Способ прогнозирования врожденного порока развития плода

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВРОЖДЕННОГО ПОРОКА РАЗВИТИЯ ПЛОДА(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Плоцкий Андрей Романович Егорова Татьяна Юрьевна Наумов Александр Васильевич(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) ПЛОЦКИЙ А.Р. и др. Здоровая мать здоровый ребенок Сб. материаловсъезда педиатров Республики Беларусь. - Минск, 2006. - С. 336-339. МОЙСЕЕНОК Е.А. Альманах здоровье и питание Сб. тр. республиканской научно-практической конференции Здоровье и питание. - Минск. -2005. С. 160-163... - 1999. - . 180. - . 3. - . 1. . 660-664.. ., 1986. .35. - . 10. - . 889-891.(57) Способ прогнозирования врожденного порока развития плода, представляющего собой патологию передней брюшной стенки, атрезию пищевода, хромосомные аномалии, диафрагмальную грыжу, шейную гигрому, патологию почек или множественные пороки развития,отличающийся тем, что в плазме крови беременной женщины определяют уровень общего гомоцистеина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием маркера - и флуоресцентной детекцией при длинах волн возбуждения и флуоресценции соответственно 385 нм и 515 нм и при уровне гомоцистеина, превышающем 7,91 мкмоль/л, прогнозируют вероятность врожденного порока развития плода. Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, гинекологии и пренатальной диагностике, и может использоваться для прогнозирования риска развития врожденных аномалий у плода. Проведя патентный поиск, нами не выявлено близкого к предлагаемому способа прогнозирования врожденных аномалий развития у плода. Задача изобретения - обеспечение возможности прогнозирования вероятности формирования врожденных аномалий развития у плода в целях проведения качественной и своевременной диагностики этих состояний. Указанная задача решается путем определения уровня общего гомоцистеина в плазме беременных женщин методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ( -) с использованием маркера - и флуоресцентной детекцией при длинах волн возбуждения и флуоресценции соответственно 385 нм и 515 нм, и при уровне гомоцистеина, превышающем 7,91 мкмоль/л, прогнозируют вероят 12891 1 2010.02.28 ность врожденного порока развития плода, представляющего собой патологию передней брюшной стенки, атрезию пищевода, хромосомные аномалии, диафрагмальную грыжу,шейную гигрому, патологию почек или множественные пороки развития. Способ осуществляют следующим образом. У всех пациенток утром натощак забирают кровь из локтевой вены, помещают в пробирки с гепарином и сразу же центрифугируют. Полученную плазму (в количестве 1 мл) замораживают при температуре - 18 С. В дальнейшем образцы плазмы хранят при температуре - 78 С до момента проведения анализа. Уровень гомоцистеина в плазме крови определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ( -) с использованием маркера - и флуоресцентной детекцией при длинах волн возбуждения и флуоресценции соответственно 385 нм и 515 нм. В день проведения исследования 50 мкл размороженной плазмы смешивали с 5 мкл раствора ТСЕР 2- (100 мг/мл), после чего оставляли при комнатной температуре на 30 мин. Затем осаждали белки добавлением 50 мкл 10 раствора ТХУ (трихлоруксусная кислота) и центрифугировали при 4 С в течение 15 мин при 16000 . В микропробирку объемом 200 мкл, содержащую 2 мкл 1,55 М , 12,5 мкл 0,125 М-боратного буфера с 200 мг/л ЭДТА, рН 9,5, и 5 мкл раствора - ( 7-2,34-) (1 мг/мл) в аналогичном буфере, вносили 10 мкл супернатанта и инкубировали 1 ч при 60 С. После охлаждения при комнатной температуре в систему вводили 10 мкл реакционной смеси. Разделение осуществляли на колонке Диасорб 130 16, 3250 мм, 7 мкм. Подвижная фаза 0,1 М 24, 17 мМ СН 3 СООН, рН 3,65, 40 мг/л ЭДТА, 3 ацетонитрила. Скорость потока 0,6 мл/мин, температура колонки 30 С. Детектирование осуществлялось по флуоресценции, 379/510 нм. Определения проводили на хроматографической системе 1100,содержащей 4-канальный градиентный насос, термостат колонок, автосамплер и детектор флуоресценции. Регистрация хроматограмм и их количественная обработка осуществлялись с помощью 10.01. При уровне гомоцистеина в плазме крови,превышающем 7,91 мкмоль/л, прогнозируют высокую вероятность врожденных аномалий развития у плода. Следовательно, требуется проведение углубленного обследования пациенток для диагностики или исключения врожденных аномалий развития у плода. Полученные результаты обработаны с помощью методов непараметрической статистики с использованием стандартных компьютерных программ 6.0,. Рассчитывались медиана, 25 и 75 процентили (, 25 , 75 ). Сравнение групп осуществляли с помощью критерия Манна-Уитни. Для доказательства заявляемого способа проведено исследование уровня гомоцистеина у 154 пациенток, которые были разделены на 2 группы. Основную группу составили 102 пациентки, у которых имелись различные виды врожденных аномалий у плода, подтвержденные при патологоанатомическом исследовании абортусов либо при обследовании новорожденных после родов. Группу сравнения составили 52 пациентки, которые родили детей без врожденных аномалий. Пациентки основной группы были разделены на несколько подгрупп в зависимости от вида порока развития. Уровень гомоцистеина в группе сравнения составил 5,81 (4,8-6,77) мкмоль/л. В таблице показан уровень гомоцистеина (мкмоль/л) в плазме крови беременных в основной и контрольной группах. Как следует из таблицы, уровень гомоцистеина был достоверно выше при выявлении у плода пороков центральной нервной системы, хромосомных аномалий, шейной гигромы,патологии передней брюшной стенки, поликистоза почек, атрезии пищевода, диафрагмальной грыжи, а также при множественных врожденных пороках развития. Уровень гомоцистеина был также повышен при скелетных дисплазиях и в случае обнаружения опухолей,характерных для перинатального периода, однако это повышение не оказалось статистически достоверным. Не отмечено разницы в уровне общего гомоцистеина при пороках сердца, патологии легких и расщелин лица у плода по сравнению с контрольной группой. 2 12891 1 2010.02.28 Уровень гомоцистеина (мкмоль/л) в плазме крови беременных основной и контрольной групп. Количество наблюдений Патология передней брюшной стенки Расщелины верхней губы и твердого неба Множественные врожденные пороки развития- разница показателей по сравнению с контрольной группой достоверна (р 0,05). При точке разделения 7,91 мкмоль/л чувствительность метода составляет 27,5 , а специфичность 96,1 . Таким образом, заявляемый способ прогнозирования возникновения врожденных пороков развития у плода позволяет сформировать группы риска среди беременных женщин для проведения дополнительных диагностических мероприятий с целью подтверждения или исключения врожденных аномалий у плода. Данный способ может быть применен в работе медико-генетических консультаций и перинатальных центров для прогнозирования высокой вероятности возникновения врожденных пороков развития у плода. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3