Среда для оплодотворения ооцитов крупного рогатого скота

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДА ДЛЯ ОПЛОДОТВОРЕНИЯ ООЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(71) Заявитель Республиканское унитарное предприятие Институт животноводства Национальной академии наук Беларуси(72) Автор Голубец Леонид Викторович(73) Патентообладатель Республиканское унитарное предприятие Институт животноводства Национальной академии наук Беларуси(57) Среда для оплодотворения ооцитов крупного рогатого скота, содержащая хлорид кальция, пируват натрия, хлорид натрия, гидрокарбонат натрия, фосфат натрия, хлорид калия, феноловый красный, антибиотик, гепарин, компоненты белков крови, гормональные стимуляторы и воду деионизированную, отличающаяся тем, что в качестве компонентов белков крови содержит бычий сывороточный альбумин, в качестве гормональных стимуляторов - эпинифрин и гипатаурин, в качестве антибиотика - гентамицин и дополнительно содержит хлорид магния и лактат натрия при следующем соотношении компонентов, мас.хлорид кальция 0,029-0,030 пируват натрия 0,10-0,12 хлорид натрия 6,60-6,70 гидрокарбонат натрия 2,00-2,20 фосфат натрия 0,034-0,036 хлорид калия 0,23-0,25 хлорид магния 0,50-0,51 лактат натрия 1,97-2,00 феноловый красный 0,010-0,011 гентамицин 0,050-0,051 гепарин 0,030-0,031 бычий сывороточный альбумин 6,00-6,05 эпинифрин 0,0227-0,0229 гипатаурин 1,035-1,037 вода деионизированная остальное.(56) Методические рекомендации по культивированию ооцитов и фолликулов коров. - Ленинград, 1989. - С. 30-31. ЕР 0 872180 А 1, 1996.97/08946 1. 6146 1 Изобретение относится к животноводству, в частности к биотехнологии воспроизводства крупного рогатого скота. Известна среда для оплодотворения ооцитов крупного рогатого скота вне организма ТС-199 отечественного производства, включающая питательную исходную среду с добавлением глютамина в концентрации 0,15 мг/мл, лактата кальция 0,6 мг/мл, пирувата натрия 0,2 мг/мл, антибиотиков, эстрадиола, инсулина и сыворотки крупного рогатого скота в соотношении к исходной среде ТС-199, равном 14. (Методические рекомендации по культивированию ооцитов и фолликулов коров. - Ленинград, 1989. - С. 30-31.) Недостатком данной среды является низкая оплодотворяемость жизнеспособных ооцитов вне организма животного. Задача изобретения - повышение оплодотворяемости ооцитов крупного рогатого скота вне организма. Сущность изобретения. Среда для оплодотворения ооцитов крупного рогатого скота,содержащая хлорид кальция, пируват натрия, хлорид натрия, гидрокарбонат натрия, фосфат натрия, хлорид калия, феноловый красный, антибиотик, гепарин, компоненты белков крови, гормональные стимуляторы и воду деионизированную. При этом в качестве компонентов белков крови содержит бычий сывороточный альбумин, в качестве гормональных стимуляторов - эпинифрин и гипатаурин, в качестве антибиотика - гентамицин и дополнительно содержит хлорид магния и лактат натрия при следующем соотношении компонентов, мас.хлорид кальция 0,029-0,030 пируват натрия 0,10-0,12 хлорид натрия 6,60-6,70 гидрокарбонат натрия 2,00-2,20 фосфат натрия 0,034-0,036 хлорид калия 0,23-0,25 хлорид магния 0,50-0,51 лактат натрия 1,97-2,00 феноловый красный 0,010-0,011 гентамицин 0,050-0,051 гепарин 0,030-0,031 бычий сывороточный альбумин 6,00-6,05 эпинифрин 0,0227-0,0229 гипатаурин 1,035-1,037 вода деионизированная остальное. Пример конкретного выполнения. Среду готовят в стерильном боксе. В стерильно чистые колбу или химический стакан емкостью 1 л переносят сухие навески указанных ингредиентов в любой последовательности, доводят объем емкости до 1 л деионизированной водой комнатной температуры при постоянном перемешивании содержимого стерильной стеклянной палочкой. Раствор стерилизуют фильтрацией через фильтр с диаметром пор равных 0,22 мк. Фильтрат хранят в темном холодильнике при температуре 4-9 С до использования, но не более 1-го месяца. Перед использованием среду ставят в инкубатор с газовой средой, содержащей 5 СО 2 для стабилизации ее рН в пределах 7,2-7,4, после чего среда пригодна к оплодотворению ооцитов крупного рогатого скота по общепринятой методике. Было опробировано два варианта состава среды. В первом варианте среду готовили вышеприведенным способом из ингредиентов, мас.хлорид натрия - 6,70 гидрокарбонат натрия - 2,2 фосфат натрия - 0,03 хлорид калия - 0,25 хлорид кальция - 0,03 хлорид магния - 0,51 феноловый красный - 0,11 гентамицин - 0,051 лактат натрия - 2,00 пируват натрия - 0,12 гепарин - 0,031 бычий сывороточный альбумин - 6,05 эпинифрин 0,0229 гипатаурин - 1,036 и вода деионизированная - остальное. 2 6146 1 Во втором варианте среду готовили аналогичным способом из тех же компонентов при следующем соотношении, мас.хлорид натрия - 6,66 гидрокарбонат натрия - 2,1 фосфат натрия - 0,036 хлорид калия - 0,24 хлорид кальция - 0,0295 хлорид магния - 0,50 феноловый красный - 0,01 гентамицин - 0,05 лактат натрия - 1,98 пируват натрия - 0,11 гепарин - 0,03 бычий сывороточный альбумин - 6,00 эпинифрин - 0,0228 гипатаурин 1,036 и вода деионизированная - остальное. Для установления эффективности различных вариантов сред и выбора оптимального соотношения ее компонентов лабораторные исследования были проведены на 1416 полноценных ооцитах коров, которые были оплодотворены в данной среде (в двух ее вариантах) спермой проверенных по потомству быков-производителей с последующим контролем эффективности оплодотворения ооцитов. Результаты опыта приведены в таблице. Среда Вариант 1 Вариант 2 ТС-199 Получено дробящихся Получено морул зародышей Таким образом, использование среды для оплодотворения ооцитов крупного рогатого скота при соотношении ингредиентов второго варианта более эффективно по сравнению с первым вариантом среды и базовой среды ТС-199, широко применяемой в биотехнологии оплодотворения ооцитов. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.