Способ стимуляции поствакцинального иммунитета при чуме плотоядных

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ЧУМЕ ПЛОТОЯДНЫХ(72) Авторы Красочко Петр Альбинович(22) 1999.06.30 Прудников Виктор Сергеевич Михай(46) 2003.12.30 лова Анжелика Владимировна(71) Заявители Белорусский научно-иссле- (73) Патентообладатели Белорусский научнодовательский институт эксперименисследовательский институт эксперитальной ветеринарии им. С.Н.Вышементальной ветеринарии им.С.Н.Вылесского Витебская государственная шелесского Витебская государственная академия ветеринарной медициныакадемия ветеринарной медицины(57) Способ стимуляции поствакцинального иммунитета при чуме плотоядных, включающий иммунизацию животных вирусвакциной одновременно с иммуностимуляторами, отличающийся тем, что в качестве иммуностимулятора используют препарат из пчелиной перги Апистимулин-А, который вводят однократно внутримышечно одновременно с вакциной в дозе 20-25 мг на голову.(56) Игнатов П. Очерки об инфекционных болезнях у собак. - М., 1995. - С. 94-95.3533864 1, 1985.2048120 1, 1995. Чудаков В.Г. Технология продуктов пчеловодства. - М. Колос, 1979. - С. 118-127. Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способам стимуляции поствакцинального иммунитета при инфекционных заболеваниях плотоядных животных. Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ стимуляции поствакцинального иммунитета при чуме плотоядных, включающий иммунизацию животных вирусвакциной одновременно с иммуностимуляторами с помощью препарата риботан,представляющего собой соль рибонуклеиновой кислоты бактерий 1. Недостатком его является то, что препарат активизирует неспецифический иммунитет и не способствует выработке противочумного иммунитета у плотоядных. Задачей настоящего изобретения является разработка способа активизации поствакцинального иммунитета против чумы плотоядных с использованием неспецифического стимулятора иммунной системы Апистимулина-А. Поставленная задача достигается тем, что в способе стимуляции поствакцинального иммунитета при чуме плотоядных, включающем иммунизацию животных вирусвакциной одновременно с иммуностимулятором, в качестве иммуностимулятора используют препарат из пчелиной перги Апистимулин-А, который вводят однократно внутримышечно одновременно с вакциной в дозе 20-25 мг на голову. 5586 1 Используемое средство Апистимулин-А для стимуляции поствакцинального иммунитета получают из экологически чистого продукта - пчелиной перги, представляющей собой пыльцу, собранную и переработанную пчелами и упакованную ими в соты. Препарат не обладает аллергенными, токсическими свойствами, но в то же время активизирует биосинтез иммуноглобулинов, Т- и В-системы лимфоцитов, фагоцитарную активность нейтрофилов, увеличивает титр интерферона, повышает активность лизоцима и бактерицидную активность сыворотки крови. Пример 1. Иммунизацию щенков серебристо-черных лисиц против чумы плотоядных проводили в возрасте 7-8 месяцев путем введения им сухой живой культуральной вирусвакциной против чумы плотоядных из штамма ЭПМ при инфекционном титре вируса 5,0 ТЦД 50/мл в дозе 1 мл одновременно с иммуностимулятором Апистимулином-А в количестве 20-25 мг на голову. Вирусвакцину с иммуностимулятором вводили однократно внутримышечно с внутренней стороны бедра. Пример 2. Для отработки оптимальной дозы Апистимулина-А на 20 щенках серебристо-черных лисиц животных разделили на 4 группы по 5 голов в группе. Щенкам опытной группы 1 вводили чистую вирусвакцину против чумы плотоядных из штамма ЭПМ при инфекционном титре вируса 5,0 ТЦД 50/мл, животным опытной группы 2 - ту же дозу вирусвакцины с Апистимулином-А в количестве 20 мг на голову, лисицам третьей опытной группы - вирусвакцину с Апистимулином-А в количестве 25 мг на голову, четвертой опытной группы - то же, но Апистимулина-А 30 мг на голову. Для исследования была взята кровь от животных до иммунизации, через 3 и 14 дней. В крови опытных животных определялся титр антител к вирусу чумы плотоядных. В табл. 1 представлены данные по отработке оптимального количества Апистимулина-А при иммунизации серебристо-черных лисиц против чумы плотоядных. Из табл. 1 видно, что оптимальной дозой Апистимулина-А при иммунизации против чумы плотоядных является доза 20-25 мг/ голову. Пример 3. Для изучения влияния препарата Апистимулин-А на формирование поствакцинального иммунитета при чуме плотоядных был проведен опыт на серебристо-черных лисицах. Было использовано 20 голов серебристо-черных лисиц возрастом 7-8 месяцев, которых разделили на 4 группы по 5 голов в группе. Лисиц 1-ой опытной группы прививали сухой живой культуральной вирусвакциной против чумы плотоядных из штамма ЭПМ при инфекционном титре вируса 5,0 ТЦД 50/мл. Животных 2-й опытной группы иммунизировали той же вирусвакциной, но для активизации иммунитета использован иммуностимулятор риботан. Животных 3-й опытной группы иммунизировали той же вирусвакциной и для активизации иммунитета использован иммуностимулятор Апистимулин-А. Животные 4-й группы - контроль (вместо вирусвакцины и иммуностимуляторов вводился изотонический раствор натрия хлорида). Для исследования была взята кровь до обработок через 3, 14 и 90 дней. В крови изучались основные показатели клеточного (количество лейкоцитов, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс) и гуморального иммунитета (бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови, титр противовирусных антител в РНГА). Для изучения иммуноморфогенеза через 15 дней после иммунизации часть опытных и контрольных щенков убивали. У убитых животных для гистологического исследования и подсчета количества плазматических клеток отбирали кусочки селезенки, регионарных и контррегионарных месту введения вирусвакцины лимфоузлов. В табл. 2 представлены результаты изучения напряженности противочумного иммунитета у щенков серебристо-черных лисиц после иммунизации их чистой вирусвакциной и вирусвакциной с иммуностимуляторами. 2 5586 1 Из представленных результатов видно, что титр антител на 14-й день после вакцинации составил 9,4 2, тогда как у вакцинированных чистой вирусвакциной - 7,4 2, а вакцинированных с риботаном - 8,1 2, что свидетельствует о более сильной активизации биосинтеза противовирусных антител при одновременном ведении вирусвакцины с Апистимулином-А. В табл. 3 представлены результаты изучения динамики лейкоцитов у щенков серебристочерных лисиц после иммунизации их чистой вирусвакциной и вирусвакциной с иммуностимуляторами. Из табл. 3 видно, что на 14-й день у животных, иммунизированных чистой вирусвакциной, количество лейкоцитов возросло с 5,3109 до 10,2109, получавших вирусвакцину с риботаном - с 5,4109 до 11,6109, а вирусвакцину с Апистимулином-А - с 5,3109 до 13,3109. Это говорит об активизации клеточного иммунитета у привитых лисиц, особенно с использованием Апистимулина-А. В табл. 4 представлены результаты изучения бактерицидной активности сыворотки крови у щенков серебристо-черных лисиц при иммунизации при чуме плотоядных с использованием иммуностимуляторов. Полученные данные свидетельствуют о значительной активизации гуморального неспецифического иммунитета у животных, особенно привитых с использованием Апистимулина-А. Так, на 14-й день после иммунизации бактерицидная активность у животных,привитых чистой вирусвакциной, возросла с 27,8 до 41,25 , тогда как использование иммуностимулятора риботана - с 26,5 до 49,49 , а с Апистимулином-А - с 27,12 до 95,6 . Такое положение продолжалось и до 90-го дня наблюдения. На основании проведенных данных по изучению лизоцимной активности сыворотки крови, как одного из основных показателей неспецифического гуморального иммунитета,видно, что иммунизация животных с иммуностимуляторами значительно его активизирует уже начиная с 3-го дня наблюдения и, особенно, на 14-й день. Так, у щенков лисицы,иммунизированных чистой вирусвакциной, к 4-му дню лизацимная активность сыворотки крови возросла с 7,3 до 7,6 , а к 14-му дню - до 12,2 . У животных, привитых вирусвакциной с риботаном, соответственно 7,3 , 9,2 и 12,8 , а с Апистимулином-А 7,3 , 16,6 и 25,6 . К 90-му дню лизоцимная активность у щенков несколько снизилась,но все равно в группе животных, иммунизированных вирусвакциной с Апистимулином-А,этот показатель был в 2 раза выше, чем у вакцинированных чистой вирусвакциной(табл. 5). Иммунизация животных против чумы плотоядных активизирует не только гуморальный иммунитет, но и клеточный. Особенно характерные изменения отмечаются при изучении фагоцитарной активности нейтрофилов и плазмоцитарной реакции в органах иммунитета. Изучение фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса у животных, иммунизированных вирусвакциной против чумы плотоядных, показывает, что фагоцитарное число,т.е. количество захваченных бактерий на число активных нейтрофилов у иммунизированных животных как чистой вирусвакциной, так и вирусвакциной с риботаном, незначительно повышается с 3,2 до 3,6 и с 3,2 до 3,8 к 14-му дню, однако при использовании Апистимулина-А этот показатель на 4-й день повысился с 3,2 до 4,8, а к 14-му дню - до 6,1. Фагоцитарный индекс, т.е. отношение числа захваченных бактерий к общему числу исследованных нейтрофилов, также имел значительные различия. Так, у щенков лисиц, привитых чистой вирусвакциной и вирусвакциной с риботаном, отмечается снижение этого показателя к 14-му дню соответственно с 2,8 до 1,9 и с 2,8 до 2,2. Но применение Апистимулина-А с вирусвакциной стимулирует фагоцитоз - фагоцитарный индекс возрос к 14-му дню с 2,8 до 5,4. Это свидетельствует, что Апистимулин-А является сильным активатором клеточного иммунитета у животных (табл. 6). Характеристику плазмоцитарной реакции определяли по таким показателям, как число плазмоцитов и число плазмобластов, подсчитанных в 50 полях зрения микроскопа (объек 3 5586 1 тив 90 х, окуляр 7 х, бинокуляр 1,5 х). Плазмоцитарная реакция, как показатель иммунологической перестройки организма, направленный на биосинтез противовирусных антител,показывает, что у животных, иммунизированных чистой вирусвакциной, через 2 недели после иммунизации в селезенке число плазмобластов составило 6,2, плазмоцитов - 22,6, в регионарном месту введения вирусвакцины лимфоузле - соответственно 36,4 и 29,7, в контррегионарном лимфоузле - 12,6 и 19,4. Животные, получившие вирусвакцину с риботаном, в селезенке имели 10,1 плазмоцитов и 44,7 плазмобластов, в регионарном лимфоузле - соответственно 37,8 и 52,1, в контррегионарном - 15,5 и 38,3. Щенки, иммунизированные вирусвакциной с Апистимулином-А, в селезенке имели 9,4 плазмобластов и 62,6 плазмоцитов, в регионарном лимфоузле - 25,3 и 74,8, контррегионарном - 12,8 и 49,2 (табл. 7). Эти показатели свидетельствуют о значительной иммунологической перестройке организма щенков лисиц, особенно при иммунизации вирусвакциной с Апистимулином-А. Иммуноморфогенез направлен на повышение количества ранних иммунокомпетентных клеток - плазмобластов, что повышает уровень гуморального иммунного ответа при иммунизации. Таким образом, иммунизация щенков лисиц вирусвакциной против чумы плотоядных одновременно с Апистимулином-А позволяет на 50-100 активизировать основные показатели поствакцинального иммунитета, что приводит к более напряженному противочумному иммунитету. Таблица 1 Результаты отработки дозы Апистимулина-А при вакцинации против чумы плотоядных Титры антител у животных различных групп (2) Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 1 До иммунизации Через 3 дня Через 14 дней Дни взятия крови До иммунизации Через 3 дня Через 14 дней Через 90 дней Титры антител у животных различных групп (2) Группа 2 Группа 3 Группа 1 Группа 4 Дни взятия крови До иммунизации Через 3 дня Через 14 дней Через 90 дней Таблица 4 Бактерицидная активность сыворотки крови у щенков серебристо-черных лисиц,вакцинированных против чумы плотоядных Дни взятия крови п/п 1 2 3 4 До иммунизации Через 3 дня Через 14 дней Через 90 дней Таблица 5 Лизоцимная активность сыворотки крови у щенков серебристо-черных лисиц,вакцинированных против чумы плотоядных Дни взятия крови До иммунизации Через 3 дня Через 14 дней Через 90 дней 5586 1 Таблица 6 Фагоцитарная активность крови у щенков серебристо-черных лисиц,вакцинированных против чумы плотоядных Фагоцитарная активность в группах Группа 3 Группа 1 Группа 2 Группа 4 Дни(контроль) взятия мулин-А) п/п крови Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоци- Фагоцитарное тарный тарное тарный тарное тарный тарное тарный число индекс число индекс число индекс число индекс До им 2,83,23,22,83,22,83,22,81 муниза 0,05 0,05 0,08 0,08 0,05 0,05 0,05 0,05 ции Через 3,31,73,42,04,84,23,12,72 3 дня 0,12 0,12 0,09 0,09 0,12 0,12 0,05 0,05 Через 3,61,93,82,26,15,43,32,93 14 дней 0,04 0,04 0,04 0,04 0,08 0,08 0,04 0,06 Через 3,11,63,32,83,63,23,02,54 90 дней 0,08 0,08 0,05 0,10 0,06 0,06 0,04 0,03- фагоцитарное число - количество захваченных бактерий на число активных нейтрофиловфагоцитарный индекс - отношение числа захваченных бактерий к общему числу исследованных нейтрофилов. Таблица 7 Плазмоцитарная реакция в органах иммунной системы у щенков серебристо-черных лисиц, вакцинированных против чумы плотоядных Плазмоцитарная реакция у животных в группах Группа 3 Органы Группа 1 Группа 2(ЭПМриботан) Апистимулин-А) п/п системы Плазмо- Плаз- Плазмо- Плазмо- Плазмоб- Плазбласты моциты бласты циты ласты моциты 6,29,422,610,144,762,61 Селезенка 0,11 0,16 0,40 0,73 1,60 2,12 Регионарный месту веде 36,429,737,852,125,374,82 ния вакцины лимфоузел 1,06 0,06 1,06 1,53 0,92 1,76(правый паховый) Контррегионарный месту 38,312,619,415,512,849,33 ведения вакцины лимфо 1,19 0,38 0,97 1,67 0,04 2,62 узел (левый паховый)- число плазмоцитов и число плазмобластов, подсчитанных в 50 полях зрения микроскопа (объектив 90 х, окуляр 7 х, бинокуляр 1,5 х). Источники информации 1. Игнатов П. Очерки об инфекционных болезнях у собак. - М., 1995. - С. 94-95. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.