Штамм гриба Beauveria bassiana БИМ F-369 Д для получения препарата против майского хруща

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ШТАММ ГРИБАБИМ -369 Д ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ МАЙСКОГО ХРУЩА(71) Заявитель Республиканское научное дочернее унитарное предприятие Институт защиты растений(72) Авторы Микульская Наталья Игнатьевна Прищепа Людмила Ивановна Герасимович Марина Станиславовна(73) Патентообладатель Республиканское научное дочернее унитарное предприятие Институт защиты растений(56)2103873 С 1, 1998.1795980 А 3, 1993.2172588 С 1, 2001.84325 С 2, 2008.2311029 С 1, 2007. МИКУЛЬСКАЯ Н.И. и др. Биология,систематика и экология грибов в природных экосистемах и агрофитоценозах Материалы международной научной конференции. - Минск, 2004. С. 169-171. МЕРЖЕЕВСКА Э. Защита растений на рубежевека Материалы научно-практической конференции. - Минск,2001. - С. 465-466. ЛАППА Н.В. Актуальные проблемы биологической защиты растений Материалы научно-практической конференции. - Минск, 1998. - С. 74-75.(57) Штамм грибаБИМ -369 Д для изготовления препарата против майского хруща. Изобретение относится к области защиты растений и представляет собой штамм гриба, поражающий майского хруща. Штамм(.) . 10-06 был получен методом выделения из погибших личинок колорадского жука. Штамм(.) . 10-06 обладает инсектицидной активностью по отношению к фитофагам и может быть использован для производства грибного энтомопатогенного препарата для защиты растений от вредителей. Штамм(.) . 10-06 депонирован в коллекции непатогенных микроорганизмов Института микробиологииБеларуси за номером БИМ -369 Д. Известны различные препараты на основе энтомопатогенного гриба, используемые для эффективной защиты различных сельскохозяйственных культур от вредителей 1. Наиболее близок к заявляемому штамм гриба( 74040), который предназначен для получения энтомопатогенного препарата с целью использования 14819 1 2011.10.30 его для защиты сельскохозяйственных культур от насекомых-вредителей. Этот штамм достаточно технологичен и обладает патогенной активностью против хлопкового долгоносика, белянки сладкого картофеля и хлопкового слепняка 2. Однако известный штамм не обладает вирулентностью по отношению к майскому хрущу. Данное изобретение направлено на получение штамма гриба, высокоактивного против личинок майского хруща. Предлагаемый штамм 10-06 отличается от известного тем, что обладает высокой биологической активностью по отношению к личинкам майского хруща. Штамм(.) . 10-06 был получен методом выделения из погибших личинок колорадского жука. Полученный штамм гриба(.) . 10-06 имеет следующие морфологические и физиологические особенности. Морфолого-культуральные свойства. Морфолого-культуральные признаки изучали на следующих питательных средах сусло-агаре, среде Чапека. Описание колоний проводили на 14-е сутки роста при температуре 26-28 . Штамм 10-06 имеет следующие характеристики. На сусло-агаре штамм образует колонии круглой формы диаметром 54 мм. Край колонии неровный, слегка опушенный. Центр колонии 19 мм, бугристый. Колония белого цвета, лучеобразная. Мицелий воздушный, ватообразный. Спороношение кремовое,обильное, консистенции мокрого мела, поверхность спороношения плоская, ровная. Обратная сторона колонии желтого цвета с коричневатой серединой. На среде Чапека штамм образует колонии белого цвета диаметром 34-45 мм. Колонии круглой формы, четко выражена зональность (состоят из 3 зон). Край колонии нечеткий,диффузный, лучеобразный, белого цвета, более плотный к центру. Центр колонии (4 мм) четкий, приподнят в виде бугорка, окружен валиком. Спороношение среднее. Обратная сторона светло-желтая, центр колонии кирпично-желтый, ярко выражен. Конидиеносцы собраны в редкие мутовки, иногда расположены вдоль гиф единично или парами друг против друга. На вершине бутылевидного конидиеносца наблюдается зигзагообразный вырост. Конидии одноклеточные шаровидные или короткоовальные 2,03,01,7-2,0 мкм, в массе пылят. Физиолого-биохимические свойства. Штамм 10-06 хорошо развивается на пептоне, хорошо усваивает нитраты (3) и аммоний азот. Усваивает манит,сорбит, глицерин. Хорошо утилизирует глюкозу, усваивает мальтозу, лактозу, хуже - рамнозу и арабинозу. Продуктивность штамма 10-06 на среде сусло-агар достаточно высокая и составляет 8,4 млрд. спор/см 2. Оптимальная температура для роста и развития данного штамма - 26-28 . Оценена инсектицидная активность штамма энтомопатогенного гриба 10-06 по отношению к имаго и личинкам майского хруща. Для определения биологической активности штамма готовили стандартную суспензию с титром 1106 спор/мл. Отмечена высокая восприимчивость взрослых жуков - 66,6 ,штамм поражает имаго, куколок и личинок фитофага. На личинках, куколках и имаго. - мицелий грибакремовато-белый, плотный. Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения. Пример 1 Продуктивность штамма гриба 10-06 в зависимости от состава питательной среды при культивировании глубинным способом. Исследование по подбору оптимального состава питательной среды для культивирования препарата на основе штаммаглубинным методом провели по 14819 1 2011.10.30 критерию продуктивности (титр спор/мл). Оценили шесть композиций жидких питательных сред. 1 Вода - 1 л Меласса - 80 мл Кукурузный экстракт - 20 мл 24 - 2 г 4 - 0,5 г- 2 г 3 Вода - 1 л БВК - 20 мл Кукурузный экстракт - 20 г 24 - 2 г 4 - 0,5 г- 5 г 5 Вода - 1 л Гидролизат дерти - 20 мл 3 - 9 г 4 - 0,75 г- 12 г 24 - 2,25 г 2 Вода - 1 л Меласса - 80 мл Гидролизат дерти - 20 мл 24 - 2 г 4 - 0,5 г- 2 г 4 Вода - 1 л Сахароза - 10 г 3 - 9 г 4 - 0,75 г- 12 г 24 - 2,25 г 6 Вода - 1 л Сахароза - 10 г Жидкие питательные среды заливали по 100 мл в колбы объемом 750 мл. Колбы со средой засевали посевным материалом (суспензия спор гриба) в количестве 10 от объема. Культуру выращивали на качалке/ 260 при скорости вращения 260 об/мин и температуре - 26 С в течение 72 часов. Титр спор определяли в камере Горяева. Таблица 1 Продуктивность штамма 10-06 в зависимости от состава искусственной питательной среды Продуктивность штамма 10-06, спор/мл Питательная среда 1 2 3 4 5 6 8 9 9 8 8 0,3110 0,3710 0,2610 0,2510 0,2810 0,002108 Среди испытанных сред перспективной для культивирования является среда под 2. Пример 2 Влияние продолжительности ферментации на продуктивность штамма гриба 10-06. Биопрепаратизготовили с использованием ферментера ПОЗ-22 на питательной среде меласса - 80 мл, гидролизат дерти - 20 мл, 24 - 2 г, 4 - 0,5 г,- 5 г из расчета на 1 л воды. Условия культивирования интенсивность аэрации - 10,5 л/л среды/мин,скорость вращения мешалки - 260 об/мин, температура - 26 С, рН - 5,4-5,6, продолжительность - 96 часов. Для определения титра нарабатываемой опытной партии препарата через 48, 72 и 96 часов ферментации отбирали пробы и определяли титр при помощи камеры Горяева. 3 14819 1 2011.10.30 Таблица 2 Влияние продолжительности ферментации на продуктивность грибаТитр (спор/мл), время культивирования (ч) Состав среды Условия культивирования 48 72 96 Меласса-80 мл, гидинтенсивность аэрации ролизат дерти - 20 мл, 10,5 л/л среды/мин, скорость вра 24 - 2 г, 4 - щения мешалки - 260 об/мин, темпе- 0,02109 0,34109 0,5109 0,5 г,- 5 г, вода ратура - 26 С, исходное- 5,4-5,6,до общего объема 1 л продолжительность - 96 часов Титр спор опытной партии биопрепарата составил 0,5109 /г. Пример 3 Оценка инсектицидной активности штамма 10-06 в отношении личинок майского хруща Для опыта использовали вегетационные сосуды с почвой. В опытах определяли чувствительность фитофага в зависимости от нагрузки препарата на вес почвы. Норма расхода препарата (титр 0,5109 /г) составила 5 и 10 г на 100 г почвы. Личинок 2-3 возрастов природной популяции майского хруща помещали в сосуды с зараженной почвой. В контрольном варианте почву не обрабатывали. Биологическая активность (с поправкой на гибель в контроле) при норме расхода препарата 10 г на 100 г почвы составила 63,7 . Пример 4 Определение биологической эффективности образца биопрепаратав отношении майского хруща. Оценку действия препарата в отношении личинок майского хруща провели в питомнике яблони на площади 0,2 га. Почва супесчаная, подстилаемая моренным суглинком. Численность личинок фитофага определили путем почвенных раскопок. В образцах присутствовали личинки майского хруща (.) 2-3 возрастов, численность которых до обработки составила в среднем 4 экз./м 2. Препарат внесли методом полива рабочей суспензии в период высадки подвоев яблони (после полива водой) из расчета 0,5 л/пог. м рядка с титром 1,25108 спор/мл. Контрольный вариант - полив водой. Биологическую эффективность препарата оценили по проценту выпавших растений через 130 сутки после высадки подвоев. Таблица 3 Показатели эффективности образца препаратав отношении майского хруща (.) Неприжившихся Средняя выК-во подвоев Биологическая эфподвоев сота подвоев Вариант опыта яблони в вафективность с учена 130 сутки рианте, шт. том контроля,экз. роста, см Штамм гриба 10-06(титр рабочей сус 464 15 3,2 75,6 67,1 пензии 1,25108 спор/мл) Контроль (вода) 413 54 13,1 59,6 05 2,66 препарат внесен в почву в период высадки подвоев (21 мая). 4 14819 1 2011.10.30 Использование штамма 10-06 (титр рабочей суспензии 1,25108 спор/мл) методом полива рабочей суспензии в период высадки растений позволяет защитить подвои от майских хрущей. Процент выпавших растений на варианте с использованием штамма 10-06 и контрольном составил 3,2 и 13,1 соответственно. Биологическая эффективность приема - 75,6 . В сравнении с контролем отмечено статистически достоверное увеличение высоты подвоев яблони на 12,6 . Источники информации 1. Король И.Т. Микробиологическая защита растений / И.Т.Король. - Москва Колос,1993. - С. 77. 2. Патент 2103873, МПК 01 63/00,12 1/14 // Бюл.4. - 10.02.98. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5