Вакцина против трихофиции животных

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ВАКЦИНА ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ ЖИВОТНЫХ(71) Заявитель Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля,стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов(73) Патентообладатель Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов(57) Вакцина против трихофитии животных, содержащая антиген из штамма 130 Л,сахарозу, желатин и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген из штаммаВГНКИ 27-ДЕП при следующем соотношении компонентов, мас. Сахароза Желатин Вода а также антиген из штамма 130 Л и антиген из штаммаВГНКИ 27-ДЕП, взятые в равных соотношениях, в количестве 300-600 млн микроконидий/см 3 , соответственно.(56) 1. Патент Великобритании 1330240, МКИ А 5 В, 1973. 2. А. с. СССР 955571, МКИ А 61 К 39/00, 1980. 3. Лещенко В.М. Лабораторная диагностика грибковых заболеваний. - М. Медицина, 1982. - С. 109. Изобретение относится к биотехнологии, в частности к вакцинам против трихофитии животных. Известна вакцина ЛТФ-130 и вакцина ТФ-130/К/ против трихофитии животных, преимущественно крупного рогатого скота, содержащая антиген из штамма 130 (. .) или антиген из штамма .130 Л желатин-сахарозный стабилизатор 1,2. Недостатком известных вакцин является то, что они профилактируют заболевание только у одного вида животных - крупного рогатого скота и только к одному виду возбудителя . . В соответствии с(1902) 3 уточняем наименование штамма .130 Л на .т.к. согласно классификации Георга (1957) 3 возбудитель трихофитии животных имеет основное название. . Целью изобретения является разработка высокоиммуногенной вакцины против трихофитии животных вызываемой 1974 1 Указанная цель достигается тем, что вакцина дополнительно содержит антиген из штамма .ВГНКИ 27 при следующем соотношении компонентов (вес/ об.) Антиген из штамма . Антиген из штамма . Для изготовления вакцины используют штамм .ВГНКИ 27 Штамм .ВГНКИ 27 получен из эпизоотического, выделенного из белой мыши, методом направленного ступенчатого отбора по признаку спорообразования наиболее быстро растущих колоний с активным накоплением микроконидий. Штамм .27 депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и спецификации ветеринарных препаратов и имеет регистрационный номер 27. Штамм гриба .ВГНКИ 27 характеризуется следующими признаками и свойствами. Морфологические признаки. Мицелий не окрашен, ровный, ветвистый, септированный, может распадаться на фрагменты, терминальные гифы не всегда, образуют спирали (обычно 3-5 завитков), диаметр мицелия 2,0-3,0 мкм. Микроконидии многочисленные, круглые, грушевидные, удлиненные, близкие к палочковидной фрме, располагающиеся на поверхности мицелия гроздьями, чаще отдельно, размер 1,5-5,2 мкм. Макроконидии единичные. Количество перегородок 1-5, чаще 1-2, размером 10-303-8 мкм. В культурах 20-30 дневного возраста могут наблюдаться хламидоспоры округлой формы с двуконтурной оболочкой, всгда единичные, 3,0-5,0 мкм в диаметре. Артроспоры возникают на отдельных участках мицелия, тонкостенные, по форме напоминают овальные или палочковидные микроконидии 3,0-9,0 мкм. Культуральные свойства. На сусло-агаре растет в виде плоской белой, бархатистой колонии с незначительным возвышением в центре, растущий край ровный, реверс красновато-коричневый, диаметр колонии 50-90 мм(15-20 дневная культура). На агаре Сабуро растет в виде плоской, белой, бархатистой с кремовым оттенком колонии с небольшим возвышением в центре, растущий край ровный, реверс бледно-желтый, иногда более темный в центре, размер колонии 50-90 мм (15-20 дневная культура). На среде Геннеберга растет в виде белой, бархатистой, радиально-складчатой колонии, растущий край паутинистый, реверс красновато-фиолетовый, диаметр колонии 50-80 мм (15-20 дневная культура). Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 198,4-259,2 млн/см 3. Вирулентные свойства. При внутримышечном введении культуры штамма .27 у морских свинок, кроликов, овец, коз, телят спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфический локализованный поверхностный очажок диаметром 2,0-2,5 см, который самопроизвольно излечивается в течение 15-20 дней. Микологически выделить возбудитель не удается. При нанесении культуры штамма неиммунизированным животным на скарифицированную кожу в дозу 0,25 млн/см 3 микроконидий на месте аппликации развивается в течение 10-20 дней типичный трихофитийный очаг. Выделенный из патологического материала штамм по своим свойствам соответствует исходному. Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организме телят, овец, кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Иммуногенные свойства. При двукратном внутримышечном введении телятам, кроликам вакцины, изготовленной из данного штамма в дозе, содержащей 10-20 млн живых микроконидий, у животных формируется напряженный иммунитет к последующему заражению трихофитией продолжительностью не менее 5 лет (срок наблюдения). Штамм .ВГНКИ 27 отличается от эпизодических слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью накопления микроконидий и иммуногенностью при внутримышечном введении животным. Примеры получения вакцины по изобретению. Пример 1. Для получения вакцины 15-20 дневные культуры штаммов . , 130 Л, и .ВГНКИ 27 выращивают раздельно в матрасных колбах на сусло-агаре (рН 6,2-6,8) при температуре 2628 в течение 12-20 дней. 2 1974 1 Выращенную грибницу каждой культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды специальными скребками и помещают в стерильные банки. Грибную массу каждого штамма гомогенизируют в миксерах или коллоидной мельнице, а затем с помощью стерильной воды полученный гомогенат.130 Л ресуспензируют до концентрации микроконидий 300 млн/см 3, на гомогенат .ВГНКИ 27 - 600 млн/см 3. Ресуспензирование проводят в присутствии пенициллина или стрептомицина из расчета 100 ЕД на 1 см 3 гомогената. Гомогенат штамма гриба .130 Л объединяют в равном объеме с гомогенатом штамма гриба .ВГНКИ 27. К полученной суспензии грибной массы добавляют равное количество стабилизатора (рН 6,2-6,8) содержащего в воде 10 сахарозы и 1,5 желатина. Все тщательно перемешивают, разливают в стерильные флаконы и лиофильно высушивают. Пример 2. Вакцину получают аналогично, как описано в примере 1. Для ее приготовления используют гомогенат штаммов грибов .130 Л и .ВГНКИ 27 с концентрацией микроконидий 450 млн/см 3, а в качестве стабилизатора водный раствор, содержащий 15 сахарозы и 2,5 желатина. Пример 3. Вакцину против трихофитии животных приготавливают аналогично, как описано в примере 1. Для ее получения используют гомогенат штамма гриба .130 Л с концентрацией микроконидий 600 млн/см 3 и гомогенат штамма .27 с концентрацией микроконидий 300 млн/см 3. В качестве стабилизатора используют водный раствор, содержащий 20 сахарозы и 4 желатина. Готовая вакцина представляет собой однородную пористую сухую массу в виде таблетки серого цвета. Вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих, темных помещениях при температуре 2-10. Срок годности 12 месяцев. К вакцине прилагаются флаконы со стерильным разбавителем. Пример 4. Приготовленные серии вакцины против трихофитии животных по примерам 1,2,3 перед применением растворяют в разбавителе из расчета 1 доза в 1 см 3. Получают серии вакцины, содержащие в прививочной дозе следующую концентрацию антигенов в млн/см 3(таблица 1) Таблица 1 Наименование антигена Вакцина по примеру 1 5 Вакцина по примеру 2 7,5 Вакцина по примеру 3 10 Вакцину по примерам 1,2,3 используют для иммунизации телят, вводя внутримышечно двукратно с интервалом 10-14 дней в дозе 1 см 3. В качестве контроля испытывают аналогично приготовленные вакцины из штамма .130 Л и .ВГНКИ 27 с концентрацией микроконидий антигена в прививочной дозе 7,5 млн/см 3. Через 35 дней после второй иммунизации телят заражают вирулентными культурами штаммов .153 (ТВ-153), .251 (ТС-251),.724 (ТС-724), ..118 (ТВА-118). Одновременно заражают этими же культурами 6 контрольных (неиммунизированных) телят. Результаты экспериментального заражения телят представлены в таблице 2. Биопрепарат используемый для иммунизации телят Вакцина по примеру 1 Вакцина по примеру 2 Вакцина по примеру 3 Вакцина из штамма Таблица 2 Количестство заболевших животных при экспериментальном заражении ТВТМТСТВАТЭ 153 251 724 118 20 Из таблицы видно, что 1,2 и 3 серии вакцины у иммунизированных телят вырабатывают напряженный(100) иммунитет против трихофитии при экспериментальном заражении. Иммунизация телят моновакцинами не вызывает достаточно стойкого иммунитета при последующем заражении гетерологичными культурами возбудителей трихофитии. Телята, ранее не иммунизированные и не болевшие трихофитией, восприимчивы к экспериментальному заражению вирулентными культурами возбудителей трихофитии. Пример 5. Тремя опытными сериями вакцины аналогично примеру 4 иммунизируют 14 коз с последующим их заражением вирулентными культурами штаммов .153 и .251. Контрольных животных (2 головы) не вакцинируют. Все вакцинированные животные не заболели трихофитией, у контрольных были отмечены все признаки заболевания с выделением из пораженных очагов указанных штаммов вирулентных культур. Пример 6. Для иммунизации 10 кроликов породы шиншилла живой массой 2,5-3,0 кг используют вакцину по примеру 2. Вакцину перед применением растворяют в разбавителе из расчета 1 дозы в 1 см 3. Получают следующую концентрацию антигенов в 1 прививочной дозе .130 Л 7,5 млн микроконидий .ВГНКИ 27 7,5 млн. микроконидий. Вакцину вводят кроликам внутримышечно двукратно в дозе 0,5 см 3. В качестве контроля для вакцинации 10 кроликов используют вакцину из штамма .135, содержащую в 1 прививочной дозе 20 млн микроконидий в 1 см 3, которую применяют внутримышечно в область ягодичных мышц. Через 30 дней кроликов заражают накожно вирулентными культурами штаммов .251 и .18. В течение 25 дней учитывают результаты заражения. Установлено, что использование вакцины способствует образованию надежного иммунитета у всех иммунизированных кроликов, в то время как использование известной вакцины Ментавак не дает надежного эффекта - 2 кролика из 10 заболели трихофитией, а из очагов поражения выделены культуры вирулентных штаммов. Пример 7. 20 телят иммунизируют вариантами вакцины по примеру 1 и 3 с концентрацией антигенов в прививочной дозе по примеру 4. Каждой группе телят (10 голов) вакцину применяют внутримышечно двукратно в объеме 1 см 3 с интервалом 10-14 дней. Через 4 и 9 месяцев после второй иммунизации обе группы телят заражают вирулентными культурами штаммов .153 и .251. В результате ни один теленок не заболел. Таким образом, вакцина по изобретению сохраняет стойкий иммунитет через 4 и 9 месяцев после заражения. Вакцина высокоэффективна против трихофитии животных. Вакцину с профилактической целью применяют двукратно с интервалом 10-14 дней в следующих дозах телятам от 14 дней до 4 месяцев 1 см 3, старше 5 месяцев - 2 см 3 и мелкому рогатому скоту (овцы, козы) от 3 до 6 месяцев - 0,5 см 3, старше 6 месяцев - 1 4 1974 1 см 3. Кроликам массой 2,5-3,0 кг вводят 0,3-0,5 см 3 с профилактической целью. С лечебной целью вакцину вводят больным животным двукратно с интервалом 10-14 дней в удвоенной дозировке. Использование вакцины по изобретению в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по борьбе с трихофитией животных. оставитель А.И. Сорокин Редактор В.Н. Позняк Корректор Т.Н. Никитина Заказ 8980 Тираж 20 экз. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.