Средство против вируса герпеса

61 31/22 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДСТВО ПРОТИВ ВИРУСА ГЕРПЕСА(71) Заявители Открытое акционерное общество Белмедпрепараты Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физикохимических проблем(72) Авторы Андреева Ольга Трифоновна Дунец Людмила Николаевна Петров Петр Тимофеевич Шадыро Олег Иосифович Царенков Валерий Минович(73) Патентообладатели Открытое акционерное общество Белмедпрепараты Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем в качестве средства против вируса герпеса. Изобретение относится к фармацевтике и медицине и касается средств, обладающих активностью против вируса герпеса. Известно использование в качестве эффективного противовирусного средства ациклогуанозина(Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т. 2. Изд. 14. - М. Новая волна, 2000. С. 331, 327). Задачей изобретения является расширение ассортимента средств, обладающих выраженным действием против вируса герпеса. Поставленная задача достигается тем, что в качестве средства против вируса герпеса применяется известное ранее соединение 4,6-ди-трет-бутил-2-фениламинофенол. 4,6-Ди-трет-бутил-2-фениламинофенол описан в литературе (Патент ФРГ 1119297,МПК С 07 С, 1962). Авторами обнаружены неочевидные свойства, позволившие применить его в качестве препарата против вируса герпеса. Пример 1. На белых нелинейных мышах массой 7-10 г воспроизводили летальную герпетическую нейроинфекцию, протекающую по типу менингоэнцефалита Вирус простого герпеса (ВПГ) 1-го типа, штамм ЕС вводили интраперитонеально в дозе 100 ЛД 50 в объеме 0,2 мл на мышь. Вирусосодержащим материалом служила культуральная жидкость культуры клеток , инфицированной ВПГ-1. Испытуемый препарат назначали в толерантных дозах 100,0 10,0 1,0 0,1 мг/кг. Препарат применяли в виде тонкой суспензии на известной основе для мази наружного применения (0,5 крахмальном геле). Схема лечения через 3 часа после инфицирования препарат вводили внутрижелудочно по 0,2 мл на мышь 1 раз в сутки в течение 7 суток. Для сравнения использован известный противогерпетический препарат ацикловир (ациклогуанозин), который готовили также как испытуемый препарат и в тех же дозах. Инфицированных животных делили на группы по дозам вводимого вещества. Контрольные группы включали 1) инфицированных животных, получавших плацебо (0,5 крахмальный гель) по схеме, адекватной лечебной 2) интактных животных. Количество животных в группе - 12-20 особей, повторность опытов не менее трех. Результаты учитывали по летальности и средней продолжительности жизни (СПЖ). Защитное действие испытуемого препарата сравнивали с группой плацебо и с эффективностью ациклогуанозина (табл. 1). 2 6594 1 Таблица 1 Эффективность испытуемого препарата в сравнении с ациклогуанозином на модели герпетического менингоэнцефалита у мышей Испытуемый препарат Ациклогуанозин Доза вещеЛетальность, Уровень ства, мг/кг Летальность, Уровень Р Р защиты,100 25,016,4 70,0 0,001 33,37,7 61,7 0,001 10 25,016,4 70,0 0,001 28,97,5 66,1 0,001 1 33,314,2 61,7 0,001 42,18,12 52,9 0,001 0,1 50,012,9 45,0 0,01 57,88,12 37,2 0,001 0,01 83,311,24 11,7 0,05 плацебо 95,05,0 Как следует из табл. 1, у леченных животных испытуемый препарат существенно снижал летальность во всех группах. Гибель животных в зависимости от дозы вещества составляла 25,016,4-50,012,9 и была достоверно ниже (0,001-0,01) по сравнению с 955,0 у нелеченных животных (группа плацебо). Уровень защиты при летальной герпетической инфекции, равный 70,061,7 , позволяет оценить действие испытуемого препарата как выраженное противовирусное, сопоставимое с действием ациклогуанозина,которое характеризовалось таким же уровнем защиты леченных животных в сравниваемых дозах 100,0 10,0 1,0 0,1 мг/кг. По критерию СПЖ (табл. 2) испытуемый препарат способствовал продлению жизни леченных животных практически в 2 раза по отношению к нелеченным с использованием доз 100,0-1,0 мг/кг СПЖ достигала 13,0- 11,30,96 дней в сравнении с 6,80,79 днями в группе плацебо. Действие ациклогуанозина было аналогичным у леченных препаратом в дозах 100,0-1,0 мг/кг. СПЖ составила 12,02,0-10,11,51, а в группе плацебо 5,80,41 дня. Таблица 2 Эффективность испытуемого препарата и ациклогуанозина по СПЖ на модели летального менингоэнцефалита, индуцированного ВПГ 1 типа Доза вещества,Средняя продолжительность жизни Р мг/кг Испытуемый препарат ациклогуанозин 100 12,22,0 12,2 2,0 0,001 10 13,00,0 10,32,17 0,001 1 11,30,96 10,11,51 0,001 0,1 10,51,06 10,11,51 0,001 0,01 6,30,47 0,05 плацебо 6,80,79 5,80,41 Пример 2. Оценивали эффективность испытуемого препарата при местной терапии герпетических поражений. Кроликов породы Шиншилла массой 2,0-2,5 кг инфицировали под местной анестезией путем инсцилляции вируса на скарифицированную оболочку глаза. Развившееся заболевание глаз протекало по типу острого кератоконъюктивита (КК). Использовали ВПГ 1 типа в дозе 1105 ТЦД 50 по 0,04 мл на каждый глаз. Клинику и динамику инфекционного процесса оценивали по балльной системе. Срок наблюдения 14 суток охватывал все стадии КК. Испытание испытуемого препарата осуществлено в мазевой лекарственной форме в концентрации 5 , 3 , 1 , 0,5 , 0,1 . Лабораторные образцы мази готовили на известной глазной основе (ланолинвазелин в соотношении 11). Контрольный препарат. Бонафтон - известный противогерпетический препарат, испытан в виде 0,05 глазной мази (Казанское производственное химико-фармацевтическое объединение Татхимформпрепараты) (основа - ланолинвазелин в соотношении 11). 3 6594 1 Схема лечения экспериментального КК. Курс лечения 7 суток ежедневные аппликации мази в конъюктивальный мешок 3 раза в сутки через 12 ч после инфицирования. В группе плацебо по той же схеме применяли глазную основу. Контроль переносимости осуществляли на интактных животных. Мазь в концентрации 5,0-0,5 закладывали в конъюктивальный мешок по лечебной схеме. Действие оценивали по сумме клинических симптомов в баллах. В табл. 3 суммированы данные о переносимости испытуемого препарата - макроизменений со стороны слизистых и кожи глаз кроликов не выявлено. Таблица 3 Влияние испытуемого препарата на ткани глаз интактных животных Концентрация мази,Симптомы КК баллы х на сутки Вид мас.Токсичность животных Испытуемый Ланолин 3 5 7 9 11 14 препарат вазелин 5,0 95,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 3,0 97,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 Кролики не выявлена 1,0 99,0 0,0 0.0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,5 99,5 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 У леченных животных (табл. 4) со всеми испытанными концентрациями отмечено защитное действие испытуемого препарата. На ранних стадиях и пике развития КК уровень клинических проявлений снижался в 2 и более раз. В сравнении с контрольным препаратом испытуемый препарат проявил защитный эффект на уровне бонафтона. Таблица 4 Влияние испытуемого препарата на течение экспериментального герпетического кератоконьюктивита у кроликов, инфицированных ВПГ 1-го типа Мазь,Симптомы КК, баллы, , на сутки наблюдения мас.испытуемый 1 2 3 5 7 9 11 13(14) препарат 1,220,15 5,280,37 3,650,3 2,110,21 1,270,32 0,750,25 0,0 5 0,01 0,001 0,001 0,001 0,001 0,01 0,05 4,820,52 4,050,2 3,780,27 2,310,34 3 0,001 0,001 0,001 0,02 1,500,14 4,250,21 3,170,3 2,410,37 1,230,23 0,860,14 0,0 1 0,01 0,001 0,001 0,001 0,001 0,05 1,370,37 2,550,25 4,330,13 3,120,3 1,950,14 1,750,15 0,660,36 0,0 0,5 0,01 0,01 0,001 0,001 0,001 0,01 1,150,26 4,801,0 4,670,48 3,220,1 2,950,21 1,970,41 1,920,43 1,00,53 0,1 0,01 0,01 0,001 0,001 0,001 0,02 0,05 0,05 Бонаф- 1,920,04 5,750,02 4,00,5 1,920,02 1,420,11 1,050,11 0,50,07 тон, 0,05 0,01 0,001 0,001 0,001 0,001 0,05 0,05 КИ 2,960,27 7,20,0 11,90,60 9,991,0 7,720,70 4,320,44 2,880,44 2,880,44 КИ - контроль инфекции, группа плацебо. Из представленных в примерах и таблицах данных видно, что предлагаемый испытуемый препарат обладает выраженным противовирусным, в частности антигерпесным действием. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.