Способ лечения чумы, парвовирусного энтерита или аденовирусного гепатита плотоядных

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЧУМЫ, ПАРВОВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА ИЛИ АДЕНОВИРУСНОГО ГЕПАТИТА ПЛОТОЯДНЫХ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Софийская Татьяна Васильевна Финогенов Артем Юрьевич Финогенова Елена Геннадьевна Мистейко Михаил Михайлович(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского Национальной академии наук Беларуси(56)2103009 1, 1998.2108805 1, 1998.2120303 1, 1998.2063767 1, 1996.14176 , 2004. УСЕНЯ М.М. и др. Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных. Материалы международной научно-практической конференции. - Минск, 2000. - С. 220-221.(57) Способ лечения чумы, парвовирусного энтерита или аденовирусного гепатита плотоядных, заключающийся в том, что используют поливалентную сыворотку, содержащую антитела к антигенам поливалентной вакцины Биовакв титрах 1512, определяемые в реакции непрямой гемагглютинации, при этом указанную поливалентную сыворотку вводят внутримышечно или подкожно сначала в дозе 2 мл животному массой до 10 кг или в дозе 4 мл животному массой 10 кг или более, затем через 10-12 ч в дозе 0,5 мл, и через 30 мин в дозе 1,5 мл животному массой до 10 кг или в дозе 3,5 мл животному массой 10 кг или более. Изобретение относится к ветеринарной эпизоотологии и иммунологии, в частности к изготовлению профилактических препаратов против вирусных болезней плотоядных, а именно чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита. Вирусные заболевания - чума, парвовирусный энтерит и аденовирусный гепатит плотоядных до настоящего времени остаются одними из самых актуальных проблем вирусной патологии плотоядных. Клинически и патологоанатомически эти заболевания характеризуются полиморфизмом признаков. Нередко данные заболевания осложняются вторичной инфекцией, из-за чего возникают сложности при их профилактике и лечении. Профилактика и лечение чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита плотоядных основана на использовании препаратов, содержащих специфические антитела сывороток и глобулинов. 17684 1 2013.10.30 Известен способ применения сыворотки подкожно в дозе 0,05-0,1 мл/мг массы тела животного двухкратно или трехкратно с интервалом 12-24 ч 1. Недостаток этого способа заключается в том, что при тяжелом заболевании животного доза антител, содержащихся в этом объеме сыворотки, может оказаться недостаточной. Известен способ применения сыворотки против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита плотоядных путем внутримышечного или подкожного введения с профилактической целью животным весом до 5 кг - 2,5 см 3 сыворотки, весом более 5 кг 5 см 3. С лечебной целью сыворотку вводят в указанных дозах 1-3 раза с интервалом 12-24 ч в зависимости от тяжести патологического процесса 2. Недостаток этого способа заключается в том, что при повторном введении сыворотки в полном объеме возникает опасность анафилактического шока. Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа лечения чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита плотоядных, позволяющего полностью вылечить животное на ранних стадиях заболевания и обладающего наименьшими побочными эффектами. Поставленная задача достигается тем, что способ лечения чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита плотоядных заключается в том, что используют поливалентную сыворотку, содержащую антитела к антигенам поливалентной вакцины Биовакв титрах 1512, определяемые в реакции непрямой гемагглютинации, при этом указанную поливалентную сыворотку вводят внутримышечно или подкожно сначала в дозе 2 мл животному массой до 10 кг или в дозе 4 мл животному массой 10 кг и более, затем через 10-12 ч в дозе 0,5 мл, и через 30 мин в дозе 1,5 мл животному массой до 10 кг или в дозе 3,5 мл животному массой 10 кг или более. Пример 1. Способ получения сыворотки. Способ получения сыворотки заключается в том, что волов-доноров иммунизируют поливалентным антигеном Биовак 3, включающим в себя следующие компоненты лиофилизированный живой компонент против чумы плотоядных Биовак ,жидкий инактивированный компонент против парвовирусного энтерита и аденовирусных инфекций Биовак . Поливалентный антиген Биоваквводят внутримышечно волам-донорам 1 раз по 10 мл каждые 7 дней. Через 2 недели после последний инъекции производят отбор крови у волов и помещают ее на 3 ч в термостат при температуре 361 С. Потом отделяют сформировавшийся сгусток в стерильных условиях от стенок тары и оставляют на 2-3 ч при температуре 1820 С, а затем на 10-12 ч при 42 С для ретракции сгустка. Образовавшуюся сыворотку центрифугуют при 3000 об/мин 10-15 мин для лучшего отделения сыворотки от клеток крови, потом отцентрифугированную сыворотку охлаждают до 42 С, консервируют ее охлажденным 5 -ным раствором химически чистого фенола до конечной концентрации 0,05 и переливают в стерильные емкости, где сыворотку выдерживают 30-40 дней при температуре 42 С для отстаивания. Потом проводят стерилизующую фильтрацию полученной сыворотки через асбестокартонный фильтр с диаметром пор 0,45-0,50 мм, а затем фильтруют через асбестокартонный фильтр с диаметром пор 0,22-0,27 мм с одновременной расфасовкой сыворотки в стерильные флаконы емкостью 10, 100 и 250 см 3. Титр антител в готовой сыворотке проверяют в реакции непрямой гемаглютинации(РНГА). Соблюдение указанных параметров технологического цикла способа производства сыворотки обеспечивает получение качественного препарата, предохраняющего восприимчивых животных от заболевания чумой, парвовирусным энтеритом и аденовирусным гепатитом плотоядных, а при возникновении данных заболеваний успешному их лечению. 2 17684 1 2013.10.30 Полученная поливалентная сыворотка против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита плотоядных характеризуется следующими показателями физико-биохимические свойства поливалентная сыворотка представляет собой сыворотку иммунных волов, по внешнему виду это прозрачная, светло-желтая, иногда с красноватым оттенком жидкость. При длительном хранении на дно флакона может выпасть осадок, который при встряхивании легко разбивается в равномерную взвесь безвредность сыворотка безвредна для собак, лисиц, песцов, норок, а также лабораторных животных - кроликов, белых мышей, морских свинок активность заявляемая сыворотка должна содержать специфические антитела к вирусу чумы плотоядных, парвовирусному энтериту и аденовирусному гепатиту в титре 1512 в реакции непрямой гемаглютинации (РНГА). Пример 2. Определение содержания титра антител в сыворотки. Для определения содержания титра антител в поливалентной сыворотке была поставлена реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Исследовали заявляемую поливалентную сыворотку, взятую от волов, и сыворотку против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита собак, выпускаемую АО Биоцентр. В качестве антигена использовали вакцину Биовак . Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) ставили путем разведения исследуемых сывороток крови в растворителе в лунках планшет микротитратора системы Такачи в объеме 0,025 мл в разведениях от 12 до 14096. После чего в каждую луночку добавляли жидкий ресуспендированный эритроцитарный антиген. Учет реакции осуществляют через 90-120 мин. Контроли эритроцитарный диагностикумположительная сыворотка эритроцитарный диагностикумотрицательная сыворотка эритроциты стабилизированныеположительная сыворотка эритроциты стабилизированныеотрицательная сыворотка эритроциты стабилизированныерастворитель. Положительной считается проба, в которой наблюдается агглютинация эритроцитарного антигена, в разведении 18 и выше при интенсивности агглютинации 4 , 3 , 2 . Сомнительной считается проба при агглютинации эритроцитарного диагностикума 12-14. Отрицательной считается реакция при отсутствии агглютинации эритроцитарного диагностикума. Учет реакции полученная нами поливалентная сыворотка прореагировала с антигеном в разведении 1512, сыворотка, выпускаемая АО Биоцентр, прореагировала с антигеном в разведении 1256. Хранение сыворотка пригодна для применения в течение 1 года со дня изготовления при условии ее хранения в сухом, темном помещении при температуре 2-4 С. Пример 3. Способ применения сыворотки для лечения чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита плотоядных заключается в том, что используют поливалентную сыворотку, содержащую антитела к антигенам поливалентной вакцины Биовакв титрах 1512, определяемые в реакции непрямой гемагглютинации, при этом указанную поливалентную сыворотку вводят внутримышечно или подкожно сначала в дозе 2 мл животному массой до 10 кг или в дозе 4 мл животному массой 10 кг и более, затем через 10-12 ч в дозе 0,5 мл и через 30 мин в дозе 1,5 мл животному массой до 10 кг или в дозе 3,5 мл животному массой 10 кг или более. Соблюдение указанного способа применения сыворотки с профилактической целью обеспечивает отсутствие осложнений при введении сыворотки. 3 17684 1 2013.10.30 Пример 4. Определение лечебной эффективности поливалентной сыворотки. Провели опытное изучение пассивного иммунитета, создаваемого поливалентной сывороткой против чумы, парвовирусного энтерита и аденовирусного гепатита плотоядных. Для этого было сформировано 6 групп щенков в возрасте от 6 до 12 месяцев по 3 щенка в каждой. Группы 1, 2, 3 были опытными, а группы 4, 5, 6 - контрольными. Животным опытных групп вводили поливалентную сыворотку подкожно по 2 мл. Через 3 дня после введения сыворотки животных опытных и контрольных групп заражали патогенными штаммами вирусов 1 и 4 группы - вирусом чумы 2 и 5 группы - парвовирусом 3 и 6 группы - аденовирусом. Наблюдение за животными составляло 4 недели. Результаты опыта показали, что в опытных группах ни одного случая заболевания выявлено не было, тогда как в контрольных группах наблюдалось заболевание собак (таблица). Результаты опыта по экспериментальному заражению собакгруппы 1 опытная 2 опытная 3 опытная 4 контрольная 5 контрольная 6 контрольная Вирус чумы Парвовирус Аденовирус Вирус чумы Парвовирус Аденовирус Таким образом, заявленное изобретение позволяет в качестве антигена использовать поливалентный комплексный антиген Биовак , что позволяет получить сыворотку с титром 1512 в реакции непрямой гемагглютинации, и предложенный способ лечения позволяет максимально снизить риск развития аллергической реакции. Источники информации 1. Патент 2108805, МПК 61 39/42, 39/175, 39/23, 39/29, 39/395, 1998. 2. Патент 2103009, МПК 61 39/42,12 7/00, 1998 (прототип). 3. Романов Е.А. Биологические ветеринарные препараты в России. Вакцины, сыворотки, диагностикумы Справочник. - Казань Рутен, 2005. - С. 254-256. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4