Имитатор опухолевых антигенов

61 35/00 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявители Янченко Владимир Вилиянинович Янченко Андрей Вилиянинович Янченко Лилия Кирилловна(72) Авторы Янченко Владимир Вилиянинович Янченко Андрей Вилиянинович Янченко Лилия Кирилловна(73) Патентообладатели Янченко Владимир Вилиянинович Янченко Андрей Вилиянинович Янченко Лилия Кирилловна(57) Имитатор опухолевых антигеновмодифицированной пространственной структурой,несущий иммунодоминантные эпитопы опухолевых антигенов и содержащий глобулярные белки, имеющий аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 11.(56)93042874 , 1996.93004625 , 1995.92016354 , 1995.94028282 , 1996. Петров Р.В. Иммунология. - М. Медицина, 1987. - С. 348-351. Изобретение относится к медицине и ветеринарии и используется для иммунопрофилактики и иммунотерапии онкологических заболеваний. Для иммунотерапии онкологических заболеваний пытались использовать аутологичные, сингенные или аллогенные опухолевые клетки, инактивированные тем или иным способом, естественные антигены опухолей как в чистом виде, так и усиленные синтетическими носителями, интерлейкины 1, 2. Существенным недостатком перечисленных средств является низкая эффективность стимуляции иммунного ответа и узкий спектр противоопухолевого действия, а у интерлейкинов - высокая токсичность. Предлагали для стимуляции иммунной системы при онкологических заболеваниях использовать вакцины БЦЖ, или вакцины из 1. Недостаток этих средств - отсутствие специфического иммунного ответа. Предлагаемый имитатор опухолевых антигенов позволяет ликвидировать недостатки известных средств и обеспечивает достижение более высокого технического результата эффективное включение специфического иммунного ответа и достижение высокого терапевтического эффекта. Сущность изобретения заключается в том, что в заявляемом изобретении выше указанный технический результат обеспечивается активным веществом - имитатором опухолевых антигенов. В данном случае, повышение лечебного эффекта достигается путем модификации пространственной структуры глобулярных белков, длиной от 15 до 1500 аминокислот, а так же различной последовательностью их соединения (фиг.9.). В результате чего возникают антигеные фрагменты, сходные с пептидными фрагментами опухолевых антигенов на 70-100 . Благодаря этому, после введения имитатора опухолевых антигенов в организм, появляются иммунокомпетентные клетки, которые распознают на патологических клетках фрагменты пептидов длиной 7-10 аминокислот. Эти клетки могут уничтожать опухоль и ее метастазы любой локализации. Сопоставительный анализ предлагаемого имитатора опухолевых антигенов с прототипами естественные антигены опухолей, показывает, что заявляемый имитатор опухолевых антигенов существенно отличается от известных противоопухолевых препаратов. Он является новым, потому что его состав и структура неизвестна из существующего уровня техники. Пример имитации смотри фиг.10. Анализ других технических решений в данной отрасли техники, например, по патентам СССР 1811849,1836103, по патенту РФ 2007176, позволяет сделать вывод,что заявляемый имитатор опухолевых антигенов имеет изобретательский уровень, потому,что его структура и способ применения неизвестны из существующего уровня техники. Кроме того он является промышленно применимым, что видно из результатов экспериментальной проверки достигаемого технического результата на животных-опухоленосителях. Возможность использования изобретения подтверждена приводимыми ниже сведениями, относящимися к составу, способу получения и результатам экспериментальной проверки. Заявляемый имитатор опухолевых антигенов получают следующим способом предварительно, известным способом, в стерильных условиях получают глобулярные белки,сходные по аминокислотной последовательности с опухолевыми антигенами. Потом, на 2 5942 1 пример, при химической модификации к протеину добавляютна определенное время,а затемнейтрализуют эквивалентным количеством . В результате модификации полученное вещество становится похожим на опухолевые антигены фиг.8. После чего полученное вещество замораживают при-10 -70 С, а затем производят лиофильную сушку. В результате такой обработки получается имитатор опухолевых антигенов, имеющий стабильные молекулы, низкую токсичность и несущий иммунодоминантные эпитопы опухолевых антигенов, которые стимулируют образование противоопухолевых иммунокомпетентных клеток. Полученное таким способом вещество применяют для предупреждения и лечения онкологических заболеваний. Для этого имитатор опухолевых антигенов вводят в организм любым способом, за исключением внутривенного. Способность имитатора опухолевых антигенов включать противоопухолевый иммунитет подтверждают результаты испытаний, проведенные на 577 животных, часть сведений о которых представлены в описании экспериментов и на фиг.1-7 (чертежи). Определение летальной дозыимитатора опухолевых антигенов проводили на 30 белых мышах (3 группы по 10 животных). 100 мг сухого вещества растворяли в 3 мл изотонического раствора хлорида натрия вводили подкожно, однократно. Количество имитатора опухолевых антигенов (сухого вещества) довели до 5 грамм на 1 кг веса, все опытные животные оставались живыми. Больше дозу препарата не повышали, так как масса растворителя приближалась к массе опытных животных. Лабораторные испытания полученных антигенов проводили на животных-опухоленосителях (белых крысах). Проверялась эффективность иммунопрофилактики и иммунотерапии на карциносаркоме Уокер-256, саркоме-45. В зависимости от условий проведения экспериментов было излечено от 8 до 55 животных. У вылеченных животных, после полной регрессии опухоли, не было ни одного случая рецидива заболевания. В результате исследований выявлены особенности работы иммунной системы при различных схемах применения препарата. Иммунная система части крыс с помощью препарата была способна уничтожить карциносаркому Уокер-256 объемом около 9 см 3, максимум-35 см 3. Саркому-45 объемом около 1 см 3, максимум 3 см 3. Объемы этих опухолей различны, но количество опухолевых клеток примерно одинаково. Кроме этого применение имитатора опухолевых антигенов увеличивало среднюю продолжительность жизни павших животных. Пример терапии Саркомы 45 На фиг. 1 изображено изменение размера опухоли у излеченных животных на фиг. 2 контрольная группа. В данном эксперименте было излечено 13,5 животных. У излеченных животных не было ни одного случая рецидива опухоли. В контрольной группе все животные погибли. В этом эксперименте участвовало 30 животных. Графики построены по средним значениям объема опухоли для каждой группы животных. Наиболее эффективно применять препарат для вакцинации. В этом случае противоопухолевый иммунный ответ развивается раньше, что позволяет уничтожать опухоль на ранних стадиях. Имитатор опухолевых антигенов можно применять для иммунотерапии практически любых типов опухолей, так как полученные антигены присутствуют в спонтанных, индуцированных химическими канцерогенами и вирусиндуцированных опухолях. На фиг. 3 показаны результаты терапии и вакцинации животных с карциносаркомой Уокера-256. В этом эксперименте было излечено 50 животных при вакцинации и 37,5 при терапии. Среди излеченных не было ни одного случая рецидива опухоли (наблюдения проводились на протяжении 150 суток после излечения). Контрольная группа данного эксперимента показана на фиг. 4 (все животные погибли). Графики построены по средним значениям для каждой группы животных. 5942 1 Эффективность иммунотерапии зависит от 1) исходного состояния иммунной системы 2) количества опухолевых клеток и их митотической активности 3) схемы применения препарата. Рассмотрим зависимость эффективности применения препарата от митотической активности опухоли на примере фиг. 5. Зависимость эффективности применения препарата от митотической активности опухоли изображена на фиг. 5. Динамика изменения опухоли обладающей меньшей митотической активностью представлена на фиг. 6 и 7. Показатели терапии саркомы 45 отличаются от показателей изображенных на фиг. 2 и 3. Вместо 13,5 в данном эксперименте излечено 37,5 животных (среди излеченных ни одного случая рецидива опухоли) в контроле все животные погибли. Графики построены по средним значениям для каждой группы животных. Заключение - имитатор опухолевых антигенов способствует включению противоопухолевого иммунитета, это приводит к полному уничтожению опухоли, если скорость образования противоопухолевых иммунокомпетентных клеток превосходит скорость образования опухолевых клеток. Как видно из описания экспериментов и фиг.1-7, предлагаемый имитатор опухолевых антигенов обеспечивает достижение технического результата и обладает хорошим терапевтическим противоопухолевым эффектом. Практическое применение предлагаемого имитатора опухолевых антигенов в медицине и ветеринарии позволит повысить лечебный эффект при онкологических заболеваниях. В настоящий момент разработан процесс получения имитатора опухолевых антигенов и проведены исследования на животных-опухоленосителях, которые подтверждают получение технического результата и лечебного эффекта. Источники информации 1. Петров Р.В. Иммунология. - М. Медицина, 1983. 2. Петров Р.В., Хаитов , Атауллаханов Р.И. Иммуногенетика и искусственные антигены. - М. Медицина, 1983. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 11