Молекула ДНК, белок MORT-1, способ получения полипептида

Данное изобретение относится к области рецепторов, принадлежащих суперсемейству рецепторов ТИР/МОР, и контролю их биологических функций. Суперсемейство рецепторов ТИР/МОР включает такие рецепторы как р 55 и р 75 фактора некзора опухоли (ТМР-К) и рецептор лиганда РАЗ (названный также РА 5/АРО 1 или РАЗ-К, далее будет называться РАЗ-К) и другие. Конкретно данное изобретение касается нового белка, обозначенного здесь МОКТ-1(названный также НР-1), который соединяется с внутриклеточным доменом (Ю) Раз-К (этот внутриклеточный домен получил обозначение Раз-Ю). Этот новый белок способен модулировать функцию Раз-К. Кроме того, МОКТ-1 способен к самоассоциации и может активировать собственную цитотоксичность клетки. Данное изобретение касается также получения и использования МОКТ-1.Фактор некроза опухоли (ТИР-а) и Лимфотоксин (ТИР-В) (далее ТМР-а и ТМР-В оба будут обозначаться ТМР) являются многофункциональными цитокинами, провоцирующими воспалительные процессы, синтезируемыми главным образом моноядерными фагоцитами, и оказывающими разнообразные эффекты на клетки (Уа 11 асЪ 1 В. (1986) в 1 пгегтегог 1 7 (1 оп Сгеззег, ес 1.), стр. 83-122,Асадетйс Ргезз, Ьопоп и ВеиНег апс 1 Сегатй (1987. ТМР-а и ТМР-В проявляют свои эффекты путем связывания с рецепторами клеточной поверхности. Некоторые эти эффекты полезны для организма например, они могут убиватьОПУХОЛВВЫС КЛСТКИ ИЛИ КЛСТКИ, инфицированные ВИРУСОМ, И усиливатьпротивобактериальную активность гранулоцитов. Таким способом ТМР участвует в защитных реакциях организма против опухолей и инфекционных агентов и в залечивании ран. Так, ТМР можно использовать как противоопухолевое средство. В этом случае он связывается с рецепторами на поверхности опухолевых клеток и таким образом инициирует процессы, ведущие к гибели опухолевой клетки. ТЫР можно также использовать в качестве противоинфекционного средства.Однако как ТМР-а, так и ТМР-З оказывают также вредные эффекты. Имеются данные, что чрезмерная продукция ТМР-а может играть основную патогенную роль в ряде заболеваний. Так сейчас известно, что действие ТИР-а,прежде всего на сосудистую систему является основной причиной симптомов септического шока (Тгасеу е а 1. 1986). При некоторых заболеваниях ТМР может вызвать чрезмерную потерю веса (кахексию), подавляя активность адипоцитов И вызывая анорексию и поэтому он был назван кахетином. Он был также описан как посредник повреждения тканей при ревматических заболеваниях (Веи 1 ег апс 1 Сегашй, 1987) И как основной посредник наблюдаемого нарушения реакций трансплантат - против хозяина (Рйчие е а 1. 1987). Кроме того, известно, что ТМРучаствует В ПРОЦСССС ВОСПЗЛСНИЯ И ВО МНОГИХ ДРУГИХ заболеваниях.Инициация и/или модуляция вышеуказанных биологических эффектов ТЫР осуществляется двумя различными, независимо экспрессируемыми, рецепторами р 55 и р 75 ТЫР-К, которые специфически связывают как ТМР-а так и ТИР-В. Эти два рецептора имеют структурно различающиеся внутриклеточные домены, что указывает на различие идущих от них сигналов (см. НоЬшапп е а 1989 Епдеппапп е а 1. 1990 Вгос 111 аи 5 е а 1. 1990 ЬеовсЬег е а 1. 1990 с 11 а 11 е а 1. 1990 Мориат е а 1. 1990 Зшйш е а 1. 1990 и НеПег е а 1. 1990). Однако еще необходимо выяснить клеточные механизмы, например, различные белки исигналов от р 55 и р 75 ТИР-К (в РСТЮ 95/О 5854 и приводимом ниже в данной работе материале описаны новые белки, способные связываться с р 75 1 С и р 551 С).ИМСННО ВНУТРИКЛСТОЧНЫС сигналы, КОТОРЫЕ ОбЫЧНО ИМСЮТ МССТО ПОСЛСсвязывания лиганда, то есть ТЫР (а, или В) с рецептором, ответственны за началокаскада реакций, КОТОрЫЕ В КОНСЧНОМ СЧСТС ПрИВОДЯТ К наблюдаемой реакцииЧто касается цитотоксического действия ТМР, то у большинства изученных в настоящее время клеток это действие запускается главным образом рецептором р 55 ТЫР-К. Антитела против внеклеточного домена (домена, связывающего лиганд) р 55 ТИР-К сами по себе могут запускать цитотоксическое действие (см.ЕР 412486), что коррелирует с эффективностью связывания рецептора антителами. Полагают, что это является первым этапом генерации процессов выработки внутриклеточных сигналов. Исследование мутаций (Вгакеьизсл е а 1.,1992 Тагга 311 а е а 1., 1993) показало, что биологическая функция р 55 ТИР-К зависит от целостности его внутриклеточного домена, и в соответствии с этим предположили, что инициация внутриклеточного сигнала, ведущего к цитотоксическому эффекту ТМР, осуществляется как следствие соединения двух или более внутриклеточных доменов р 55 ТИР-К. Кроме того, ТМР (а и В) обнаруживается как гомотример и, как предположили, индуцирует внутриклеточный сигнал через р 55 ТЫР-К благодаря его способности связываться и образовывать поперечные связи между молекулами рецептора, т.е. осуществлять агрегацию рецептора. В РСТ/П 595/О 5854, а также в данной работе ниже описывается, какбр 551 С и р 55 В 1 Э могут самоассоциироваться и индуцировать независящие от лиганда такие эффекты на клетку, какие оказывает ТЫР.Другим членом суперсемейства рецепторов ТЫР/МОР является рецептор РАЗ (РАЗ-К), который назван также антиген РАЗ, белок поверхности клетки,эксперссируемый в различных тканях и обнаруживающий гомологию с рядом рецепторов поверхности клетки, включая ТЫР-К и МОР-К. РАЗ-К опосредует гибель клетки путем апоптоза (1 то 11 е а 1., 1991) и, по-видимому, служит в качестве фактора негативной селекции аугореактивных Т-клеток, т.е. в процессе созревания Т-клеток РАЗ-К опосредует апоптоз Т-клеток, распознающихвызывают лимфопролиферативное расстройство у мышей, которое соответствует аутоиммунному заболеванию человека - системной красной волчанке (ШаъапаьеРикипава ст а 1., 1992). Лигандом РАЗ-К, по-видимому, является молекула поверхности клетки, которую наряду с другими клетками несут Т-клетки киллеры(или цитотоксические Т-лимфоциты - СТЬ). Поэтому, когда такие СТЬ приходят в контакт с клетками, несущими РАЗ-К, они способны индуцировать апоптоз клеток, несущих РАЗ-К. Далее, были получены моноклональные антитела против РАК, и эти моноклональные антитела обладали способностью индуцировать апоптоз клеток, несущих РАЗ-К, включая мышиные клетки, трансформированные кДНК, кодирующей РАЗ-К человека (1 го 11 е а 1., 1991).Было обнаружено также, что различные другие нормальные клетки наряду с Т-лимфоцитами экспрессируют РАЗ-К на поверхности И могут быть убиты путем запуска этого рецептора. Предполагают, что неконтролируемая индукция такого процесса гибели клеток вносит вклад в повреждение ткани при определенных заболеваниях, например, деструкции клеток печени при острых гепатитах. Поэтому поиск путей ограничения цитотоксической активности РАЗ-К может иметь терапевтическое значение.Напротив, так как было обнаружено, что определенные малигнизированные клетки и клетки, инфицированные вирусом НЕУ, несут на поверхности РАЗ-К,антитела против РАЗ-К или лиганд РАЗ-К могут быть использованы для запуска опосредованных рецептором РАЗ-К цитотоксических эффектов у этих клеток и,таким образом, могут служить в качестве средства борьбы с такими малигнизированньтми клетками или клетками, инфицированными вирусом НГЧ(см. Поп е а 1., 1991). Поэтому поиск других путей увеличения цитотоксической активности РАЗ-К также может иметь терапевтическое значение.Долгое время считали необходимым найти путь модуляции реакции клетки на ТМР (а или В) и лиганд РАЗ, например, в таких патологических случаях,которые упомянуты выше, где имеет место повышенная экспрессия ТМР илиганда РАЗ, и желательно подавить цитотоксические эффекты, индуцируемые