Поли[(1-4)-альфа-L-гулуроно-(1-4)-бетта-D-маннуронат]кальций-натриевая соль, обладающая способностью выводить радионуклиды из организма

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ комшът РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ(54) полИ (1-4)- оъ-ь-гУлУвоно-п-о-в-в-МАННУРОНАТ КАЛЬЦИЙ НАТРИЕВАЯ СОЛЬ, ОБЛАДАЕОЩАЯ СПОСОБНОСТЬЮ ВЫВОДИТЬ РАДИОНУКЛИДЫ ИЗ ОРГАНИЗМА(21) Номер заявтси 2034 (71) Заявитель Акционерное общество Биотехно(73) Патентообладатель Акционерное общество Биотехнология (КН)с мол.м. 10-15 иди-содержащая 75-9596 гулуроновой кислоты (от суммарного содержания гулуроновой и маннуроновойщ кислот) и 51-1 О,2 кальция, обладающая способностью выводить радионуклиды из организма.Изобретение относится к медицине, а именно к созданию нового лекарственного препарата, предотвращающего всасывание радионуклидов в желудочно-кишечном тракте человека(как в случаях острых отравлений, так и при использовании препарата в профилактических ЦВЛЯХ- . Для этих целей могут быть использованы альгинат натрия и альгинат кальция. Однако О специфическая биологическая активность этих соединений для Целей выведения радионуклидов из организма невысока.Известен деградированньхй альгинат 0.0.1, эффективно предотвращающий сорбцию радиоактивного стронция, представляющий собой натриевую соль низкомолекулярного(молекулярная масса 3500 дальтон) альгината, содержащего 96,9 гулуроновой кислоты, и полученного кислотным гидролизом из высокомолекулярные альгината 1.Однако эффективность его действия достигается при высоких дозах, что может вызвать побочные эффекты при длительном применении.Задача настоящего изобретения - новое производное альгиновой кислоты - Альгисорб,позволяющее более эффективно выводить изотопы стронция И других токсичных металлов из организма животных и человека.Для Достижения поставленной задачи предложен препарат Альгисорб-поли(1-4)-ос-1 гулуроно-(1-4)-З-П-маннуронатдальний-натриевая соль со следующей структурной форму ДОИ.где Ме 1 Та, Са причем содержание кальция составляет 51-102Соответствующие сигналы атомов углерода сс-Ь тулуроновой кислоты обозначены С (1-6),В-В-маннуроновой кислоты - М(1-6).Спектры получены на спектрометре Вшкег Р 11 у 511 с ИМ - 250 для 5 растворов препарата в 10 В 20 - растворе натрия цитрата при 80 С в условиях полного подавления спин спинового взаимодействия с протонами.. Химические сдвиги (М.д.) сигналов измеряли относительно диметил-сульфоксида как внутреннего стандарта.Среднемассовую молекулярную массу определяли гель-фильтрацией ВЭЖХ-методом колонка ТЗК Ст 3000 507 7,5600 мм элюент - 0,2 М раствор натрия цитрата, рН 4,6 1 мл/мин,рефрактометр. Стандарты калибровочного графика ПСС 100-4,4 кДа. Образец 5 ш/ьш в 0,2 М растворе натрия цитрата.Существенными признаками, обеспечивающими высокую эффективность препарата в качестве средства для выведения радиоактивных металлов из организма животных и человека,являются следующие- использование солевой формы с содержанием кальция 5,1-10,2- среднемассовая молекулярная масса препарата долэкна быть в диапазоне 10 000 15 000 дальтон 4- содержание тулуроновой толсты в препарате должно бьпъ 75 95 от совокушчого содержанияВыход за пределы вьпцеуказанньш параметров приводит к снижению эффективности сорбЦии радионуклидов в желудочно-кишечном тракте.Препарат, обладающий вышеуказанными признаками, может быть получен из альгиновой кислоты или альгината натрия по следующей схеме .1) кислотный гидролиз апьгиновой кислоты или альгината натрия с последующей нейтрализацией и фильтрацией раствора2) Переосаждение низкомолекулярной альгиновой кислоты при рН-2,5 с последующей фильтрацией осадка и переведением в натриевую сольЗ) осансдение конечного продукта кальция хлоридом с последующим обезвоживанием осадка спиртом и сушкой. Пример 1. К 800 мл альгиновой кислоты (содержание основного вещества 2,5) из бурых водорослей Ьагпйпапа Щштата, Ьашйпагйа засспагйпа. приливают 8,1 мл концентрированной серной кислоты и вьщерживают 15 мин при 98-100 С с перемешиванием. Смесь нейтрализуют 20-м раствором натра едкого до рН 70, фильтруют и подкисляют соляной псислотой дорН 25. Вьшавший осадок грильтрутот, суспензирутот в равном объеме воды и нейтрализуют 20-м раствором натра едкого до рН 7,0. Целевой продукт осаждают добавлением 100 мл 10 раствора кальция хлорида и фильтруют. Осадок трехкратно обезвоживают равными объемами 96 этилового спирта с последующей фильтрацией и сушкой. Выход конечного продукта 30,2. Содержание кальция8,6, М 14 000 дальтон. Содержаниегулуроновой кислоты 85,0 от суммарного содержания гулуроновой и маннуроновой кислот.Пример 2. К 23,5 г натрия апьгината (ТУ 1574-74, влажность 15) прилипают 400 мл воды,24 мл концентрированной соляной кислоты и выдерживают при 98-100 С в течение 15 мин с перемешиванием. Далее обрабатывают как в примере 1. Выход конечного продУКГа 28,8. Содержание кальция 7,6. Мш 12 000 дальтон. Содержание гулуроновой кислоты 80,8 от суммарного содержания гулуроновой и маннуроновой кислот.Пример З. Изучение специфической биологической активности в опытах на нсивотньшИсследования выполнены на 410 белых крысах беспородных и линии Виотар обоего пола, массой 180-250 г, и 17 беспородных собаках обоего пола, массой 10-15 кг. Альгисорб применяли в дозах 500 и 2000 мг/кг (от массы тела). Внутрижелудочно крысам сорбент вволили в виде взвеси в воде объемом 0,5-2 мл. Собакам Альгисорб вносили в мясной фарш. В)работе использованы радиоизотопы стронция-85, кальЦия-45, цезия-137, циркония-ББ, ниобия-95 в виде хлоридов.Таблица Эффективность Альгисорба в выведении изотоповИзотоп, доза на хси- Препарат, су Животное Эффективность в вьтнотное, (кБк) точная доза, (изученный орган) ведения относительно мг кг кон оляРадионуклиды скармливали хшвотным вместе с кормом. Контрольные этшвотнъте получали корм с радионуклидами без Альгисорба. На третий день после последней дачи сорбента хотнотных умерщвляли. Об эффективности Альгисорба судили на основании определения. содержания радионуклидов в органах - мишенях.Активность изотопов в пробах определяли по методикам и на приборах, прошедших метрологическую экспертизу. Результаты приведены в таблице.Как видно из таблицы, деградированньтй альгинат кальция (прототип) показал недостаточную эффективность сорбции стронция-85. Образцы Альгисорба на 80-90 предотвращали сорбцию радиоактивного стронция.Пример 4. Изучение острой токсичности Альгисорба.Острая токсичность изучалась на белых беспородных крысах-самцах массой 200 т 20 г. Альгисорб в виде взвеси в 2 крахмальном клейстере вводили внутрижелудочно в различных дозах 2, 4, б, 8 и 10 г/кг массы тела.При всех испытанных дозах не обнаружено случаев гибели животных, а также признаков,указывающих на ухудшение состояния здоровья. Более высоте дозы Алъгисорба были ограничены возможностью их введения.Таким образом, не было обнаружено токсического действия Альгисорба в испытанных дозах. Доза 10 г/кг является переносимой, что свидетельствует о безвредности препарата. Последующее наблюдение за животными в течение 1 месяца не выявило никаких изменений в состоянии здоровья крыс они нормально росли и развивались и не отличались от крыс биологического контроля.Пример 5. Изучение хронической токсичности Альгисорба.Опыты по изучению хронической токсичности выполнены на белых беспородных крысах сгшцах с начальной массой 220-2 б 0 г при дозе Альгисорба - 500 мг/кг. Препарат назначали в виде добавки в корм ежедневно в течение 1, 2 и 3 месяцев, добавляемое количество Альгисорба при этом составляло 0,2 96 суточного рациона. За время опыта у животных, как получавших Альгисорб, так и не получавших, не наблюдалось каких-либо болезненных проявлений. Они были активны, охотно поедали предлагаемый им корм, хорошо росдш и развивались. Как и в контрольной группе, у подопытных крыс масса тела, постоянно росла и к концу эксперимента превысила исходную на 85 .Состояние желудка, печени, кищечника крыс опытных и контрольных групп не различалисъ.Таким образом, применение препарата в течение трех месяцев не повлияло на строениевнутренних органов крыс. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии отрицательно го действия Альгисорба на внутренние органы.Заказ 1234 Тираж 20 экз. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Мш-тск, проспект Ф. Скорины, 66.