсорбирующие носителиМОГУТ бЫТЬ ПОРИСТЫМН (такими как НЕМ 4 О за, размолотьй кирпич, сепиолит или бентонит) или непористымн (такими как кальцит или песок). Могут быть использованы подходящие предварительно гранулированные материалы, которые45 могут быть органическими или неорганическими И включают доломит и размолотые растительные остатки.Используемые в качестве носителей ИЛИ разбавителей растворители пред 5 ставллют собой ароматические углеводороды, алифатические углеводороды,спирты и гликоли или их простые эфиры, сложные эфиры, кетоны, амиды кис-7 лот, сильно полярные растворители,55 необязательно эпоксидированные растительные масла Ц ВОДУ. также могут быть использованы традиционные непоногенные, катионогенные или анионные ловерхностпо-лктив эг ные вещества, 7 1738090 8ПЫЕ ПЛКНПФЕНОЛЫ И СПНРТЫ, СОЛИ щелочПЫХ ПЛН ПДЕЛОЧНОЗЕМЕЛЬПЬЪХ МЕТЗЛЛОВ алкилбензолсульфокислот, лнгносулЬфокислоты или сульфонаты полимерных фенолоп, которые обладают хорошими энульгируюцими, ДНСПЕРГНРУЮЩИМН И/ИЛИ увлажняющими свойствами, или индиви дуально или в сочетании в композициях.Кроме того, в композициях могут быть использованы стабилизаторы, противослеживающиеся добавки, регуляторы вязкости, связующие и липкие добавки,фотостабилзаторы, а также УДОБРЕНИЯ, СТИУЛЯТОРЫ ПЙТЗННЯ илидругие активлые вещества, вещества полученные по предлагаемому способу, могут быть использованы в смеси с другими инсектицидами, акарнцидами и.нематоцидами.В этих рецептурах концентрация актмого материала обычно составляет О, -992 и более, предпочтительно 0,01 - д 0 вес.2.Промышленные продукты обычно поставляются в виде концентрированных композиций, которые для использования могут быть разбавлены до соответствушщей концентрации активного материала, например от 0,001 до-0,0001 вес.. - В земледелии, садоводстве и В ветеринарииможет быть желательным использование цельного ферментационного бульона (без разделения его на компоненты или факторы) В качестве источника активньш веществ. Может Дбыть удобным использование высушенного бульона, содержащего мицелий,неживого мицелия,-выделенного из бульона с использованием методик разделения жидкость - твердое тело ил методик выпаривания, илис использованием ферментационного бульона, остающегося после выделения мицелия. По р желани мицелий может быть пастеризован пли, ибо более предпочтительно, высуыеи, например, методами распыли тельной сушки или сушки на роликах. Мицелий или бульон могут входить в состав композиций, включающих традиционные инертные носители, среды для лекарств или разбавители, которые описаны выше.На основе таксономических.исследо ваний, конкретным микроорганизмом, способньм продуцировать указанные вьгше вещества, является новый вид рода-Бсгерсотусез снегшоагсЬаеи 515. Образец этого микроорганизма, выделенного из почвы, депонирован в постоянную коллекци культур Национальных Коллекций промыленнык и морских бактерий (Исследовательская станция Торри,г. Абердин, Великобритания) и ему присвоен номер ПС 1 В 12015.Изобретение также распространяетСП на ЛЮБЫЕ ВЕЩЕСТВЗ, КОТОРЫЕ СПОСОБ ны продуцнроваться посредством ферментации Б. Елегтоагснаепэйэ НС 1 В о 12 О 15 И которые являются оптическими изомерамн.веществ формулы 1. .. Организм рода Бсгерсотусез предпочтительно представляет собой 5 ггер ЕошусезЕЬеттоагсЬаеп 51 э ЫС 1 В 12015 или его мутант. ..НутаНты 5. Еъегшоагслаепзйз ЫС 1 В 12015 могут возникать самопроизвольно или продуцироваться множеством способов. Такие способы вклчают ионизирующее излучение,хннческне м тоды, например обработку Ы-метил Ы -нитро-Ыпитрозогуанилином (НТГ),термообработку, генетические методи-ки, такиекак рекомбинации, трансдуклизогенное превращение, и селективные методики для самопронзвольны мутантов.Так, наприер, получены четыре мутантных штамма 5 Ълегтоагслаепейе НС 1 В 12015, причем каждый штамм депонирован в коллекции культур Национальных Коллекций промшленных и морскик бактерий (Исследовательская станция Торри, г. Абердин, Великобри.тания) и им присвоены номера ЫС 1 В 12111, НС 1 В 12112, НС 1 В 12113 и ЫС 1 В 12114 5. снегшоагслаепвйз ЫС 1 В 1211 Д 12112, 12113 и 12114.Мутантные штаммы МС 1 В 12111, 12112 И 12113 выведены путем обработки спор 5. сЬекшоагсЬаеп 51 з ЫС 15 12015 ЫметилЫнитроЫнитрозогуани дином и затем окарактериэованы одно стадийным способом Холлидэя.Нутантный штамм НС 1 В 1211 б возник при самопроизвольной мутацн 5. снегфицирован как стойкийк стрептомици. НУ, так как оставался жиэнеспособным. ПОСЛЕ Ноздействия сульфата стрептомич цина (100 мгк/МЛ) при 28 С в течение 5 сут.Так СО НОМНЧЕ СКНЕ. ИССЛЕДОВАНИЯ ПОКЗэывают что 5.сЬегтоагсЬаеп 515 ЫС 1 В 12015 представляет собой микроорганизм новоговида характеристики ко торого описаны ниже.Па предпочтительпыш споруляционных средах агаре овсяной муки, солодово-дрожжевом агаре и крахмальном агаре с неорганическими солями .Ьегшоагспаеп 515 ЫС 1 В 12015 обильно растет, продуцируя стабильный субстратный мицелий и воздушный МИЦЕЛИЙ, ПО рождающий споры в открытых спиральных цепочках в виде боковых ответвлений от основных гиф. На этих средах обратнал пигментация желтокоричневая,а спорофоры серые. При стократноъ увеличении видно, что спорофоры содержат 2-5 витков 5 цепочке С 5-10 СПОРЕМИ ВНУТРИ КЗЖДОГО ВИТКа СПЕРЕДИ. В среднем спорофоры содержат 20-50 спор. При увеличении в 12 000 в скапирующем электронном микроскопе вид НО, ЧТО СПОРЫ ИМЕЮТ гладкие СТВНКНи эллппсоидную формуО 7 Х 14 мкм в наиболее широкой части эллипсоида. 8.ЕЬегтоагсЬаеп 51 ПС 1 В 12015 является грамположительньш организмом и способеп расти и образовывать споры при 2 О 5 ОС. Сравнение приведенных выше данных с опублнкопанньмп описаниями в БергеевскоМсправочпнке определительнойводят, используя компЬютеризирован ную матрицу идентификации. Ниже приведены результаты 41 тактсономического испытания для 5.ЕЬегт тоагсЬаепв 1 в НС 1 В 12015Признак Результат Цепочка спор мутовчатая связанная Цепочка спор прпмоизпитая Цепочка спор спиральная Фрагментации мицелия Поверхность спор гладкая Поверхность спор морщи нистал . Цвет спор серый Цвет спор красный Цвет спор зеленый Обратный желто-коричневьт Обратный красно-оранжевьй ПРОИЗВОДСТВО НЕДЦЧНИПЗИспользование маннитола Использование раффинозыИспользование ПЪальфа аминомасляной кислоты Использование Ь-гистидина . Использование Ь-гидроксипролина Расщепление аллантоина Расщепление арбутина Расщепление ксаитина Расщепление пектина Расщепление лецитина Восстановление нитрата Производство сероводорода Устойчивость к азиду натрия (ОО 1 вес/об) 5 Устойчивость к хлоридуМутантные штаммы ЫС 1 В 12111, 12112, 12113 и 12114 все имеют практически аналогииные 5.сЬетоагсЬаеп 515 существенные признаки. Однако ЫС 1 В 12111 для роста требуется адеНин, пс 1 в 12 т 12 серии, ыс 1 в 1211 з ГНСТНдИН а ПС 1 В 12114 стоек к стрепМикроорганизмы, способные продуцировать антибиотики 554 легко могут быть обнаружены с помощью удобного мелкомасштабного теста с применением нематод СаепогЬаЬо 1 Е 15 е 1 е 3 апа, например путем добавления испытуемого образца к суспензии иематоди опредеч пения последующего воздействия на хщзнеспособность последних.Получение антибиотиков 5544 путем ферментации подходящего организма