Способ выявления у человека начальных признаков аминокислотного дисбаланса, вызванного воздействием динила

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ У ЧЕЛОВЕКА НАЧАЛЬНЫХ ПРИЗНАКОВ АМИНОКИСЛОТНОГО ДИСБАЛАНСА, ВЫЗВАННОГО ВОЗДЕЙСТВИЕМ ДИНИЛА(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Пырочкин Владимир Михайлович Шейбак Владимир Михайлович Могилевец Ольга Николаевна Могилевец Эдуард Владиславович(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) МОГИЛЕВЕЦ О.Н. и др. Здоровье и окружающая среда Сб. научн. трудов. Вып. 9. - Минск, 2007. - С. 957-964. ШЕЙБАК В.М. и др. Гигиена и санитария. - 2008. -4. - С. 81-82. АРТЮНИНА Г.П. Изучение ранних клинико-биохимических признаков длительного воздействия динила и капролактама на организм рабочих Автореф. дис. - Ленинград, 1980. - С. 4-14.2180960 2, 2002.(57) Способ выявления у человека начальных признаков аминокислотного дисбаланса, вызванного воздействием динила, заключающийся в том, что определяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в плазме крови концентрации аспарагиновой кислоты Асп, аспарагина Асн, глутаминовой кислоты Глу, глутамина Глн, глицина Гли и гамма-аминомасляной кислоты ГАМК, рассчитывают коэффициент С по формуле С(АспАснГлуГлн)/(ГлиГАМК) и судят о наличии у человека начальных признаков аминокислотного дисбаланса, вызванного воздействием динила, при значении С 1,79. Изобретение относится к области медицины, а именно к внутренним болезням и клинической биохимии, и может применяться для диагностики начальных проявлений метаболического дисбаланса у лиц, работающих в контакте с динилом. Ароматические углеводороды широко представлены в химической промышленности. По своему воздействию на организм эти соединения являются токсинами политропного и полиорганного действия. Одним из широко использующихся в химической промышленности ароматических углеводородов является динил (дифенильная смесь, даутерм) - эвтектическая смесь дифенила и дифенилового эфира. Известен способ диагностики степени тяжести хронической интоксикации бензолом по данным общего анализа крови (снижение содержания эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов), показателей, изменяющихся только при выраженной интоксикации Коса 18201 1 2014.06.30 рев В.В., Лотков В.С., Бабанов С.А. Профессиональные болезни. - М. Эксмо, 2009. - С. 152-160. Недостатком является то, что диагностика происходит не на ранних стадиях заболевания, что является существенным недостатком данного метода. Известен также способ ранней диагностики хронической интоксикации бензолом и его соединениями. Проводят определение показателей эритроцитов, гемоглобина и общего количества эндогенных ауторозеток и ауторозеток с экзоцитарным лизисом в периферической крови и при увеличении общего числа ауторозеток и ауторозеток с экзоцитарным лизисом эритроцитов до 27,40,26 и 6,20,05 соответственно, при нормальных показателях эритроцитов и гемоглобина, выявляют хроническую интоксикацию бензолом и его соединениями на раннем этапе возникновения, а при повышении общего числа ауторозеток до 40,00,27 и ауторозеток с экзоцитарным лизисом эритроцитов до 20,10,17 при снижении показателей эритроцитов и гемоглобина выявляют позднюю хроническую интоксикацию патент РФ 2180960, 2002. Недостатком данного метода является использование его только для интоксикации бензолом, неспецифичность ауторозеткообразования для интоксикации ароматическими углеводородами. В настоящее время в литературе не найдено способов ранней диагностики нарушений метаболического гомеостаза, развивающихся при воздействии на организм динила. Задачей изобретения является разработка способа выявления у человека начальных признаков аминокислотного дисбаланса, вызванного воздействием динила. Поставленная задача решается путем определения с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в плазме крови концентрации аспарагиновой кислоты Асп,аспарагина Асн, глутаминовой кислоты Глу, глутамина Глн, глицина Гли, гаммааминомасляной кислоты ГАМК и расчета коэффициента С по формуле С(АспАснГлуГлн)/(ГлиГАМК),и в случае значения коэффициента С 1,79 судят о наличии у человека начальных признаков аминокислотного дисбаланса, вызванного воздействием динила. Способ осуществляют следующим образом. У пациентов определяют концентрации аспарагиновой кислоты, аспарагина, глутаминовой кислоты, глутамина, глицина, гамма-аминомасляной кислоты методом обращеннофазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с изократическим элюированием и детектированием по флуоресценции (231/445 нм). Условия определения колонка Диасорб 130 16, 3150 мм подвижная фаза 0,1 М -ацетатный буфер 5,7/50 метанол 100/54 (об/об). Скорость потока 0,8 мл/мин, температура колонки 30 С. Дериватизация смешивание пробы с 5 объемами 0,4 раствора -фталевого альдегида и 0,33-меркаптопропионовой кислоты в 0,4 М -боратном буфере,9,4, затем нейтрализация добавлением равного объема 0,1 М хлорной кислоты. Рассчитывают коэффициентпо формуле(АспАснГлуГлн)/(ГлиГАМК),где Асп - концентрация аспарагиновой кислоты,Асн - концентрация аспарагина,Глу - концентрация глутаминовой кислоты,Глн - концентрация глутамина,Гли - концентрация глицина,ГАМК - концентрация гамма-аминомасляной кислоты. При значении коэффициента С 1,79 судят о наличии у человека начальных признаков аминокислотного дисбаланса, вызванного воздействием динила. Приводим доказательства возможности осуществления способа. Под наблюдением находилось 87 пациентов. Для определения параметров, позволяющих выявить начальные проявления метаболического дисбаланса в организме под воздей 2 18201 1 2014.06.30 ствием динила для прогнозирования развития возможных клинических проявлений все пациенты были разделены на 3 подгруппы А) пациенты, имеющие длительный стаж работы в контакте с динилом (более 10 лет),имеющие клинические проявления (головные боли, нарушение настроения, расстройство сна, повышение АД), нарушение качества жизни в сочетании с изменениями в биохимическом анализе крови, которые в эксперименте отражают интоксикацию динилом (снижение общего белка, увеличение активности АлАТ, ГГТП, снижение коэффициента Де Ритиса), которые могли быть вызваны воздействием на их организм динила (21) Б) остальные пациенты, работающие в контакте с динилом (40) В) пациенты контрольной группы (26), не имеющие контакта с динилом. Далее проведено сравнение показателей в подгруппах. Так как в подгруппе Б также могут быть пациенты с наличием метаболического дисбаланса, вызванного воздействием динила, корреляционный анализ Спирмена, отражающий взаимосвязь показателя с наличием вышеперечисленных симптомов, проводили исключая данную категорию пациентов. Полученные данные были обработаны статистически с использованием пакета программ 6.0 и представлены в таблице. Статистически значимые различия и коэффициенты корреляции Спирменадля изучаемых показателей в подгруппах Подгруппа А Подгруппа Б Подгруппа В Показатель(АспАснГлуГлн)/(Гли 2,540,421 2,230,539 1,620,345 0,78 ГАМК) Примечание- различия со значениями в контрольной группе (В) статистически значимы с использованием критерия Крускала-Уоллиса и критерия Манна-Уитни, 0,05 различия со значениями в группе А статистически значимы с использованием критерия Крускала-Уоллиса и критерия Манна-Уитни, 0,05. Выбор наиболее информативного показателя для ранней диагностики метаболического дисбаланса, вызванного воздействием динила на организм работающих, проводили учитывая сочетания наибольшего коэффициента корреляциии максимального различия в значении показателя в изучаемых подгруппах. Таким показателем, отвечающим вышеперечисленным требованиям, является соотношение (АспАснГлуГлн)/(ГлиГАМК). Для определения порогового значения проводили построение характеристической кривой (-). Наиболее оптимальным является уровень показателя 1,79 (фигура). При этом чувствительность теста составляет 100 , специфичность 80(5 -0). На основании приведенных расчетов, о развивающемся аминокислотном дисбалансе у работающих в контакте с динилом свидетельствует значение коэффициента 1,79. На фигуре показано соотношение чувствительности и специфичности метода диагностики начальных проявлений метаболического дисбаланса в организме под воздействием динила. Приводим примеры, подтверждающие возможность осуществления способа. Пример 1. Ц., 46 лет, стаж работы в контакте с динилом 25 лет. Жалобы на головные боли, головокружения, нарушение настроения, расстройство сна, раздражительность. АД 150/80,показатели качества жизни по анкете -36 физическое функционирование 65, жизненная активность 70, социальное функционирование 75, альбумины 49 г/л, АлАТ 61 Ед/л, 3 18201 1 2014.06.30 ГГТП 89 Ед/л, коэффициент Де Ритиса 0,72. Соотношение 3,09. Имеются все признаки аминокислотного дисбаланса, вызванного воздействием динила. Пример 2. П., 37 лет, стаж работы в контакте с динилом 9 лет. Жалобы на периодические головные боли. АД 135/80, показатели качества жизни по анкете -36 физическое функционирование 100, жизненная активность 85, социальное функционирование 100,альбумины 51 г/л, АлАТ 15 Ед/л, ГГТП 19 Ед/л, коэффициент Де Ритиса 1,13. Соотношение 2,36. При неизменных показателях биохимического анализа крови и минимальных жалобах имеются начальные признаки аминокислотного дисбаланса,вызванного воздействием динила. Пример 3. Ш., 51 год, не имеет контакта с динилом. Жалоб нет. АД 120/80, показатели качества жизни по анкете -36 физическое функционирование 85, жизненная активность 95,социальное функционирование 100, альбумины 50 г/л, АлАТ 11 Ед/л, ГГТП 20 Ед/л,коэффициент Де Ритиса 1,18. Соотношение 1,68. Нет признаков воздействия динила на метаболический гомеостаз. Из приведенных примеров видно, что предлагаемый способ действительно позволяет выявить начальные признаки аминокислотного дисбаланса, вызванного воздействием динила. Таким образом, предлагаемый способ является высокоинформативным, объективным,патогенетически обоснованным и может найти широкое применение в клинической практике. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4