Способ диагностики наличия внутриутробных пороков развития плода

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НАЛИЧИЯ ВНУТРИУТРОБНЫХ ПОРОКОВ РАЗВИТИЯ ПЛОДА(71) Заявители Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси Государственное учреждение образования Белорусская медицинская академия последипломного образования(72) Авторы Слобожанина Екатерина Ивановна Козлова Наталья Михайловна Касько Леонид Павлович Шорох Ирина Григорьевна(73) Патентообладатели Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси Государственное учреждение образования Белорусская медицинская академия последипломного образования(56) АРИАС Ф. Беременность и роды высокого риска. - М. Медицина, 1989. С. 150-156.8775 С 1, 2006. КАСЬКО Л.П. и др. Немедикаментозные методы лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии Сб. научно-практических материалов. Минск, 2000. - С. 72-74. СЛОБОЖАНИНА Е.И. и др. Прикладная спектроскопия. - 1998. - Т. 65.6. - С.939-942. КОЗЛОВА Н.М. и др. Материалы пятого научного съезда специалистов клинической лабораторной диагностики Республики Беларусь. - Минск,1997. - С.170-171. КОРБУТ И.А. и др. Медицинская панорама. - 2006. -4. - С.64-67. МАКАРОВ О.В. и др. Российский вестник акушера-гинеколога. - 2004. - Т. 4.4. - С.24-29.(57) Способ диагностики наличия внутриутробных пороков развития плода, отличающийся тем, что берут пробу амниотической жидкости в сроке беременности не ранее 16 недель, разводят физиологическим раствором в соотношении 112, освобождают от нерастворимого материала путем центрифугирования при 3000-3500 в течение 10 мин, определяют оптическую плотность при длине волны 280 нм 280 и в пределах длин волн 450455 нм 450-455, вычисляют отношение 280/450-455 и, если оно равно 16 или менее, диагностируют наличие внутриутробных пороков развития плода. Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и предназначено для диагностики внутриутробных пороков развития плода. В целях дальнейшего снижения анте - и перинатальной заболеваемости и смертности очень важным остается выявление факторов, обеспечивающих нормальное внутриутробное развитие плода. Решить эту задачу нельзя без использования новейших методов, поз 14950 1 2011.10.30 воляющих на самых ранних стадиях внутриутробного развития диагностировать угрожаемое состояние плода и применять соответствующую коррекцию возникших нарушений. Известно, что химические, физические и биологические свойства амниотической жидкости (околоплодных вод) определяют характер внешней среды и гомеостаза плода 1-4,поэтому показатели, характеризующие свойства этой жидкости, могут служить в качестве диагностического теста. Амниотическая жидкость секретируется амнионом - внутренней плодной оболочкой и ее состав частично пополняется веществами из кровеносных сосудов беременной, а также мочой плода. В состав амниотической жидкости входят белки (в том числе иммуноглобулины и ферменты), липиды, гормоны, углеводы, антигены, соответствующие группе крови, и др. вещества. Она имеет большое физиологическое значение, так как является внешней средой для жизнедеятельности плода. Биохимическое исследование амниотической жидкости (, концентрация 2, активность ферментов и др.) дает возможность оценить степень нарушения метаболических процессов, происходящих при развитии плода, диагностировать гипоксию плода во время беременности и при родах 5. Однако своевременное выявление беременных с повышенным риском нарушений у плода на ранних стадиях развития представляет значительные трудности в акушерской практике. Для оценки состояния плода широко используется метод ультразвуковой эхографии. Однако ультразвуковое обследование беременных дает общую картину развития плода. Наряду с ультразвуковым обследованием наиболее точной в настоящее время является диагностика, основанная на цитогенетическом исследовании амниотической жидкости и определении концентрации альфа - фетопротеина и активности ацетилхолинэстеразы как в амниотической жидкости, так и в плазме крови 6. Проведение цитогенетических исследований требует значительного времени и высокой квалификации врача-морфолога, кроме того, многократное повторение их при необходимости проследить за динамикой развития процесса затруднительно из-за невозможности быстрого воспроизведения. Известен способ диагностики наличия пороков развития плода путем исследования концентрации альфа - фетопротеина и активности ацетилхолинэстеразы в амниотической жидкости и плазме крови 6. Для этого в исследуемых образцах (амниотическая жидкости и плазма крови) определяют концентрацию альфа - фетопротеина с помощью радиоиммунного метода и активность ацетилхолинэстеразы спектрофотометрически в оптических единицах. При значении концентрации альфа - фетопротеина и активности ацетилхолинэстеразы в амниотической жидкости, превышающей в 1,8-2,0 раза показатели, характерные для нормы, делают заключение о наличии внутриутробных пороков развития плода. Однако данный метод диагностики требует использования дорогостоящих реактивов и не позволяет быстро решить вопрос о наличии внутриутробных пороков развития плода,т.к. для проведения такого исследования необходимо несколько часов. Задача, для решения которой создано предлагаемое изобретение, состоит в разработке эффективного и достоверного экспресс-метода диагностики наличия внутриутробных(врожденных) пороков развития плода. Поставленная задача достигается тем, что в способе диагностики наличия внутриутробных пороков развития плода, согласно изобретению, берут пробу амниотической жидкости в сроке беременности не ранее 16 недель и разводят физиологическим раствором в соотношении 112. Путем центрифугирования при 3000-3500 в течение 10 мин пробу освобождают от нерастворимого материала. Затем определяют оптическую плотность при длине волны 280 нм 280 и в пределах длин волн 450-455 нм 450-455. После этого вычисляют отношение 280/450-455 и, если оно равно 16 или менее, диагностируют наличие внутриутробных пороков развития плода. 14950 1 2011.10.30 Степень разведения амниотической жидкости до уровня 112 была подобрана экспериментально с целью сохранения в ней большей концентрации веществ, поглощающих в области длин волн 450-455 нм, которые накапливаются в амниотической жидкости при нарушении развития плода, и в то же время для того, чтобы оставалась возможность измерения поглощения света в ультрафиолетовой области при длине волны 280 нм. Это позволило повысить достоверность полученных результатов. Сокращение времени центрифугирования до 10 мин позволило способ диагностики наличия внутриутробных пороков развития плода сделать экспрессным и эффективным. Спектры поглощения регистрируют на любом спектрофотометре. Способ осуществляется следующим образом. Пробу 0,5-1 мл амниотической жидкости и разводят в соотношении 112 физиологическим раствором . Затем удаляют клеточный материал путем центрифугирования при 3000-3500 в течение 10 мин. После чего записывают спектр поглощения полученного образца в области 250-500 нм и оценивают величины оптической плотности при 280 нм 280 и при 450-455 нм 450-455. После этого вычисляют значение величины , которое определяется как отношение 280/450-455. С помощью предлагаемого метода были обследованы 64 женщины (3 группы). Средние значения величиндля амниотической жидкости различных групп обследованных пациенток представлены в таблице. Из представленных данных видно, что в группе женщин с нормально протекающей беременностью средние значения величинысоставляли - 39,9 - для срока гестации 3940 недель, 32 - для срока гестации 16-22 недели. Установлено, что у беременных с внутриутробными пороками развития плода величина К для амниотической жидкости имела значение 16 и ниже. Группы обследованных(роды) стью Женщины с нормально 2. протекающей беременно 10 16-22 недели 325 стью Женщины с пороками раз 3. 19 16-22 недели 15,51,3 вития плода Примеры конкретного выполнения. Пример 1. Беременная С. 1970 г.р. поступила в родильный дом Минской области (РДМО) 03.04.08 г. При проведении ультразвукового исследования (УЗИ) выставлен диагноз беременность 21 неделя, множественные внутриутробные пороки развития у плода гигрома шеи, порок развития легких, асцит. Измерена величина оптической плотности амниотической жидкости при длинах волн 280 и 450-455 нм и подсчитано значение 7,4. Эти показатели свидетельствовали о внутриутробных пороках развития плода. Проведено прерывание беременности. Пример 2. Беременная Т. 1973 г.р. Обратилась в РДМО 16.04.08 г. Обследована, проведено УЗИ,выставлен диагноз беременность 21 неделя, диафрагмальная грыжа. Измерена величина оптической плотности амниотической жидкости при длинах волн 280 и 450-455 нм и подсчитано значение 14,0. Эти показатели свидетельствовали о внутриутробных пороках развития плода. Произведено прерывание беременности. 14950 1 2011.10.30 Пример 3. Беременная К. 1988 г.р. Обратилась в РДМО 02.06.08 г. Обследована. Проведено УЗИ,выставлен диагноз беременность 21 неделя, обнаружены внутриутробные пороки развития в виде расщелины губы и верхнего неба. Измерена величина оптической плотности амниотической жидкости при длинах волн 280 и 450-455 нм и подсчитана величина 10,5. Эти показатели свидетельствовали о внутриутробных пороках развития плода. Проведено прерывание беременности. Пример 4. Беременная Ш. 1991 г.р. Обратилась в РДМО 23.09.08 г. Обследована. Проведено УЗИ, выставлен диагноз беременность 18 нед., физиологическая незрелость женского организма. Внутриутробных пороков развития плода не выявлено. Измерена величина оптической плотности амниотической жидкости при длинах волн 280 и 450-455 нм и подсчитана величина 31. Проведено прерывание беременности (по социальным факторам). Таким образом, из приведенных данных видно, что предлагаемый способ достаточно прост, не требует специальной подготовки, отличается высокой точностью, достоверностью и быстротой в выполнении. Источники информации 1. Сидельникова В.М., Антонов А.Г. Гемолитическая болезнь плода и новорожденного. - М. Триада-, 2004. - 191 с. 2. Паллади Г.А., Метакса Я.В., Марку Г.А. Некоторые особенности гомеостаза матери и плода. - Кишинев Штинца, 1980. - 224 с. 3. Федорова М.В., Быкова Г.Ф. Роль околоплодных вод в поддержании гомеостаза плода // Акушерство и гинекология. - 1981. -11. - С. 9-12. 4.,,( Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4