Способ получения 10-дезацетилбаккатина III

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ(57) 1. Способ получения 10-дезацетилбаккатинаэкстракцией различных частей тисса ( .) экстрагентом, отличающийся тем, что измельченные части тисса обрабатывают водой, отделяют водный раствор, содержащий 10-дезацетилбаккатин , от суспензии растительной массы, экстрагируют 10 дезацетилбаккатиниз водного раствора с помощью органического растворителя, отделяют полученный органический экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин , от водной фазы, удаляют растворитель из отделенного органического экстракта, селективно кристаллизуют 10-дезацетилбаккатиниз полученного остатка в органическом растворителе, после чего выделяют 10-дезацетилбаккатинв виде очищенного вещества. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что измельченные и при необходимости высушенные части тисса перемешивают с водой при 20 - 65 . 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что измельчение и при необходимости сушку частей тисса осуществляют до, после или в процессе их возможного замораживания и размораживания. 4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что используют 2-10 л воды на 1 кг измельченных и высушенных частей тисса. 5. Способ по любому из пп. 2 - 4, отличающийся тем, что используют деминерализованную воду. 6. Способ по любому из пп. 2 - 4, отличающийся тем, что обработку водой измельченных частей тисса осуществляют с использованием ультразвука. 7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что водный раствор, содержащий 10-дезацетилбаккатин , отделяют от суспензии растительной массы путем фильтрования, центрифугирования или отстаивания. 8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что водный раствор, содержащий 10-дезацетилбаккатин , экстрагируют органическим растворителем, выбранным из простых или сложных алифатических эфиров. 9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют метилтрет-бутиловый эфир, этил-трет-бутиловый эфир, метил-н-бутиловый эфир, метил-н-амиловый эфир, этилтрет-амиловый эфир, трет-бутилизопропиловый эфир, этилизобутиловый эфир, трет-бутил-н-пропиловый эфир, этил-н-гексиловый эфир, этилацетат, пропилацетат, изопропилацетат, н-бутилацетат, третбутилацетат, метил-трет-бутилацетат, трет-бутилпропионат или трет-амилацетат. 10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют метил-трет-бутиловый эфир, этил-трет-бутиловый эфир, этилацетат или н-бутилацетат. 11. Способ по п. 8, отличающийся тем, что используют водный раствор с рН 7. 12. Способ по п. 8, отличающийся тем, что используют водный раствор с рН 6. 13. Способ по п. 1, отличающийся тем, что органический экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин, отделяют от водного раствора путем отстаивания. 4141 1 14. Способ по п. 1, отличающийся тем, что растворитель из органического экстракта, содержащего 10 дезацетилбаккатин , при необходимости промытого водным раствором слабого основания или воды, удаляют путем дистилляции. 15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что удаление растворителя из органического экстракта осуществляют путем дистилляции при пониженном давлении. 16. Способ по п. 1, отличающийся тем, что селективную кристаллизацию 10-дезацетилбаккатинаиз остатка, полученного после удаления растворителя, осуществляют в органическом растворителе или в смеси органических растворителей. 17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют алифатический нитрил, при необходимости в смеси с алифатическим спиртом, алифатическим эфиром или алифатическим кетоном. 18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что в качестве алифатического нитрила используют ацетонитрил или пропионитрил. 19. Способ по п. 17, отличающийся тем, что в качестве алифатического спирта используют метанол,этанол, пропанол, изопропанол или н-бутанол. 20. Способ по п. 17, отличающийся тем, что в качестве сложного алифатического эфира используют этилацетат, изопропилацетат, н-бутилацетат или трет-бутилацетат. 21. Способ по п. 17, отличающийся тем, что в качестве алифатического кетона используют ацетон, метилэтилкетон, метилпропилкетон, метил-н-бутилкетон или метилизобутилкетон. 22. Способ по п. 17, отличающийся тем, что селективную кристаллизацию осуществляют в ацетонитриле, возможно в смеси с этанолом и/или этилацетатом или н-бутилацетатом и/или ацетоном. 23. Способ по п. 1, отличающийся тем, что 10-дезацетилбаккатинвыделяют путем фильтрования, отстаивания или центрифугирования. 24. Способ по любому из пп. 1 - 23, отличающийся тем, что 10-дезацетилбаккатинполучают из коры,ствола, корней или листьев тисса. 25. Способ по любому из пп. 1 - 23, отличающийся тем, что 10-дезацетилбаккатинполучают из листьев тисса. 26. Способ по любому из пп. 24-25, отличающийся тем, что используют следующие разновидности тисса,,,,,или Изобретение относится к способу получения полезных промежуточных веществ для приготовления полусинтетическими способами таксола и таксотера или их аналогов из различных частей растений, содержащих эти промежуточные вещества. В частности, изобретение относится к избирательному получению 10-дезацетилбаккатинаиз коры,ствола, корней и листьев различных пород тиса. Таксол и таксотер, а также их аналоги, имеющие нижеследующую общую формулу и проявляющие высокоэффективное антираковое и антилейкемическое действие, являются химикотерапевтическими препаратами для эффективного лечения целого ряда раковых заболеваний, например рака молочной железы, рака простаты, толстой кишки, желудка, почек, рака яичек и, в особенности, рака яичников. В общей формулеможет представлять замещаемый фенильный радикал,- атом водорода, ацетиловый радикал или карбомиловый -замещенный радикал,является атомом водорода или карбомиловым замещенным радикалом,1 может представлять фениловый радикал или 2 радикал, где 2 представляет алкил, алкилен, алкинил, циклоалкил, циклоалкилен, бициклоалкил, фенил или гетероциклил. 2 4141 1 Таксол соответствует препарату, в общей формулекоторого А и 1 представлены фениловым радикалом,- ацетиловым радикалом,является атомом водорода таксотер соответствует препарату, в общей формулекоторого А представлен фениловым радикалом,ипредставлены атомом водорода,1 - тбутокси-радикал. Таксол существует в природе в различных породах тисового дерева, однако в очень небольших количествах, причем его получение практически невозможно без полного разрушения растения. Так, таксол может быть выделен по методу С.Н.О.и др. , 49, 665 (1986), который заключается в обработке измельченной коры тиса породыс помощью метанола, в концентрировании экстракта, в диспергировании остатка в смеси гексан-ацетон в соотношении по объему 11, в очистке растворимой части методом хроматографии с помощью колонны Флоризиля. Полученный таксол-сырец очищается с помощью последовательной рекристаллизации в смеси метанол-вода и гексан-ацетон, а затем с помощью хроматографии и повторной кристаллизации. Количество полученного таксола может составлять 0,005-0,017 от части использованного растения. Таксотер в природе не существует, его можно получить путем полусинтеза из 10-дезацетилбаккатина ,имеющего следующую формулу,,, содержат производные таксана, основными из которых являются таксол и 10-дезацетилбаккатин , а также цефаломаннин, дезацетил-10-цефаломаннин и баккатин , которые могут быть связаны с сахарами. Если таксол, в основном, содержится в стволе и коре дерева, то 10-дезацетилбаккатин- в листьях. Следует отметить, что содержание 10-дезацетилбаккатинав листьях, как правило, значительно выше содержания таксола, будь то в коре, древесине или в листьях. Отсюда следует, что 10-дезацетилбаккатинявляется наиболее важным источником получения таксола по сравнению с его непосредственным выделением из тиса, а также для приготовления таксотера. Получение 10-дезацетилбаккатинаиз листьев различных пород тиса не требует разрушения дерева, и после отрастания листвы она вновь может идти на переработку. Как правило, известные способы получения производных таксана, содержащихся в различных частях тисового дерева, в частности в коре, древесине, корнях, листьях, требуют применения дорогостоящих и длительных методов хроматографии, которые, тем не менее, не обеспечивают полного выделения производных таксана, содержащихся в растении. 10-дезацетилбаккатинможет быть получен из расчета порядка 300 мг на 1 кг листьев тиса породыс применением способа, в соответствии с которым используют процесс вымачивания игл в метаноле,экстракцию органическим растворителем, в частности, хлористым метилом, и последовательные операции хроматографии по методу, описанному в 1. Различные составляющие производных таксана, содержащихся в различных частях дерева, могут быть выделены с использованием способа, согласно которому используют хроматографию в жидкой фазе реверс и который описан в 4. В соответствии с этим способом осуществляют обработку экстрактов тиса методом хроматографии в жидкой фазе реверс на адсорбенте, на котором осаждаются производные таксана,затем производят извлечение адсорбированных производных таксана и их выделение. В соответствии с данным способом представляется возможным получить 200 мг 10-дезацетилбаккатинас каждого килограмма высушенных и измельченных листьев. Задачей изобретения является создание простого способа получения 10-дезацетилбаккатинаиз различных частей тиса, в частности листьев, с высокой избирательностью, высоким выходом конечного продукта и не требующего сложной хроматографической технологии. Поставленная задача решается тем, что в способе получения 10-дезацетилбаккатинаэкстракцией различных частей тиса ( .) экстрагентом, согласно изобретению, измельченные части тиса обрабатывают водой, отделяют водный раствор, содержащий 10-дезацетилбаккатин , от суспензии растительной массы,экстрагируют 10-дезацетилбаккатиниз водного раствора с помощью органического растворителя, отделяют полученный органический экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин , от водной фазы, удаляют растворитель из отделенного органического экстракта, селективно кристаллизуют 10-дезацетилбаккатин 4141 1 из полученного остатка в органическом растворителе, после чего выделяют 10-дезацетилбаккатинв виде очищенного вещества. В соответствии с настоящим изобретением можно использовать любую часть тисового дерева, в частности кору, ствол, корни, листья. Основными породами тиса, используемыми в соответствии с настоящим способом, являются,,,,,и. Наиболее предпочтительной частью используемого тисового дерева породиявляются листья, которые, как правило, богаче содержанием 10 дезацетилбаккатина . Например, можно получить 800 мг 10-дезацетилбаккатинана 1 кг листьев тиса породы. Размер измельченных частиц может быть от 0,5 мм до нескольких миллиметров. Наиболее удобно работать с материалом, частицы которого в среднем менее 1 мм. Исходное готовое сырье тиса получают путем измельчения и сушки, которые могут осуществляться до или после замораживания и размораживания свежего материала или в процессе замораживания или размораживания данного материала. Обработка водой измельченного тисового материала осуществляется способами, известными среднему специалисту. В частности, водный раствор, содержащий 10-дезацетилбаккатин , получают путем перемешивания в воде при температуре 20-65 С измельченного материала тисового дерева в течение 30 минут - 2 часов. Количество воды может выбираться в широких пределах, однако рекомендуется использовать от 2 до 10 литров в расчете на 1 кг измельченного и высушенного материала и преимущественно порядка 5 литров на 1 кг обрабатываемого материала. Следует использовать деминерализованную воду и проводить обработку с помощью ультразвука. С целью повышения выхода продукта рекомендуется провести несколько обработок водой растительной массы для получения водного раствора, из которого извлекают 10-дезацетилбаккатинпо нижеописанному методу. Водный раствор, в котором содержится 10-дезацетилбаккатин , отделяют от растительной массы обычными способами, например,фильтрацией, центрифугированием или отстаиванием. Полученный водный раствор может охлаждаться, после чего осуществляют экстракцию 10 дезацетилбаккатинаорганическим растворителем в один или несколько приемов. Наиболее рекомендуемыми органическими растворителями являются эфиры, например метил-трет-бутиловый эфир, этил-третбутиловый эфир, метил-н-бутиловый эфир, метил-н-амиловый эфир, этил-трет-амиловый эфир, третбутилизопропиловый эфир, этилизобутиловый эфир, трет-бутил-н-пропиловый эфир, этил-н-гексиловый эфир или алифатические эфиры, например, этилацетат, пропилацетат, изопропилацетат, н-бутилацетат,трет-бутилацетат, метил-трет-бутилацетат, трет-бутилпропионат, трет-амилацетат. Наибольший интерес представляют метил-трет-бутиловый эфир, этил-трет-бутиловый эфир, этилацетат и н-бутилацетат. Экстракцию органическим растворителем ведут в водном растворе с рН ниже 7 и, как правило, ниже 6. Органический экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин , отделяют от водной фазы известным способом, в частности отстаиванием. Органический экстракт может промываться водным раствором со слабым основанием, например карбонатом натрия, или водой. После сушки органический растворитель удаляют из экстракта обычным методом,в частности перегонкой, при необходимости под низким давлением для получения, как правило, твердого осадка, из которого выделяют 10-дезацетилбаккатин . Избирательную кристаллизацию 10-дезацетилбаккатинаведут из раствора, полученного путем растворения осадка в органическом растворителе или в смеси органических растворителей. В качестве растворителей, позволяющих осуществлять избирательную кристаллизацию 10-дезацетилбаккатина , можно использовать нитрилы, например ацетонитрил, пропионитрил или изобутиронитрил, при необходимости в смеси с алифатическим спиртом, таким как метанол, этанол, пропанол, изопропанол, н-бутанол, с алифатическим эфиром типа этилацетат, изопропилацетат, н-бутилацетат, трет-бутилацетат или с алифатическим кетоном, например ацетоном, метилэтилкетоном, метилпропилкетоном, метил-н-бутилкетоном или метилизобутилкетоном. Особенно хорошо процесс избирательной кристаллизации идет в ацетонитриле, в том числе в присутствии этанола и/или этилацетата, а также н-бутила и/или ацетона. Выпавший в осадок 10-дезацетилбаккатинможет быть выделен при помощи фильтрования, отстаивания или центрифугирования. В соответствии с настоящим изобретением способ позволяет получить практически чистый 10 дезацетилбаккатинпри выходе продукта, значительно превышающем выход, который обеспечивали ранее известные способы. 10-дезацетилбаккатин , полученный согласно заявленному способу, может использоваться для приготовления таксола и таксотера или их производных. Ниже приводятся конкретные примеры осуществления способа в соответствии с настоящим изобретением. Пример 1. К 2,5 литрам деминерализованной воды, нагретой до 50 С, добавляют 500 г высушенных и измельченных листьев тисас размером измельченных частиц менее 1 мм и содержанием 104 4141 1 дезацетилбаккатина , определенным методом высокоточной жидкостной хроматографии, 0,08 или 400 мг 10-дезацетилбаккатинана 500 г листьев. В течение 1 часа и при температуре 50 С ведут перемешивание, а затем осуществляют фильтрацию. Фильтрат (1,8 литра) с содержанием рН 5,4 экстрагируют этилацетатом в 3 приема по 0,9 литра. Органическую фазу объемом 2,7 литра подвергают двукратному промыванию в одном литре содового раствора 0,1 М,затем двукратному промыванию в 1 литре деминерализованной воды, после чего сушат на сульфате натрия. После фильтрации и сухого обогащения получают твердый осадок (3,2 г), который обрабатывают 9 см 3 ацетонитрила при температуре около 70 . После охлаждения в течение ночи при температуре порядка 4 осадок отделяют при помощи фильтрования. После сушки получают 245 мг кристаллов, содержащих в соответствии с результатом анализа методом высокоточной жидкостной хроматографии 75 чистого 10 дезацетилбаккатинаили 183 мг. По результатам аналогичного анализа содержание 10-дезацетилбаккатинав маточном растворе составляет порядка 40 мг. Растительную массу, содержащую 0,7 литра воды, экстрагируют два раза вышеописанным методом. Собранный водный фильтрат обрабатывают тем же способом, что и раньше, и получают 2,5 г твердого продукта. Данный продукт помещают в 5 см 3 ацетонитрила при температуре 70 . После охлаждения в течение ночи при температуре около 4 С методом фильтрации отделяют 169 мг кристаллов, в которых, согласно результату высокоточного анализа, проведенного методом жидкостной хроматографии, содержится 75 чистого 10-дезацетилбаккатинаили 127 мг. По результатам аналогичного анализа в маточном растворе содержится 46 мг 10-дезацетилбаккатина . Общий вес 10-дезацетилбаккатина , экстрагированного водой, составляет 1834012747397 мг,т.е. практически 100 результат. Пример 2. 3 литра деминерализованной воды нагревают до 50 , затем добавляют 500 г высушенных и измельченных листьев тиса с размером измельченных частиц в среднем не более 1 мм и содержанием 10 дезацетилбаккатина , определенным методом высокоточной жидкостной хроматографии, 0,08 или 400 мг в 500 г листьев. В течение 1 часа и при температуре 50 С ведут перемешивание, затем осуществляют фильтрацию. Содержание рН фильтрата объемом 1,97 литра снижают с 5,15 до 4,6 путем добавления концентрированной соляной кислоты, затем проводят фильтрацию с помощью фильтра Зейтца, содержащего мембрану из асбестосодержащего картона. В результате получают 1,8 литра фильтрата. Фильтрат экстрагируют метил-терт-бутиловым эфиром 2 раза по 150 см 3, а затем 4 раза по 60 см 3. Полученный экстракт и концентрат дают 620 мг твердого продукта, который обрабатывают 3 см 3 ацетонитрила при температуре 70 . После охлаждения в течение ночи при температуре 4 С с помощью фильтрования выделяют 28 мг кристаллов с содержанием 10-дезацетилбаккатина 90 . Анализ проводится методом высокоточной жидкостной хроматографии. Согласно результатам анализа, полученным аналогичным методом, маточный раствор содержит 12,8 мг 10-дезацетилбаккатина . Источники информации 1.4814470. 2.4924012. 3.92/09589. 4.92/07842. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 5