Штамм Paecilomyces fumosoroseus БИМ-F-328Д для производства энтомопатогенного препарата для защиты растений

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ШТАММБИМ 328 Д ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЭНТОМОПАТОГЕННОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ(71) Заявитель Республиканское научное дочернее унитарное предприятие Институт защиты растений(72) Авторы Прищепа Людмила Ивановна Янковская Елена Николаевна(73) Патентообладатель Республиканское научное дочернее унитарное предприятие Институт защиты растений(56) Янковская Е.Н. Защита растений на рубежевека. Материалы научн. практ. конф., посвященной 30-летию БелНИИЗР. - Мн., Белбизнеспресс,2001. - С. 463-464. Янковская Е.Н. Интегрированные системы защиты растений. Настоящее и будущее. Материалы междунар. научн. конф. - Мн., 2002. - С. 219-222 Янковская Е.Н. Защита растений. Сб. научн. тр. Вып. /. - Мн., 2000. - С. 169-174. Микульская Н.И. и др. Защита растений. Вып. 27. - Мн., 2003. - С. 145-156. Сосновска Д. Биофизиологические особенности энтомопатогенных грибов родаив связи с биологической защитой растений от сосущих вредителей ( , ). Автореф. дис. - М., 1990. С. 17-20. Борисов Б.А. и др. Защита и карантин растений. - 1997. -5. - С. 10-11. Кальвиш Т.К. и др. Защита сельскохозяйственных культур от вредителей и болезней в условиях Сибири. - Сб. научн. трудов. Новосибирск, 1984. - С. 151-154.(57) ШтаммБИМ 328 Д, обладающий инсектицидной активностью, для производства энтомопатогенного препарата для защиты растений. Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению средств защиты растений, и может быть использовано для производства грибных энтомопатогенных препаратов для защиты растений от вредителей. Известен штамм. вирулентный для пасленового минера 1. Известен штамм, эффективный против паутинного клеща 2. Известен штамм . , эффективный против хмелевой и бахчевой тли 4. Известен штамм . , эффективный против гусениц облепиховой моли 3. Известен штамм . , эффективный против трипса Пальми 5. Недостатком указанных штаммов является отсутствие вирулентности по отношению к тепличной белокрылке. Цель изобретения - выделение природного штамма . , высокоактивного против тепличной белокрылки. 10813 1 2008.06.30 Штамм 3/1 отобран из серии изолятов, выделенных из почвенных образцов из различных регионов Беларуси. Штамм выделен из почвы, отобранной в Минском р-не (опытное поле РУП Институт защиты растений) в 1998. Штамм гриба 3/1, обладающий инсектицидной активностью, для производства энтомопатогенного препарата для защиты растений от вредителей депонирован в коллекции непатогенных микроорганизмов Института микробиологии НАН Беларуси за номером БИМ - -328 Д. Штамм 3/1 имеет следующие характеристики. Культурально-морфологические признаки. Гифы мицелия несептированные, конидиеносцы прямостоячие, простые, с мутовками из 2-5 фиалид бутылевидной формы, часто собраны в небольших коремиях. Конидии одноклеточные, удлиненные, с закругленными или слегка заостренными концами, размером 3-41-2 мкм в цепочках по 3-17 штук. Культурально-морфологические признаки изучали на следующих питательных средах сусло-агар, среда Чапека. На указанных средах штамм образует белые, плотные, пушистые, приподнятые над субстратом колонии. Форма колоний - округлая или овальная,цвет обратной стороны на среде сусло-агар - светло-желтый, на среде Чапека - белый. Мицелий обильный, воздушный. При росте на среде Чапека у .3/1 хорошо выражена концентрическая и радиальная зональность, образованная за счет различной плотности мицелия центральная часть с углублением, окружена двумя валиками, часто с бугорками, коремиями. Периферическая часть прижата к субстрату, с выраженными радиальными тяжами. В большинстве случаев на среде Чапека (кроме вариантов с использованием маннозы, рамнозы и лактозы) реверзум окрашен в различные оттенки желтого (от кремового до коричневого),наиболее интенсивно на средах с глюкозой и ксилозой. С началом спороношения мицелий уплотняется, поверхность колоний становится мучнистой, порошащей, иногда с каплями светлой жидкости, приобретает светло-розовую окраску, которая со временем переходит в темно-розовую. На 7-е сутки после посева диаметр колоний на среде сусло-агар в среднем составляет 24 мм. Массовое спороношение на сусло-агаре отмечали на 13-14-е сутки. На искусственных средах и на погибших гусеницах вощинной моли . часто образует остроконечные, простые или дихотомически-разветвленные коремии. Физиолого-биохимические признаки. Оптимальная температура для роста и развития штамма - 24-26 С. Отношение к источникам углерода Изучение утилизации углеводов проводили на среде следующего состава источник углерода 20 г 3 2 г Н 2 РО 4 1 г 4 0,5 г С 0,5 г 4 0,01 г агар-агар 20 г Н 2 О 1000 мл. Хорошо утилизирует дульцит, инозит, маннит, сорбит, сахарозу, глюкозу, мальтозу,слабо - лактозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу и маннозу. Отношение к источникам азота. Изучение утилизации различных источников азота проводили на среде следующего состава сахароза 30,0 г Н 2 РО 4 1,0 г 4 0,5 г С 0,5 г 2 10813 1 2008.06.30 4 0,01 г Н 2 О 1000 мл. В качестве источников азота использовали 4 1,0 г/л ( 23 - 5,0 г/л) 3 1,0 г/л 2 1,0 г/л. Штамм хорошо утилизирует нитраты и нитриты, слабо - аммонийные источники азота. Штамм хорошо растет на твердых питательных средах (зерновых) в условиях массового культивирования. Оптимальный характер развития мицелия и раннее начало спороношения отмечено при выращивании штамма на среде из отходов ячменя с добавлением ячменной лузги. Инсектицидная активность. Инсектицидная активность у штамма выявлена по отношению к следующим вредителям защищенного грунта обыкновенному паутинному клещу, бахчевой тле., минирующим мухе.,тепличной белокрылке. Наиболее высокая чувствительность к штамму отмечена у тепличной белокрылки. Штамм поражает как имаго, так и личинок вредителя. Симптоматика микоза при поражении . 3/1 личинок тепличной белокрылки тело насекомых утрачивает прозрачность, уменьшается в размерах, становится матовым, высохшим. Начало гибели отмечали на 6-8-е сутки после обработки. На 14-15-е сутки после обработки отмечено развитие мицелия со спороношением на поверхности тела погибших особей, что может служить условием для дальнейшего распространения и циркуляции патогена в популяции вредителя. ЛК 50 (среднелетальная концентрация) суспензии конидий штамма составляет для личинок - возраста 0,7109 спор/мл. Способ пересева и хранение. Продолжительность выращивания на косяках среды сусло-агар - 14 суток, после чего штамм хранится в холодильнике (температура 4 С) без пересевов в течение 1-1,5 лет. Способ приготовления препарата на основе . 3/1. Штамм выращивают на питательной среде, состоящей из отходов ячменя от производства трихограммы с добавлением ячменной лузги (объемное соотношение 12). Среду стерилизуют автоклавированием в течение 1 ч при 1,5 атм. Температура выращивания 24-26 С. Время культивирования 10-12 дней при температуре 24-26 С, затем при комнатной температуре (17-20 С) до начала спороношения. Способ применения. Растения обрабатывают водной суспензией с титром спор 1,4109 в 1 мл. Полезные свойства штамма . 3/1 иллюстрируются следующими примерами. Пример 1. Определяли сравнительную инсектицидную активность штаммов . 3/1,. П 97 и . 7/5 для личинок тепличной белокрылки. (- возраст). Растения, заселенные вредителем, обрабатывали водной суспензией конидий с титром 1109/мл. Контролем служила обработка водой. Определяли биологическую эффективность по формуле Бэ 100 1 - (Ж 1 Ж 3/Ж 2 Ж 4), где Ж 1 число живых особей после обработки в опыте Ж 2 - число живых особей до обработки в опыте Ж 3 - число живых особей до обработки в контроле Ж 4 - число живых особей после обработки в контроле. Результаты исследований представлены в табл. 1. Полученные данные иллюстрируют высокую активность предлагаемого штамма. 3/1 в отношении целевого вида. Пример 2. Изучали влияние титра спор рабочей суспензии . 3/1 на гибель личинок белокрылки. Растения, заселенные личинками вредителя - возраста, обрабатывали суспензиями конидий . различной концентрации. Контролем служила обра 3 10813 1 2008.06.30 ботка водой. Гибель вредителя определяли как долю погибших особей (в процентах) от их общей численности. Результаты исследований представлены в табл. 2. На основании результатов математической обработки данных о гибели вредителя было установлено значение ЛК 50 (среднелетальной концентрации) для . 3/1 для личинок - 0,7109 спор/мл. Пример 3. Использовали штамм . 3/1 для наработки опытных образцов препарата. Культивирование проводили на твердой питательной среде из смеси отходов ячменя от производства трихограммы с ячменной лузгой (в объемном соотношении 12) в стеклянных емкостях. Среду стерилизовали автоклавированием под давлением 1,5 атм. в течение часа. После остывания среды до 38-40 С ее засевали спорами гриба. Время культивирования - 14 дней при температуре 24-26 С. Титр спор полученного препарата в среднем составлял 53109/г. Пример 4. Для оценки эффективности инсектицидного действия штамма . 3/1 его применяли против тепличной белокрылки. Использовали суспензии с титром 0,6109, 1,3109 и 1,5109 спор на мл. Первую обработку провели при наличии на растениях единичных имаго тепличной белокрылки, следующую - через 3 дня. Контролем служила обработка водой. На 14-е сутки в вариантах с применением энтомопатогенного гриба с титром 0,6 и 1,3109 спор на мл численность личинок составила 0,3 и 0,8 личинок на лист, в контрольном - 1 личинка на лист. В варианте с титром суспензии 1,5109 спор на мл личинок белокрылки не отмечено. Таким образом, применение препарата при выявлении первых взрослых особей позволяет локализовать очаг и сдержать нарастание численности вредителя. Высокая инсектицидная активность и продуктивность в условиях массового культивирования штамма 3/1 позволяет использовать его в качестве продуцента биопрепарата, предназначенного для защиты растений от тепличной белокрылки. Таблица 1 Инсектицидная активность штаммов . по отношению к личинкам тепличной белокрылки. Численность личинок, особей/ Биологическая эффективШтамм поле зрения бинокуляра ность действия с учетом контроля,до обработки на 15-е сутки после обработки П 97 13 5 62 3/1 16 3 81 7/5 11 3 73 Контроль 19 19- увеличение 4. Таблица 2 Влияние применения . 3/1 на личинок тепличной белокрылки. - возраста Титр рабочей суспензии,Гибель личинок,ЛК 50, спор/мл спор/мл на 7-е сутки на 14-е сутки Контроль 1,1 5,1 28,2 70,0 11010 28,3 63,4 1109 0,7109 8 1 10 4,0 23,3 11,4 67,2 1107 6 7,0 5,1 110 4 10813 1 2008.06.30 Таблица 3 Влияние применения . 3/1 на численность тепличной белокрылкиТитр рабочей суспензии.3/1, спор на мл Контроль 0,6109 1,3109 1,5109 Численность личинок белокрылки, особей на лист до обработки на 14-е сутки 0 1,0 0 0,3 0 0,8 0 0 Источники информации 1. Борисов Б.А., Ущеков А.Т. Энтомофильные грибы-гифомицеты против пасленового минера // Защита и карантин растений. - 1997. -5. - С. 10-11. 2. Кальвиш Т.К., Ракшаина М.Ц. Восприимчивость обыкновенного паутинного клеща(.) к некоторым энтомопатогенным грибам // Защита сельскохозяйственных культур от вредителей и болезней в условиях Сибири (Сибирское отделение ВАСХНИЛ). - Новосибирск, 1984. - С. 151-154. 3. Кальвиш Т.К., Санжимитупова Р.Д. Итоги производственных испытаний грибных препаратов. - В сб. Производство и применение грибных энтомопатогенных препаратов. М. ОРИСО Главмикробиопром, 1985. - С. 9-12. 4. Сосновска Д. Биофизиологические особенности энтомопатогенных грибов родаив связи с биологической защитой растений от сосущих вредителей ( , ). - Автореф.канд. биол. наук. - М ТСХА, 1990. - 20 с. 5.А. Репа ..- ( )( ) // . . 1996. - . 79. - . 3. - . 458-461. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5