Способы очистки 10-дезацетилбаккатина III и таксотера

(72) Авторы Андре ДУРАН Ален ГЕРБО Рудольф МАРГРАФ(57) Изобретение относится к способам очистки 10-дсзацетилбаккатинаи таксотера разделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из спиртов, сложных эфиров и алифатических углеводородов, причем коэффициент разделения между фазами находится в пределах от 0,1 до 10. Настоящее изобретение касается способа очистки таксоидов разделительной центробежной хроматографией и, в частности, способа очистки таксотера и 10-дезацетилбаккатина . Получаемый из листьев тиса 10-дезацетилбаккатиниспользуется для изготовления таксотера в соответствии со способами, описанными в ЕПВ 0253738 и ЕПВ 0336841. 10-дезацетилбаккатин , получаемый из листьев тиса методом экстрагирования, содержит примеси преимущественно из ряда таксоидов, в частности бензоилокси-2 а ацетокси-4 эпокси-5, 20 пентагидрокси-1,7, 10, 13 а, 19 оксо-9 таксен-11, бензоилокси-2 а ацетокси-4 эпокси-5, 20 тетрагидрокси-, 7 а, 10, 13 таксен-11, или токсинов. Таксотер, получаемый из 10-дезацетилбаккатинас помощью полусинтеза, содержит в качестве основных примесей продукты этерификации примесей, содержащихся в 10-дезацетилбаккатине , а также другие примеси, образующиеся в результате эпимеризации углерода на 2 боковой цепи. 10-дезацетилбаккатин , а также таксотер, могут очищаться преимущественно способами жидкой хроматографии на колонке, в частности, способом высококачественной жидкой хроматографии на колонке кремния. Если эти способы и могут быть успешно использованы для очистки продукта в количестве нескольких десятков граммов, то их промышленное применение связано с целым рядом трудностей, в частности,большим расходом растворителей, извлечением и уничтожением загрязненного токсичными отходами кремния. Было установлено, что очистка таксоидов, в частности таксотера и 10-дезацетилбаккатина , может осуществляться способом разделительной центробежной хроматографии или высокоскоростной хроматографии с противотоком, описанной в статье А. Фуко и Р. Россэ, , 16(3), 157-167 (1988). Так как таксоиды являются, как правило, высокотоксичными продуктами с повышенной хрупкостью, то задачей изобретения является создание таких способов и очистки, которые позволяют получить высокий выход чистого продукта без использования дорогостоящей твердой основы для очистки (покупка, эксплуатация, уничтожение) при небольшом расходе растворителей и относительно несложной автоматизации для обеспечения непрерывного производства. Поставленная задача решается тем, что в способе очистки 10-дезацетилбаккатинаи таксотера разделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из 4404 1 воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из спиртов, сложных эфиров и алифатических углеводородов, согласно изобретению используют смесь алифатического углеводорода, сложного эфира, спирта и воды, коэффициент разделения между фазами которой находится в пределах от 0,1 до 10,преимущественно от 0,5 до 5, но главным образом около 1. Продукт с коэффициентом разделения К 10 растворяется в верхней фазе в 10 раз лучше, чем в нижней фазе. Следовательно, если подвижной является верхняя фаза, произойдет очень быстрое элюирование продукта, а если подвижной является нижняя фаза, то этот процесс будет слишком длительным, а растворение недостаточно эффективным. Когда же К имеет значение, близкое к 1, растворяемость в обеих фазах будет практически одинакова, и можно использовать оба способа элюирования, при необходимости сочетая один с другим, что обеспечит максимальное растворение. Для 10-дезацетилбаккатинаособенно успешно можно использовать смеси алифатического углеводорода,сложного эфира, спирта и воды, в частности, комбинацию гептанэтилацетат метанолвода в отношении 1-21-2 по объему. Кроме того, необходимо, чтобы удерживание неподвижной фазы, соответствующей части полного объема установки, заполненной неподвижной фазой в состоянии равновесия при постоянном расходе подвижной фазы, оставалось наиболее полным и равным, по меньшей мере, 50 . Для повышения производительности следует работать на максимальном расходе, который, тем не менее, ограничен максимальным давлением ротора. Для очистки таксотера особенно высокий результат получают при использовании смеси алифатического углеводорода, сложного эфира, спирта и воды, например, гептанаэтилацетатаметанолаводы в соотношении 2-4-3-2 по объему, имеющей 80 удерживания, коэффициент разделения порядка 0,5 и обеспечивающей быстрое элюирование, что обеспечивает существенное повышение производительности. Задача решается также и тем, что в способе очистки 10- дезацетилбаккатинаразделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из кетонов, согласно изобретению используют смесь алифатических кетонов и воды, коэффициент разделения между фазами которой находится в пределах от 0,1 до 10. Высокий результат очистки получают при использовании смеси метилизобутилкетона ацетона воды в соотношении 232 по объему. Разделительная центробежная хроматография может вестись с использованием установок, выпускаемых промышленностью, в частности, фирмой. . . ., 17, 65 (1986) или фирмой, Киото, Япония. Разделительная центробежная хроматография позволяет осуществить разделение составляющих разделяемой смеси на две жидкие несмешивающиеся фазы путем последовательного приведения в состояние равновесия. Способ отличается стойким механизмом разделения, высокой степенью удерживания неподвижной фазы и высокой скоростью подвижной фазы, что позволяет всего за несколько часов получить высокий результат. Ниже приведены примеры практического осуществления изобретения. Пример 1. Очищение таксотера. Таксотер (.бутоксикарбониламино-3 фенил-3 гидрокси-2 пропионат-(2, 3) ацетокси-4 бензоилокси-2 а эпокси-5, 20 тригидрокси-, 7, 10 оксо-9 таксен-11 ила-13 а) получают в результате обработки цинком в присутствии уксусной кислоты .бутоксикарбониламино-3 фенил-3 гидрокси-2 пропионат-(2,3) ацетокси-4 бензоилокси-2 а эпокси-5, 20 гидрокси- бис-(трихлор-2,2,2 этоксикарбонилокси)-7, 10 оксо-9 таксен-11 ила-13 по способу, описанному в ЕПВ 0336841. 10 г .бутоксикарбониламино-3 фенил-3 гидрокси-2 пропионат-(2,3) ацетокси-4 бензоилокси-2 а эпокси-5, 20 гидрокси-1 бис -(трихлор-2,2,2 этоксикарбонилокси)-7, 10 оксо-9 таксен-11 ила-13 а растворяют в 150 см 3 метил .бутилэфира, затем добавляют 10 г цинка. После выпаривания получают порошок серого цвета, который помещают в реактор. Перемешивают и добавляют в течение 5 мин 6 см 3 уксусной кислоты в смеси с 50 см 3 ацетонитрила. Затем осуществляют наружный нагрев с помощью водяной бани при 45 С в течение 1 ч. После охлаждения в ледяной бане добавляют 850 см 3 метил .бутилэфира при сильном перемешивании, а соли цинка и цинк в избытке фильтруют на пористом стекле с размером пор, равным 4. Фильтрат подвергают сухому обогащению. В результате получают массу весом 12 г, которую тут же обрабатывают смесью, состоящей из 20 см 3 этилацетата, 15 см 3 метанола, 10 см 3 гептана и 10 см 3 воды. Разделительную центробежную хроматографию ведут на установке-07. К центрифуге подключены два поршневых насоса с клапанами, ограничивающими давление до 55 бар. Один насос обеспечивает перекачивание одной или другой фазы через направляющий клапан, другой обеспечивает ввод. После заполнения установки неподвижной фазой при низком числе оборотов (200 об/мин) и сильной подаче(110 см 3/мин) немедленно начинают ввод. Вводят две фазы, начиная с водной фазы, элюированной при расходе 60 см 3/мин водной фазой смеси гексанэтилацетатметанол вода в отношении 2432 по объему. Отбирают 2 4404 1 1,9 л неподвижной фазы, т.е. удержание составляет 71 , затем собирают фракции объемом 15 см 3. Фракции 72-110 собирают вместе и концентрируют до получения объема 140 см 3. Выпавший осадок отделяют фильтрованием. В результате получают 80,5 , выход тригидратированного таксотера весом 5,2 г, чистота которого по отраслевому стандарту составляет 99,7 . Пример 2. Очищение таксотера Берут компоненты примера 1, но в других количествах, в частности, из 82 г .бутоксикарбониламино-3 фенил-3 гидрокси-2 пропионат-(2,3) ацетокси-4 бензоилокси-2 а эпокси-5, 20 гидрокси- бис-(трихлор 2,2,2 этоксикарбонилокси)-7, 10 оксо-9 таксен-11 ила 13 а, 82 г цинка и 150 см 3 смеси на основе 49,2 см 3 уксусной кислоты и 328 см 3 ацетонитрила получают 115 г неочищенного продукта, теоретически содержащего 49,69 г таксотера или 53 г тригидратированного таксотера. Неочищенный продукт обрабатывают 450 см 3 метил .бутилэфира, затем трижды промывают водой объемом 450 см 3, содержащей 15 г хлористого натрия. Собранные водные фазы дважды экстрагируют 200 см 3 метил .бутилэфира. Три эфирных экстракта отбирают и подвергают сухому обогащению. В результате получают массу весом 72 г, которую обрабатывают метанолом в количестве 120 см 3. К полученному раствору бледно-желтого цвета добавляют по порядку 160 см 3 этилацетата, 80 см 3 воды и 80 см 3 гептана. В результате получают две прозрачных жидких фазы общим объемом 460 см 3, верхний слой которых составляет около 1/4 общего объема вместо 35 при отсутствии таксотера. Установку разделительной центробежной хроматографии заполняют органической фазой с подачей 110 см 3/мин и при скорости вращения 200 об/мин. После заполнения установки скорость вращения повышают до 800 об/мин. Вводят водную фазу, а после ввода органической фазы промывают 200 см 3 органической фазы,которая при подаче 60 см 3/мин элюируется водной фазой. Получают 2,5 л неподвижной фазы в избытке, что соответствует удерживанию в 67,7 . После пропускания 200 см 3 неподвижной водной фазы получают 360 фракций объемом 12-13 см 3. Фракции 25-110 концентрируют до объема 200 см 3 и получают 87,7 выход осадка тригидратированного таксотера весом 46,5 г, чистота которого составляет 99,1 . Пример 3. Очищение 10-дезацетилбаккатина . Для разделительной центробежной хроматографии используют хроматографНРСРС серии 1000 общим объемом 245 см 3. Ротор, вращающийся со скоростью 100 об/мин, заполняют с верхней попеременной подачей органической фазой и водной фазой смеси метилизобутилкетонацетонвода в отношении 232 по объему, органическую фазу подают со скоростью 6 см 3/мин, а водную - 3 см 3/мин. Затем скорость вращения доводят до 1200 об/мин и вводят 1,5 г неочищенного кристаллизованного 10-дезацетилбаккатина , содержащего 83,310 дезацетилбаккатинаи 3,410-дезацетил-гидрокси-19 баккатина . Элюируют сверху вниз водной фазой при подаче 3 см 3/мин и каждые две минуты отбирают фракции объемом 6 см 3. 10-дезацетил-гидрокси-19 баккатинсодержится во фракциях 39-52. При поступлении 61-й фракции направление элюирования меняют на противоположное и начинают использовать органическую фазу в качестве подвижной, направленной снизу вверх при подаче 5 см 3/мин с отбором каждые две минуты фракций объемом 10 см 3. Фракции 70-84, содержащие 10-дезацетилобаккатин , концентрируют при пониженном давлении. После рекристаллизации в 15 см 3 ацетонитрила получают 1,25 г белого кристаллического 10 дезацетилбаккатина , сольватированного ацетонитрилом (1 моль/моль), чистота которого, определенная методом высокоточной жидкой хроматографии, составляет 98 по отраслевому стандарту. Выход с коррекцией составляет 91,2 . 1. Способ очистки 10-дезацетилбаккатинаи таксотера разделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из спиртов, сложных эфиров и алифатических углеводородов, отличающийся тем,что используют смесь алифатического углеводорода, сложного эфира, спирта и воды, коэффициент разделения между фазами которой находится в пределах от 0,1 до 10. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что коэффициент разделения между фазами находится в пределах от 0,5 до 5. 3. Способ по п. , отличающийся тем, что коэффициент разделения между фазами близок к 1. 4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что используют смесь гептана, этилацетата, метанола и воды. 5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что для очистки 10-дезацетилбаккатинаиспользуют смесь гептанэтилацетатметанолвода в соотношении 1212 по объему. 6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что для очистки таксотера используют смесь гептанэтилацетатметанолвода в соотношении 2432 по объему. 3 4404 1 7. Способ очистки 10-дезацетилбаккатинаразделительной центробежной хроматографией между двумя частично смешивающимися фазами, состоящими из воды и нехлорированных и нетоксичных растворителей, выбранных из кетонов, отличающийся тем, что используют смесь алифатических кетонов и воды,коэффициент разделения между фазами которой находится в пределах от 0,1 до 10. 8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что используют смесь метилизобутилкетона, ацетона и воды. 9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что используют смесь метилизобутилкетонацетонвода в соотношении 232 по объему. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 4