Вакцина против пастереллеза крупного рогатого скота

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ВАКЦИНА ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(73) Патентообладатели Скибо Вадим Никодимович, Шимко Владимир Владимирович(57) Вакцина против пастереллеза крупного рогатого скота, содержащая антиген в виде формалинизированной суспензии микроорганизмов родаи алюминийсодержащий адъювант, отличающаяся тем,что в качестве антигена она содержит свежевыделенные из неблагоприятных по пневмоэнтеритам хозяйств инактивированные патогенные культуры микроорганизмов видови, а в качестве адъюванта - алюминия гидрат окиси коллоидный при следующем соотношении компонентов, мл/л формалинизированная суспензия свежевыделенных из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств патогенных культур микроорганизмов видов Р , 3,6 х 109- 3,8 х 109 кл/мл Р , 3,6 х 109 - 4,0 х 109 кл/мл алюминия гидрат окиси коллоидный, 6-ый Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для профилактики и лечения респираторных заболеваний животных, преимущественно против пастереллеза крупного рогатого скота. Известна вакцина против пастереллеза животных, включающая в качестве антигена формалинизированную суспензию производственных штаммов микроорганизмов родаи адъювант 1,2. Однако эта вакцина недостаточно эффективна против этой болезни, так как производственные штаммы родав процессе пассажей теряют антигенные и иммуногенные свойства. Задачей настоящего изобретения является повышение антигенных и иммуногенных свойств вакцины. Поставленная задача достигается тем, что вакцина против пастереллеза крупного рогатого скота в качестве антигена содержит свежевыделенные из неблагоприятных по пневмоэнтеритам хозяйств инактивированные патогенные культуры микроорганизмов видови, а в качестве адъюванта - алюминия гидрат окиси коллоидный при следующем соотношении компонентов, мл/л Формалинизированная суспензия свежевыделенных из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств патогенных культур микроорганизмов видов 736-7383,6 х 109 - 3,8 х 109 кл/мл 3,6 х 109 - 4,0 х 109 кл/мл 210-216 алюминия гидрат окиси коллоидный, 6 -ный 48-52. По нашим данным при исследовании патматериала из хозяйств, где имело место заболевание телят с поражением органов дыхания в семи случаях из восьми выделили пастереллы, патогенные для белых мышей. 2757 1 Причем в пяти хозяйствах выделили Р.в двух хозяйствах установили смешанную инфекцию Р.и . . Предложенную вакцину производят следующим образом. В качестве патматериала для выделения микроорганизмов используют легкие, бронхиальные лимфоузлы,сердце, почки, печень, селезенку и костный мозг от павших или вынужденно убитых животных из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств. Бактериологические исследования по выделению пастерелл проводят по общепринятым методикам. Первичные бактериологические посевы и дифференциацию пастерелл проводят согласно Краткого определителя бактерий Берги, под ред. Хоулта, М. 1980, Методических рекомендаций по диагностике пастереллезов сельскохозяйственных животных, 1987. Патогенность выделенных пастерелл изучают на мышах массой 1820 гр. Мышей заражают бульонной культурой подкожно (0,2 мл) и в брюшную полость (0,2 мл). За зараженными животными наблюдают в течение 10 дней. Иммуногенные свойства выделенных пастерелл изучают на белых мышах в лабораторных условиях. Для накопления микробной массы свежевыделенные и идентифицированные патогенные для белых мышей культуры микроорганизмов видовипересеивают на мясопептонный бульон (МПБ) на переваре Хоттингера, который готовят следующим образом. Один килограмм мяса, очищенного от жира и сухожилий, нарезают кусками и небольшими порциями опускают в кастрюлю с двойным количеством (по отношению к мясу) кипящей воды. Кипятят в течение 1520 минут, затем вынимают шумовкой и пропускают через мясорубку. Устанавливаютбульона 8,0. Затем опускают фарш в бульон, охлажденный до 40 С. Добавляют поджелудочную железу, пропущенную через мясорубку в количестве 10 к взятой жидкости (на 1 л жидкости 100 гр железы) или сухой панкреатин в количестве 0,5 , размешивают, доводят р до 7,8-8,0. Такое подщелачивание повторяют через 30 мин. Добавляют 2-3 хлороформа, бутыль несколько раз встряхивают и оставляют на 10-14 дней при комнатной температуре. Первые 3-4 дня ежедневно проверяют реакцию среды. По окончании переваривания раствор фильтруют и стерилизуют. Указанные выше культуры микроорганизмов (каждую культуру в отдельности) пересевают на МПБ на переваре Хоттингера в пробирках по количеству матр и инкубируют в термостате при температуре 36,537,5 С в течение 18 часов. После инкубации бульонную культуру засевают на МПА на переваре Хоттингера в матры емкостью 1,5 л из расчета 1 пробирка бульонной культуры на матру. Мясопептонный агар готовят на переваре Хоттингера по общепринятой методике. Разливают расплавленный агар в биологические флаконы (матры) емкостью 1,5 литра, из расчета 260 мл на флакон. Культуру на МПА в матрах (биологические флаконы) выращивают в термостате при температуре 36,537,5 С в течение 18 часов. Затем культуру вышеуказанных микроорганизмов смывают с агара 50 мл физиологического раствора на одну матру. Смытую культуру Р.и .(каждую культуру раздельно) сливают со всех флаконов в одну стерильную емкость, перемешивают и определяют концентрацию бактерий по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Контроль чистоты культур проводят микроскопически. Культуры должны быть однородными, не содержать посторонней микрофлоры. После определения оптической плотности концентрацию бактерийдоводят физиологическим раствором до 3,6 х 109 - 3,8 х 109 кл/мл, адо 3,6 х 109 - 4,0 х 109 кл/мл. Приготовленные таким образом культуры микроорганизмов смешивают в указанном в таблице 1 соотношении. В каждый, из указанных в таблице 1 вариант смеси добавляют для инактивации формалин в количестве 0,5 к конечному объему. Перед инактивацией формалин разводят в два раза физиологическим раствором. После тщательного взбалтывания взвесь выдерживают в термостате в течение 24 часов, а при комнатной температуре 3 суток с периодическим помешиванием. Полноту инактивации определяют путем посева на МПБ и МПА в соответствии с ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности. Затем к каждой из полученной формалинизированной суспензии микроорганизмов добавляют в качестве адъюванта алюминия гидрат окиси (гидроксал) (ГОСТ 18287-81) в количестве 0,3 в виде 6- ного раствора. Рабочий раствор гидроксала перед использованием стерилизуют автоклавированием при давлении 2 атм. в течение 30 мин. Получают варианты вакцин с содержанием компонентов, указанных в таблице 2. Полученные варианты вакцин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Вакцины считаются активными, если они имеют коэффициент иммунологической эффективности не ниже 80 . Полученная вакцина предназначена для профилактики и ликвидации пневмонии животных, преимущественно пастереллеза молодняка крупного рогатого скота представляет собой прозрачную слегка опалесци 2 2757 1 рующую жидкость с хорошо разбивающимся при встряхивании белым осадком. Ее применяют телятам,стельным коровам и нетелям. Вакцину применяют внутримышечно с соблюдением правил асептики и антисептики, крупному рогатому скоту в дозе 4 мл, независимо от возраста. Иммунитет наступает через 10-12 дней и сохраняется 5-6 мес. Предложенная вакцина была испытана в мае-июне 1995 года в Ждановичском тепличном комбинате на фермах Кунцевщина и Тарасово, где была отмечена вспышка заболеваемости телят в группах доращивания,сопровождающаяся пневмонией и диареей. Заболевание сопровождалось падежом и непроизводительным выбытием молодняка. Вакцина, приготовленная на основе выделенных из этого хозяйства патогенных культур пастерелл, была использована для вакцинации животных. Спустя 7-10 дней после вакцинации заболевание телят прекратилось. Таким образом, результаты опытов показывают, что вакцина против пастереллеза животных бактериальной этиологии обладает выраженным противоэпизоотическим эффектом и может быть использована для повышения сохранности молодняка крупного рогатого скота (акты прилагаются). Таблица 1 Содержание суспензий культур микроорганизмов в вакцине Вид микроорганизма 1 736 216 Состав вариантов вакцин против пастереллеза крупного рогатого скота Название 1 Формалинизированная суспензия свежевыделенных из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств патогенные культуры микроорганизмов видов, 3,6-4,0 х 109 кл/млАлюминия гидрат окиси колоидный 6 -ный Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.