Способ дифференциальной диагностики травматического синовита и ревматического заболевания сустава

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТРАВМАТИЧЕСКОГО СИНОВИТА И РЕВМАТИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ СУСТАВА(71) Заявители Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии(72) Авторы Слобожанина Екатерина Ивановна Козлова Наталья Михайловна Белоенко Евгений Дмитриевич Зубрицкая Галина Петровна Эйсмонт Олег Леонидович Скакун Павел Григорьевич Букач Дмитрий Вячеславович Герасименко Михаил Александрович(73) Патентообладатели Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии(57) Способ дифференциальной диагностики травматического синовита и ревматического заболевания сустава, заключающийся в том, что к 2 мл разведенного в соотношении 19 буферным раствором с рН 7,4 пунктата синовиальной жидкости больного добавляют до концентрации 10-5 М флуоресцентный зонд 1-анилино-8-нафталинсульфонат, инкубируют 30 минут при 20 С, измеряют максимальную интенсивность флуоресценции связанного с компонентами синовиальной жидкости зонда при его возбуждении светом с длиной волны 375 нм, и если максимальная интенсивность флуоресценции составляет 235,040,0 отн. ед., диагностируют травматический синовит, а если 82,0 отн. ед. или менее - ревматическое заболевание сустава. Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано в дифференциальной диагностике повреждений и заболеваний суставов. Синовиальная среда суставов представляет собой чрезвычайно сложную динамически сбалансированную систему, изменение ее количественного и качественного состава отра 12197 1 2009.08.30 жает нарушение функции сустава, что используется как тест в дифференциальной диагностики суставных заболеваний. Наиболее точной в настоящее время является дифференциальная диагностика, основанная на микроскопическом исследовании гистологических препаратов, изготовленных из биоптатов суставных тканей и синовии 1. Однако проведение гистологических исследований требует значительного времени и высокой квалификации врача-морфолога, кроме того, многократное повторение их при необходимости проследить за динамикой развития процесса затруднительно из-за травматичности или невозможности воспроизведения. Известен способ оценки характера внутрисуставного воспаления путем исследования структурно-оптических свойств синовиальной жидкости методом поляризационной фотометрии 2. Данный метод диагностики позволяет быстро решить вопрос о характере воспаления, но не может использоваться для дифференциальной диагностики различных заболеваний суставов. Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является флуоресцентный метод выявления матриксных металлопротеиназ в синовиальной жидкости с использованием флуорогенного субстрата 0003, позволяющий определять активность этих ферментов, в т.ч. при артритах 3. Данный способ позволяет определить активность воспалительного процесса при артрите, например ревматоидном, но недостаточен для определения характера внутрисуставного воспаления. Задача, для решения которой создано изобретение, состоит в разработке эффективного способа дифференциальной диагностики травматического синовита и ревматического заболевания сустава. Поставленная задача решается предлагаемым способом дифференциальной диагностики травматического синовита и ревматического заболевания сустава, для чего к 2 мл разведенного в соотношении 19 буферным раствором с 7,4 пунктата синовиальной жидкости больного добавляют до концентрации 10-5 М флуоресцентный зонд 1-аналино 8-нафталинсульфонат, инкубируют 30 минут при 20 С, измеряют максимальную интенсивность флуоресценции связанного с компонентами синовиальной жидкости зонда при его возбуждении светом с длиной волны 375 нм, и если максимальная интенсивность флуоресценции составляет 235,040,0 отн. ед., диагностируют травматический синовит,а если 82,0 отн. ед. или менее - ревматическое заболевание сустава. Способ осуществляется следующим образом. Синовиальную жидкость больного предварительно центрифугируют для удаления нерастворимого материала и разводят в соотношении 19 в забуференном растворе , 7,4. Для определения параметров флуоресценции к 2 мл синовиальной жидкости добавляют 20 мкл 1 10-3 М раствора 1-анилино-8-нафталинсульфоната (АНС). Конечная концентрация зонда в образцах синовиальной жидкости должна составлять - 1 10-5 М. Исследуемый образец инкубируют 30 мин при 202 С. Флуоресцентные измерения проводят в диапазоне длин волн 390-500 нм, при возб.375 нм. Спектры флуоресценции регистрируют на спектрофлуориметре. Определяют интенсивность флуоресценции связанного с компонентами синовиальной жидкости АНС (в максимуме спектра флуоресценции при длине волны 470 нм). Выбранный для предлагаемого способа диагностики АНС является флуоресцентным зондом, который связывается как с липидами, так и с белками синовиальной жидкости, и интенсивность флуоресценции которого зависит от полярности окружения. Одной из причин пониженной интенсивности флуоресценции АНС в синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом может быть окислительная модификация липопротеинов синовиальной жидкости. Известно, что количество липопротеинов низкой плотности в синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом увеличивается, но они находятся в 2 12197 1 2009.08.30 окисленном состоянии и характеризуются более высоким отрицательным зарядом. В результате этого и может происходить снижение интенсивности флуоресценции связанного с компонентами синовиальнй жидкости АНС, имеющего также отрицательный заряд. Пример выполнения способа. Для исследования возможности использования предложенного способа диагностики были исследованы пунктаты синовиальной жидкости больных травматическим синовитом- 12 человек (группа 1) и ревматическим заболеванием суставов - 5 человек (группа 2), находившихся на лечении в клиническом отделении ГУ Республиканский научнопрактический центр травматологии и ортопедии. Пунктаты синовиальной жидкости предварительно центрифугировали для удаления нерастворимого материала и затем разводили в соотношении 19 в забуференном растворе ,7,4. Для определения параметров их флуоресценции к 2 мл разведенной синовиальной жидкости добавляли 20 мкл 1 10-3 М раствора АНС. Образцы инкубировали 30 мин при 202 С. Флуоресцентные измерения образцов проводили при возбуждении светом длиной волны 375 нм. Регистрацию интенсивности флуоресценции проводили в максимуме спектра флуоресценции АНС при 470 нм на люминесцентном спектрофотометре СОЛАР (Беларусь). Полученные результаты обрабатывались методом вариационной статистики. Анализ параметров внесенной флуоресценции синовиального выпота больных с синовитами травматического и ревматоидного генеза представлены в таблице и на фигуре. Интенсивность флуоресценции АНС (возб.375 нм рег 470 нм), отн. ед. Травматический синовит (группа 1) Ревматическое заболевание суставов (группа 2) 2354012 61,8195 где- количество лиц в группе,достоверность различий по сравнению с группой 1, Р 0,05. Как видно из представленных в таблице данных, интенсивность флуоресценции АНС(в максимуме спектра флуоресценции при длине волны 470 нм), связанного с компонентами синовиальной жидкости больных ревматическим заболеванием суставов, достоверно отличается от такового для группы больных с травматическим синовитом. Это подтверждается и полученными спектрами флуоресценции АНС, связанного с компонентами синовиальной жидкости больных на фигуре. Судя по спектрам флуоресценции АНС,интенсивность флуоресценции зонда в максимуме спектра люминесценции повышена в синовиальной жидкости больных травматическим синовитом (спектр 1) по сравнению со свечением этого зонда в синовиальной жидкости больных с ревматическими заболеваниями суставов (спектр 2). Таким образом, из полученных результатов следует, что по спектральнофлуоресцентным параметрам зонда АНС, связанного с компонентами синовиальной жидкости (липидами и белками), можно судить о характере внутрисуставного поражения. Источники информации 1. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др. / Под ред. В.В. Меньшикова. - М. Медицина, 1987. 2. Патент РФ 2159434, МПК 01 33/52, 2000. 3.-3-1. ...7 . .., , 22-24 .,1998. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4