Биоаффинный сорбент и способ избирательного удаления антител к инсулину из крови больных сахарным диабетом

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ БИОАФФИННЫЙ СОРБЕНТ И СПОСОБ ИЗБИРАТЕЛЬНОГО УДАЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ИНСУЛИНУ ИЗ КРОВИ БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Голубович Владимир Петрович Горанов Виталий Анатольевич Евстигнеева Елена Борисовна Чемитова Лилия Михайловна Третьяк Станислав Иванович Макаревич Денис Александрович Федоров Александр Александрович(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси(57) 1. Биоаффинный сорбент для избирательного удаления антител к инсулину из плазмы крови больных сахарным диабетом общей формулы где- число звеньев полиакриламидной цепи между центрами иммобилизации лигандов,равное 1-70,- число участков цепи с лигандом, равное 50-10000. 2. Способ избирательного удаления антител к инсулину, при котором проводят гемосорбцию с использованием биоаффинного сорбента по п. 1. Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и может быть использовано для избирательного удаления антител к инсулину из плазмы крови больных сахарным диабетом. 11615 1 2009.02.28 Известен способ удаления антител к инсулину из плазмы крови больных сахарным диабетом, который заключается в проведении процедуры плазмафереза. Однако клинический эффект такой процедуры является непродолжительным (от нескольких дней до 6-8 месяцев), а снижение антител к инсулину неполным. Метод плазмафереза обладает следующими недостатками неселективностью - удаляются все компоненты плазмы ослабление иммунного статуса пациентов из-за сопутствующего удаления антител, не являющихся цитотоксическими в отношении проводимой терапии тяжело переносится пациентами и имеется риск осложнений требует использования плазмозамещающих растворов 1. В патенте 2090186 С 1, 1997 описан сорбент и его применение для извлечения антител к инсулину из биологических жидкостей 2 (прототип), представляющий собой гранулированный активированный уголь, содержащий инсулин, ковалентно связанный(иммобилизованный) с функциональными группами углеродной матрицы в количестве 0,7-2,2 мас. Способ получения сорбента включает последовательную обработку окисленного гранулированного активированного угля растворами водорастворимого карбодиимида и белковой добавки-инсулина. Заявленный сорбент (прототип) имеет ряд недостатков способ получения весьма трудоемок (18-20 часов), количество мобилизованного инсулина и сорбционные характеристики матрицы должны удовлетворять заявленным интервалам. Матрица прототипа обладает меньшей гемосовместимостью по сравнению с матрицей заявляемого сорбента 3, гемосорбция на угольных сорбентах приводит к травмированию форменных элементов крови 4. Задачей изобретения является новый гемосорбент для избирательного удаления антител к инсулину из крови больных сахарным диабетом. Поставленная задача достигается использованием не известного ранее биоаффинного сорбента, где в качестве полимераматрицы используют полиакриламидный гель, а в качестве биоаффинного лиганда инсулин, при следующем соотношении компонентов (мас. ) полиакриламид - от 5 до 10, инсулин - от 0,1 до 0,4. Сорбент имеет следующую химическую формулу где- число звеньев полиакриламидной цепи между центрами иммобилизации лигандов,равное 1-70,- число участков цепи с лигандом, равное 50-10000. Выбор полиакриламидной матрицы обусловлен ее стабильностью, биологической инертностью, возможностью введения лиганда на стадии полимеризации. Для превращения вводимого в качестве лиганда инсулина в мономер проводят его ацилирование акрилоилхлоридом. Полученное производное используют как мономер при сополимеризации акриламида, ,-метиленбисакриламида в присутствии персульфата аммония и тетраметилендиамина в качестве инициаторов полимеризации. Получение заявляемого сорбента приведено в примере 1. Пример 1. К раствору 0,1 г (0,017 ммоль) инсулина в 50 мл 4 раствора бикарбоната натрия,перемешиваемого в течение 15 мин, по каплям прибавляют 0,01 мл (0,13 ммоль) акрилоилхлорида и перемешивают 45 мин при пониженной температуре (4-7 С). В реакционный сосуд вносят 2,76 г (38,8 ммоль) акриламида и 0,185 г (1,2 ммоль) ,-метиленбисакриламида и перемешивают в течение 15 мин. После растворения компонентов к реакционной смеси прибавляют 0,16 г (0,7 ммоль) персульфата аммония и 0,08 мл (0,5 ммоль) 2-тетраэтилметилендиамина. Через 1-3 мин образуется прозрачный гель. Гель оставляют на 30 мин, затем измельчают с использованием шприца с диаметром выходного отверстия 2 мм. Опалесцирующие гранулы сперва многократно промывают дистиллированной водой (общий объем 0,5 л), а затем 0,9 раствором(общий объем 0,3 л). Отмытый гель хранят в 0,9 растворев холодильнике. Заявляемый биоаффинный сорбент может быть использован для избирательного удаления антител к инсулину из крови больных сахарным диабетом при помощи гемосорбции. Изучение эффективности заявляемого способа приведено в примере 2. Пример 2. При исследовании пациентов, страдающих сахарным диабетом и имеющих ряд осложнений основного заболевания, с помощью набора(376-15) была отобрана группа пациентов (18) с повышенным содержанием антител к инсулину (более 0,3 /)(табл. 1). В 1 серии экспериментов была проведена одна, во 2-й - две, в 3-й - три процедуры гемосорбции с использованием специфического сорбента на основе инсулина. Сразу после процедуры уровень антител к инсулину не превышал 0,05 /. Через 3 месяца после гемосорбции только в 2-х случаях уровень антител к инсулину незначительно превысил 0,2 /1 (табл. 2). Таблица 1 Результаты калибровки тест-системы(376-15). Результаты, полученные у пациентов после применения сорбции Номер диабета (/). Через 3 месяца аликвот после гемосорбции Полученные результаты свидетельствуют о выраженной клинической эффективности разработанного способа. Заявляемый способ позволяет избирательно элиминировать из крови антитела к инсулину, не изменяя общего уровня иммуноглобулинов крови не ослабляет иммунный статус пациентов не требует использования плазмозамещающих растворов не влияет на показатели иммунитета, относящиеся к антиинфекционной и антитуморогенной защите. 3 11615 1 2009.02.28 Источники информации 1... . - 1985. -34. - . 926-930. 2. Патент РФ 2090186 1, 1997. 3. Кирковский В.В. Детоксикационная терапия при перитоните. - Мн., 1997. 4. Лопаткин Н.А., Лопухин Ю.М. Эфферентные методы в медицине. - М., 1989. - С. 215. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4