Кристалл белка, сшитого многофункциональным сшивающим агентом (варианты), устройство, содержащее этот кристалл и способ получения аспартама

12. Кристалл по п. 1 или 2, отличающийся тем, что он шиеет поперечное сечение размером около 101 ши или менее.13. Кристалл по п. 4, отличающийся тем, что является кристаллическим сшитым термолизином, обладающим такой устойчивостью к экзотенному протеолизу, что кристаллический сшитый термолизин сохраняСТ СГ О ИСХОДНОЙ НКТИВНОСГИ ПОСЛС ИНКубИрОВЬЦ-ИЯ В ТСЧСНИС ПО МСНЬШСЙ МСрС ОДНОГО часа В присутствии такой концентрации Проназьттм, которая вызывает у растворимой несшитой формы термолизина, из которой образован кристаллический сшитый термолизин, потерю по меньшей мере 97 ее исходной активности в тех же условиях.14. Кристалл по п. 6, отличающийся тем, что является кристаллической сшитой аепарагштазой, обладающей такой устойчивостью к экзогенному протеолизу, что кристаллическая сшитая аспарагиназа сохраняет по меньшей мере 91 ее исходной активности после инкубирования в течение по меньшей мере трех часов в присутствии такой коъщентрации ПроназыТМ, которая вызывает у растворимой несшитой формы аспарагиназы, из которой образована кристаллическая сшитая аспаратиназа, потерю по меньшей мере 94 ее исходной активности в тех же условиях.15. Кристалл по п. 7, отличающийся тем, что является кристаллическим сшитым лизоцимом, обладаюЦП/ПИ такой УСТОЙЧИБОСТЬЮ К ЭКЗОГСННОМУ ПРОТСОЛИЗУ, ЧТО кристалличсски СШИТЫЙ ЛИЗОЦИМ СОЬрЗНЯСТ ПО меньшей мере 91 его исходной активности после инкубирования в течение по меньшей мере трех часов в присутствии такой коъщентрации Проназыш, которая вызывает у растворимой несшитой формы лизоцима,из которой образован кристаллическшй сшитый лизошпи, потерю по меньшей мере 94 ее исходной активности в тех же условиях.16. Кристалл по п. 8, отличающийся тем, что является кристаллической сшитой эетеразой, обладающей такой устойчивостью к экзотенному протеолизу, что кристаллическая сцштая эстераза сохраняет по меньшей мере 91 ее исходной активности после ишсубирования в течение по меньшей мере трех часов в присутствии такой концентрации ПроназыТМ, которая вызывает у растворимой несшитой формы эетеразы, из которой образована кристалическая сшитая эстераза, потерю тто меньшей мере 94 ее исходной активности в тех же условиях.17. Кристалл по п. 9, отличающийся тем, что является кристаллической сшитой эластазой, обладающей такой устойчивостью к экзотенному протеолизу, что кристаллическая отлитая эластаза сохраняет по меньшей мере 100 ее исходной активности после инкубирования в течешите по меньшей мере трех часов в присутствии такой концентрации Проназьттм, которая вызывает у растворимой несшитой формы элаетазы, из которой образована кристалическая сшитая эластаза, потерю по меньшей мере 98 ее исходной активности в тех же условиях.18. Кристалл по п. 10, отличающийся тем, что является кристаллической сшитой ттипазой, обладающей такой устойчивостью к экзотенному протеолизу, что кристалл сшитой лтшазы сохраняет по меньшей мере 91 ее исходной активности ттосле шшубирования в течние тто меньшей мере трех часов в ттрисутствии такой концентрации ПроназыТМ, которая вызывает у растворимой несшитой формы липазы, из которой образована кристаллическая сшитая липаза, потерю по меньшей мере 94 ее исходной активности в тех же условиях.19. Кристалл по п. 2, отличающийся тем, что является кристаллическим сшитым ферментом, обладающим по меньшей мере 50 каталитической активности растворимой несшитой формы этого фермента, которую Сшивают и кристаллизуют для получения указаштого кристаллического сшитого фермента.20. Кристалл по п. 19, отличающийся тем, что в качестве указанного фермента использован фермент термолизин, аспаратиназа, лизоцим, уреаза, эстераза или липаза.21. Кристалл белка, сцштого многофункциональньш ешивающити агентом, причем указанный кристалл сшитого белка обладает большим ттолуттериодом активности, чем растворимая несшитая форма белка, из которой образован указанный кристалл, после ишсубироваттия в 50 смсеи органического растворителя с водой в течение по меньшей мере одного часа.22. Кристалл по п. 21, отличающийся тем, что в качестве белка использован фермент.23. Кристалл по п. 22, отличающийся тем, что в качестве фермента использована гидролаза, выбранная из грушты, состоящей из термолизина, элаетазы, аепарагштазьт, лизоцима, уреазы, эетеразы и липазы.24. Кристалл белка, сцштого многофункциональным сшивающим агентом, причем указанный кристалл сшитого белка обладает такой стабильностью в 50 смеси органического растворителя с водой, что сохраняет по меньшей мере 40 его исходной активности после инкубирования в указанном растворителе в течение по меньшей мере одного часа.25, Кристалл по п. 24, отличающийся тем, что в качестве белка использован фермент, 26. Кристалл по п. 25, отличающийся тем, что в качестве фермента использована гидролаза, выбранная из группы, состоящей из термолизина, элаетазы, аспарагиназы, лизоцима, уреазы, эетеразы и липазы.27. Кристалл белка, сшитого многофункциональным сшивающим агентом, причем указанный кристалл сшитого белка обладает улучшенным рН-профилем активности по сравнению с растворимой несцштой формой белка, из которой образован указанный кристалл.28. Кристалл по п. 27, отличающийся тем, что он обладает большей стабильностью при щелочном рН, чем растворимая несшитая форма белка, из которой образован указанный кристалл.29. Кристалл по п. 27 или 28, отличающийся тем, что в качестве белка использован фермент, выбранный из группы, состоящей из термолизина, эластазы, аспарагтшазы, лизоцима, уреазы, эстеразы и липазы.30. Кристалл белка, сшитого многофункциональным сшивающим агентом, причем указанный кристалл сшитого белка обладает большей стабильностью при высокой температуре по сравнению с растворшиой несшитой формой белка, из которой образован указанный кристалл.31. Кристалл по п. 30, отличающийся тем, что в качестве белка использован фермент.32. Кристалл по п. 31, отличающийся тем, что в качестве фермента использована гидролаза, выбранная из группы, состоящей из термолизина, эластазы, аспарагтшазы, лизоцима, уреазы, эстеразы и липазы.33. Кристалл по п. 30, отличающийся тем, что указанная высокая температура составляет приблизителъно по меньшей мере 55 С.34. Кристалл по п. 30, отличающийся тем, что указанная высокая температура составляет приблизителъно по меньшей мере 65 С.35. Устройство, содержащее кристалл белка, сшитого многофункциональным сшивающим агентом, отличающееся тем, что содержит кристалл сшитого фермента по п. 2 или 3 и средство для удерживания указанного кристалла сшитого фермента, причем удерживающее средство состоит из материала, который ДОПУСКПВТ КОНТПКТ МВЭКДУ УКЦЗШППЫМ КРИСТПЛЛОМ СШИТОГО фермента С ЭКИДКОСТЫО, содержащей СУбСТрПТ, ПЕ который действует фермент.36. Устройство по п. 35, отличающееся тем, что в случае его использования в качестве биосенсора для детектирования интересующего аналита в жидкости указанный фермент обладает действием на интересующий аналит или реагент в реакции, в которой принимает участие интересующий аналит, а указанный субстрат является интересующши аналитом или реагентом в реакции, в которой приншиает участие интересующий аналит.37. Устройство по п. 35, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит средство для определения активности действия указашюго фермента на данный аналит или реагент.38. Устройство по п. 35, отличающееся тем, что оно содержит кристалл сшитой люциферазы.39. Устройство по п. 35, отличающееся тем, что в случае его использования в качестве экстракорпорального устройства для изменения компонента ЖИДКОСТИ указанный субстрат является этим компонентом или реагентом в реакции, в которой участвует данной компонент.40. Способ получения аспартама, предусматривающий стадии объединения двух соединений, из которых первое имеет формулу 2-(Ь-А 5 р), где 2 - бензилоксикарбонильная группа, а второе соедтшение имеет формулу (Ь-Р 11 е)-ОМе с термолизином в иммобилизированной форме, поддержания полученной комбинации в условиях, подходящих для конденсации этих двух соедштений под действием указанного термолизина, с образованием частично зацшщенного соединения формулы 2-(Ь-А 5 р)-(1-Р 11 е)ОМе, и удаления бензилоксикарбонильной группы у образовавшегося частично защищенного соединения с получением при этом аспартама, отличающийся тем, что в качестве термолизина в иммобилизироваъшой форме используют криСТЭЛЛ СШИТОГО ТСрМОЛИЗИНЯ ПО П.частности к ферментативной иммобилизации. Известно использование ферментов в качестве промышленныхкатализаторов для широкомасштабногом лабораторного производства чистых испециальных коммерческих химикатов А 1 а также для производства пищевыхвеществ 2, и также в качестве средств для синтеза органических соединений З окружающей среды снятием бремени широкомасштабного производства неиспользуемых иным образом промежуточных химикалиев, таких как нитрилгидратаза в производстве акриламида 6 д уФерменты испопьзукэт также в качестве биодатчиков для обнаружения различных веществ, представляющих клинический, промышленный и проч. интерес 7. В области медицины ферменты могут использоваться дляэкстракорпорапьной терапии, такой как гемодиализ и гемофильтрация, приКОТОрЫХ ФЗРМЭНТЫ селективно удаляют ИЗ крови выделяемые И токсическиевещества 8. В данных областях ферменты используют потому, что ониФерментативное производство может существенно уменьшить загрязнениеэффективно работают в качестве катализаторов многих типов реакций приумеренных температурах, при субстратной специфичности и стереоселекгивности. Тем не менее, имеются проблемы, связанные сИСПОЛЬЗОБЭНИЭМ растворимых ферментных катализаторов, которые ограничиваютих применение в промышленных и лабораторных химических процессах 9.Ферменты являются дорогими и относительно нестабильными, по сравнению с большинством промышленных и лабораторных катализаторов, даже когда их используют в водной среде, в которой ферменты обычно работают. В обычной практике многие из наиболее экономически важных химических реакций несовместимы с водной средой, в которой, например, субстраты и продукты часто нерастворимы или нестабильны и в которой может оказывать существенное влияние гидролиз. Кроме того, выделение растворимого ферментного катализатора из продукта и непрореагировавшего субстрата в сырье, часто требует применения сложной и дорогой технологии сепарации. Наконец,ферменты трудно сохранять таким образом, чтобы поддерживать их активность иФУНКЦИОНЭПЬНУЮ ЦЭПОСГНОСТЬ В течение коммерчески ПЗЗУМНЫХ периодоввремени (от месяцев до нескольких лет) без того, чтобы прибегать к ихзамораживанию (от 4 С до -8 ОС и до температур жидкого азота), или трудно поддерживать в водных растворителях подходящей ионной силы, рН и т.д.Методы ферментативной иммобилизации во многих случаях обходят эти проблемы. Иммобилизация может улучшить стабильность ферментных катализаторов и защитить их функциональную целостность в грубой среде растворителя и высоких температурах, характерных для промышленных и лабораторных химических процессов 10. н .Процессы непрерывного потока могут осуществляться с иммобилизованными ферментными частицами в колоннах, например, гдерастворимое сырье проходит через эти частицы и постепенно превращается вотносится к переведению ферментного катализатора в нерастворимое состояниепосредством его присоединения , ИЛИ ИНКЭПСУПЯЦИЭЙ, ИЛИ ЗГРЭГЗЦИЭЙ Вмакроскопические (10 мм) частицы. В литературе имеется. несколько полезных обзоров методов ферментнойиммобилизации 11-12, где описывается пять основных подходов к