Терпеноидные производные (саркодиктиины A, B, C, D, E и F), обладающие противоопухолевой активностью, и фармацевтическая композиция

61 35/00 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель ФАРМАЦИЯ ИТАЛИЯ С.п.А(72) Авторы Карло БАТТИСТИНИ Марина ЧЬОМЕИ Франческо ПЬЕТРА Микеле ДАМБРОЗИО Антонио ГУЕРРЬЕРО(73) Патентообладатель ФАРМАЦИЯ ИТАЛИЯ С.п.А(-)-(4,4,7,10,11,12,1,5 Е,8)-7,10-эпокси-3,4,4 а,7,10,11,12,12 а-октагидро-7 гидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4-(1-метилэтил)бензоциклодецен-11-ила (Е)3-(1-метил-1 Н-имидазол-4-ил)акрилат (саркодиктиин А),(-)-(4,4,7,10,11,12,1,5 Е,8)-7,10-эпокси-6-(этоксикарбонил)-3,4,4 а,7,10,11,12,12 а-октагидро-7-гидрокси-1,10-диметил-4-(1-метилэтил)бензоциклодецен-11-ила (Е)-3-(1-метил-1 Н-имидазол-4-ил)акрилат (саркодиктиин В),(-)-(3,4,4,7,10,11,12,1,5 Е,8)-7,10-эпокси-3,4,4 а,7,10,11,12,12 а-октагидро 3,7-дигидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4-(1-метилэтил)бензоциклодецен-11 ила (Е)-3-(1-метил-1 Н-имидазол-4-ил)акрилат (саркодиктиин С),(-)-(3,4,4,7,10,11,12,1,5 Е,8)-3-ацетокси-7,10-эпокси-3,4,4 а,7,10,11,12,12 а-октагидро-7-гидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4-(1-метилэтил)бензоциклодецен-11-ила (Е)-3-(1-метил-1 Н-имидазол-4-ил)акрилат (саркодиктиин ),-(3,4,4,7,10,11,12,1,5 Е,8)-7,10-эпокси-3,4,4 а,7,10,11,12,12 а-октагидро 3,7-дигидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4-(1-метилэтил)бензоциклодецен-11 ила -3-(1-метил-1 Н-имидазол-4-ил)акрилат (саркодиктиин Е),-(1,4,4,7,10,11,12,2,5 Е,8)-7,10-эпокси-1,4,4 а,7,10,11,12,12 а-октагидро-1,7-дигидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4-(1-метилэтил)бензоциклодецен 11-ила (Е)-3-(1-метил-1 Н-имидазол-4-ил)акрилат (саркодиктиин ),в качестве терапевтического антинеопластического агента. 2. Применение соединения, указанного в п. 1, для получения медикамента, используемого в качестве терапевтического антинеопластического агента при лечении злокачественных опухолей человека и животных. 3. Фармацевтическая композиция с противоопухолевой активностью, содержащая активный ингредиент и фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента содержит соединение по п. 1 в эффективном количестве. 5889 1 4. Фармацевтическая композиция по п. 3, отличающаяся тем, что является активатором сборки тубулина, вызывающего приостановку деления опухолевых клеток. 5. Фармацевтическая композиция по п. 3, отличающаяся тем, что является терапевтическим антинеопластическим агентом при лечении злокачественных опухолей человека и животных.(56)., 1987. - . 70. - Р. 2019-2027.., 1988. - . 71. - Р. 964-976. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. - АстраФармСервис, 1995. С. 262. Настоящее изобретение относится к терпеноидным производным, известным как саркодиктиины(, том 70, 1987, 2019-2027 и, том 71, 1988, 964-976), которые могут быть полезными в качестве терапевтических агентов. О возможном терапевтическом применении саркодиктиинов, упомянутых в настоящей заявке, ранее не сообщалось. В частности, согласно настоящему изобретению, саркодиктиины ввиду их цитотоксической активности могут использоваться в качестве терапевтических антинеопластических агентов при лечении злокачественных опухолей человека или животных. Соответственно, настоящее изобретение относится к применению соединения, выбранного из группы, включающей-(1,4,4,7,10,11,12,2,5,8)-7,10-эпокси-1,4,4,7,10,11,12,12-октагидро-1,7-дигидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4-(1-метилэтил)бензоциклодецен 11-ил(Е)-3-(1-метил-1 Н-имидазол-4-ил)акрилат(саркодиктиин ) в качестве терапевтического антинеопластического агента. Структурные формулы вышеперечисленных соединений представлены в таблице 1,ниже, со ссылкой на следующие формулы В приведенных выше формулах символпредставляет хиральный центр. В таблице 1 символозначает метил символозначает этил символ ОАС означает ОСОСН 3 символы (Е)представляют, соответственно, (Е) иуроканоильный фрагмент формулы В частности, вышеперечисленные саркодиктиины - могут быть использованы для получения медикамента, используемого в качестве терапевтического антинеопластического агента при лечении злокачественных опухолей человека и животных, благодаря их цитотоксической противоопухолевой активности. Злокачественная опухоль может представлять собой саркомы, карциномы, лимфомы,нейробластомы, меланомы, миеломы, опухоль Вильмса, лейкемии и аденокарциномы. Саркодиктиины настоящего изобретения могут быть получены выделением из средиземноморского образующего столоны коралла( ) 3( 1847), согласно методике, описанной в, том 70, 1987, стр. 2025. Биологическая активность саркодиктиинов настоящего изобретения была продемонстрирована с помощью (а) испытанияпо оценке их активности в отношении стимулирования сборки тубулина ииспытанияпо оценке их цитотоксической активности в отношении как клеток 1210, так и клеток 1210, резистентных к доксорубицину ( 1210/). В качестве примера, активность саркодиктиина А (внутренний код 29123) и саркодиктиина С (внутренний код 29119) оценивали согласно методикам, описанным в испытаниях (а) и .(а) испытание по сборке тубулина Тубулин из мозга теленка приготавливали посредством двух циклов сборкидеструктурирования (, ,., 70, 765-768, 1973) и хранили в жидком азоте в МАВ (0,1 М , 2,5 мМ , 0,5 мМ 4, 0,1 мМ , 0,1 мМ , рН 6,4). Все эксперименты выполнялись на белке, который хранился менее 4 недель. Перед каждым экспериментом тубулин хранился в течение 30 минут при 4 С. Сборку оценивали по методу. ( .,, 89, 737-758, 1974). Кювету (длина оптического пути 1 см), содержащую тубулин (1 мг/мл) и 1 мМ ,нагревали до 37 С и производили непрерывные измерения мутности при 340 нм на двухлучевом двухволновом спектрофотометре - 557, снабженном автоматическим регистратором и термостатически регулируемой камерой для образцов. Спустя 30 минут добавляли 4 мМ СаС 2 и измеряли деполимеризацию в течение 10 минут по уменьшению мутности. С регулярными интервалами в 15 минут добавляли масштабные дозы испытуемых соединений и оценивали изменения мутности. Данные выражали в виде процента реполимеризации, вызванной испытуемыми соединениями. Полученные результаты представлены в таблице 2. СОЕДИНЕНИЕ саркодиктиин А Вышеприведенные табличные данные ясно показывают, что испытуемые саркодиктиины способны стимулировать реполимеризацию тубулина даже в присутствии СаС 2,который обычно ингибирует сборку тубулина. Хорошо известно, что микротрубочки являются одними из наиболее стратегически важных субклеточных мишеней противоопухолевых химиопрепаратов (. том 82,15, 1 августа 1990). В отличие от классических агентов, действующих против микротрубочек, таких как колхицин и винка алкалоиды, которые вызывают деполимеризацию микротрубочек, саркодиктиины, как представляется, обладают механизмом действия, сходным с таковым таксола, одного из наиболее интересных противораковых агентов, появившихся в результате скрининга природных продуктов, который заключается в индуцировании полимеризации тубулина и образовании чрезвычайно стабильных, не способных функционировать микротрубочек. 4 5889 1 Таким образом, саркодиктиины могут использоваться как терапевтические антинеопластические агенты при лечении злокачественных опухолей человека и животных, ввиду их способности катализировать быстрое образование и стабилизацию микротрубочек,что приводит к приостановке деления опухолевых клеток. культуры клеток и анализ чувствительности к лекарству Клеточные линии мышиной лейкемии 1210 и 1210/ (устойчивые к доксорубицину) выращивалив виде стационарной культуральной суспензии в среде 1640(,, ), с добавлением 10 сыворотки плода коровы (, ,), 2 мМ -глутамина ( , , ), 10 мкМ -меркаптоэтанола, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Экспоненциально растущие клетки высевали (1105 клеток/мл) на 12-луночные планшеты (, , ) и сразу же после высевания добавляли испытуемые соединения в различных концентрациях. Планшеты инкубировали в течение 48 часов при 37 С в увлажненной атмосфере с содержанием 5 СО 2. Ингибирование клеточного роста оценивали путем подсчета выживших клеток на счетчике(, ). 50 ингибирующую концентрацию (50) рассчитывали по полученной кривой зависимости концентрация-ответ. Для каждой концентрации испытуемого соединения использовали дубликатные культуры. Полученные результаты представлены в таблице 3. 50 1210 /50 1210 Как видно из приведенных в таблице данных, саркодиктиины демонстрировали хорошую цитотоксическую активностьв отношении клеток 1210, а также в отношении клеток 1210, устойчивых к доксорубицину (1210/). В силу их эффективности в отношении клеток 1210/ саркодиктиины могут быть полезны при лечении опухолей, резистентных к химиотерапевтическим агентам, таким как, например, антрациклиновые гликозиды, в частности доксорубицин. Человека или животное можно лечить способом, который включает введение ему фармацевтически эффективного количества соединения, выбранного из саркодиктиина А,саркодиктиина В, саркодиктиина С, саркодиктиина , саркодиктиина Е и саркодиктиина. Посредством этого состояние человека или животного может улучшаться. Саркодиктиины изобретения можно назначать для приема в виде множества лекарственных форм, например перорально в форме таблеток, капсул, таблеток, покрытых сахаром или пленкой, жидких растворов или суспензий ректально в форме суппозиториев парентерально, например внутримышечно, или путем внутривенных инъекций или инфузий. Доза зависит от возраста, веса, состояния пациента и способа введения например, доза, предназначенная для перорального приема взрослыми, например для типичного соединения настоящего изобретения,29123 (саркодиктиина А), может варьировать приблизительно от 0,01 г до 1 г в день. И.Р.индекс резистентности 5889 1 Настоящее изобретение включает также фармацевтические композиции, содержащие эффективное количество саркодиктиина настоящего изобретения в качестве активного ингредиента в сочетании с фармацевтически приемлемым эксципиентом (которым может быть носитель или разбавитель). Фармацевтические композиции, содержащие соединения настоящего изобретения,обычно приготавливают стандартными способами и назначают для приема в фармацевтически подходящей форме. Например, твердые формы для перорального приема могут содержать, помимо активного соединения, разбавители, например лактозу, декстрозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный или картофельный крахмал смазывающие агенты, например диоксид кремния,тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния или кальция и/или полиэтиленгликоли связующие агенты, например крахмалы, аравийскую камедь, желатин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливинилпирролидон дезагрегирующие агенты, например крахмал, альгиновую кислоту, альгинаты или гликолят натрий-крахмала шипучие смеси красители подсластители увлажняющие агенты, такие как лецитин, полисорбаты, лаурилсульфаты и обычные нетоксичные и фармакологически неактивные вещества, которые используются в фармацевтических рецептурах. Указанные фармацевтические препараты могут производиться известными способами,например посредством процессов смешения, гранулирования, таблетирования, нанесения пленки или покрытия из сахара. Жидкие дисперсии для перорального приема могут представлять собой, например, сиропы, эмульсии и суспензии. Сиропы могут содержать в качестве носителя, например сахарозу или сахарозу с глицерином и/или маннит, и/или сорбит. Суспензии и эмульсии могут содержать в качестве носителя, например природную смолу, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливиниловый спирт. Суспензия или раствор для внутримышечных инъекций может содержать, например,вместе с активным соединением, фармацевтически приемлемый носитель, например стерильную воду, оливковое масло, этилолеат, гликоли, например пропиленгликоль, и, если это желательно, подходящее количество гидрохлорида лидокаина. Растворы для внутривенных инъекций или инфузий могут содержать в качестве носителя, например стерильную воду, или, предпочтительно, могут находиться в виде стерильных водных изотонических солевых растворов. Суппозитории могут содержать вместе с активным соединением фармацевтически приемлемый носитель, например масло какао, полиэтиленгликоль, сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана в качестве поверхностно-активного вещества или лецитин. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6