Способ диагностики доброкачественной гипербилирубинемии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ГИПЕРБИЛИРУБИНЕМИИ(71) Заявитель Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии(73) Патентообладатель Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии(57) Способ диагностики доброкачественной гипербилирубинемии, включающий спектрофотометрическое определение содержания фракций билирубина в сыворотке крови и желчи, отличающийся тем, что предварительно пациенту проводят нагрузку препаратом никотиновой кислоты, после чего в сыворотке крови пациента определяют содержание общего билирубина, его неконъюгированной и конъюгированной фракций, а в порции С желчи - содержание ди- и моноглюкуронидов билирубина, и затем рассчитывают показатель,характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, по формуле К где К - показатель, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, в частности,активность микросомального фермента уридин-дифосфат-глюкуронил-трансферазы (УДФ-ГТ),ОБк - содержание общего билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л НБк - содержание неконъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л КБк - содержание конъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л ДГБж - содержание диглюкуронида билирубина в порции С желчи, мкмоль/л МГБж - содержание моноглюкуронида билирубина в порции С желчи, мкмоль/л, и при значении К меньшем или равном 3,6 диагностируют нормальную глюкуронилтрансферазную активность печени, а при значении К большем 3,6 диагностируют ее нарушение, обусловленное дефектом УДФ-ГТ-азы, характерное для доброкачественной гипербилирубинемии.(56) Чеховская Л.Г., Циркина А.С.// Лабораторное дело. - 1980. -3. - С. 140.4412005 , 1983. Внутренние болезни. Кн. 1. / Под ред. Е. Браунвальда с соавт. М. Медицина, 1993. - С. 450-453.95/00843 1. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики. Известен способ определения содержания неконъюгированной и конъюгированной (в виде моно- и диглюкуронида) фракций билирубина в сыворотке крови методом спектрофотометрического анализа по Эберляйну 1, который дает возможность количественно оценивать содержание трех фракций билирубина в сыворотке крови. Однако указанный способ обладает существенным недостатком после прибавления к сыворотке крови реактивов (фосфатного буфера и бутанола) и центрифугирования в нижнем слое второй пробирки, содержащем диглюкуронид билирубина, появляется муть, которая завышает результаты измере 4469 1 ний, вследствие чего понижается достоверность определения содержания общего билирубина в сыворотке крови. Указанный способ является аналогом по отношению к заявляемому. Известен модифицированный метод Эберляйна 2, при котором возможность завышения уровня диглюкуронидов сыворотки крови устраняют путем измерения содержания общего билирубина сыворотки до добавления бутанола, с последующим определением уровня диглюкуронида по формуле ДГБОБ(НБМГБ), где ДГБ - содержание диглюкуронида билирубина, ОБ - содержание общего билирубина, НБ содержание неконъюгированного билирубина и МГБ - содержание моноглюкуронида билирубина в сыворотке крови. Однако в указанном способе не учитывается содержание ди- и моноглюкуронидов билирубина в желчи, что не позволяет наиболее полно оценивать глюкуронилтрансферазную активность печени и, как следствие, диагностировать доброкачественную гипербилирубинемию (болезнь Жильбера). Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Задачей заявляемого изобретения является повышение точности диагностики доброкачественной гипербилирубинемии в случаях, когда на момент обследования гипербилирубинемия у пациента отсутствует или отмечается незначительное повышение уровня билирубина в сыворотке крови. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ диагностики доброкачественной гипербилирубинемии, включающий спектрофотометрическое определение содержания фракций билирубина в сыворотке крови и желчи, отличающийся тем,что предварительно пациенту проводят нагрузку препаратом никотиновой кислоты (по 0,45 г/сут ксантинола никотинатав течение 3-х дней 0,3 г ксантинола никотинатаза 3 часа до начала проведения зондирования или по 0,45 г/сут ксантинола никотинатав течение 3-х днейвнутривенное введение 40 мг никотиновой кислоты за 1 ч до начала проведения зондирования), после чего в сыворотке крови пациента определяют содержание общего билирубина (ОБк), его неконъюгированной (НБк) и конъюгированной (КБк) фракций, в порции С желчи - содержание ди- (ДГБж) и моноглюкуронидов (МГБж) билирубина, и затем рассчитывают показатель, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, по формуле где К - показатель, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, в частности,активность микросомального фермента уридин-дифосфат-глюкуронил-трансферазы (УДФ-ГТ),ОБк - содержание общего билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л НБк - содержание неконъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л КБк - содержание конъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л ДГБж - содержание диглюкуронида билирубина в порции С желчи, мкмоль/л МГБж - содержание моноглюкуронида билирубина в порции С желчи, мкмоль/л,и при значении К меньшем или равном 3,6 диагностируют нормальную глюкуронилтрансферазную активность печени, а при значении К большем 3,6 диагностируют ее нарушение, обусловленное дефектом УДФ-ГТ, характерное для доброкачественной гипербилирубинемии. Пример выполнения 1. Пациент Т., 46 лет, поступил в терапевтическое отделение клиники НИКИ РМиЭ с жалобами на периодическое желтушное окрашивание кожи и склер. Из анамнеза в течение 4-х лет в биохимическом анализе крови отмечается периодическое повышение уровня билирубина (до 75 мкмоль/л) за счет неконъюгированной фракции. На момент обследования у больного было выявлено легкое повышение уровня сывороточного билирубина - 24,6 мкмоль/л, остальные биохимические показатели находились в пределах нормы. Пациенту был выставлен предварительный диагноз доброкачественная гипербилирубинемия (болезнь Жильбера). С целью уточнения диагноза больному после назначения ксантинола никотината по 0,45 г/сутв течение 3-х дней 0,3 г ксантинола никотинатаза 3 часа до начала проведения исследования было проведено дуоденальное зондирование одноканальным зондом с получением порции С желчи (печеночная желчь). Полученную желчь разводят дистиллированной водой (в зависимости от концентрированности желчи) до интенсивности желтой окраски, характерной для сыворотки крови, после чего желчь исследуют на спектрофотометре КФК-З по модифицированной методике Эберляйна, описанной для сыворотки крови 2. В желчи определено отношение ДГБж МГБж 32,82 29,841,1. Непосредственно после получения порции С желчи у пациента берут кровь из локтевой вены, центрифугируют в течение 10 мин при 2500 оборотах/мин, затем полученную сыворотку исследуют на спектрофотометре по модифицированной методике Эберляйна 2. Получены следующие значения по фракциям общий билирубин - 60,56 мкмоль/л, неконъюгированный билирубин - 46,8 мкмоль/л, конъюгированный билирубин - 13,76 мкмоль/л. Затем определяют отношение(ОБкНБк) КБк(60,5646,8) 13,767,8. Показатель К вычисляют по формуле К(ОБкНБк)КБк/(ДГБжМГБж)7,8 1,17,09 (т.е. К больше 3,6). Заключение Значение показателя К, равное 7,09, говорит о наличии у пациента нарушения глюкуронилтрансферазной активности печени, характерной для доброкачественной гипербилирубинемии. 2 4469 1 Пример выполнения 2. Пациент Л., 50 лет, поступил в терапевтическое отделение клиники НИКИ РМиЭ с жалобами на периодические боли в правом подреберье. При объективном осмотре склеры субъиктеричны, печень 2 см по правой срединно-ключичной линии, пальпация в области правого подреберья умеренно болезненна. В анамнезе в биохимическом анализе крови отмечалась гипербилирубинемия (общий билирубин - 43,7 мкмоль/л,неконъюгированный -23,9 мкмоль/л, конъюгированный - 19,8 мкмоль/л), сопровождающаяся повышением уровня трансаминаз. На момент обследования в крови обнаружено нормальное содержание фракций билирубина. С целью уточнения характера патологии печени больному после назначения ксантинола никотината по 0,45 г/сутв течение 3-х дней 0,3 г ксантинола никотинатаза 3 часа до начала проведения исследования было проведено дуоденальное зондирование одноканальным зондом с получением порции С желчи. Полученную желчь разводят дистиллированной водой до интенсивности желтой окраски, характерной для сыворотки крови, и проводят спектрофотометрический анализ на спектрофотометре КФК-3, как указано в примере 1. В желчи определяют отношение ДГБж МГБж 31,8418,191,75. Непосредственно после получения порции С желчи у пациента берут кровь из локтевой вены, сыворотку которой исследуют на спектрофотометре, как в примере 1. Получены следующие результаты по фракциям общий билирубин 31,42 мкмоль/л, неконъюгированный билирубин - 18,75 мкмоль/л, конъюгированный билирубин - 12,67 мкмоль/л, откуда по формуле получаем (ОБкНБк)КБк(31,4218,75)12,673,96. Тогда показатель К(ОБкНБк)КБк/(ДГБжМГБж)3,961,752,26 (т.е. К меньше 3,6). Заключение Значение показателя К, равное 2,26, говорит о нормальной глюкуронилтрансферазной активности печени. Таким образом, по сравнению с прототипом заявленный способ позволяет точнее диагностировать доброкачественную гипербилирубинемию (болезнь Жильбера) в случаях, когда на момент обследования гипербилирубинемия у пациента отсутствует или отмечается незначительное повышение уровня билирубина в сыворотке крови. Преимущества предложенного способа способ позволяет определять соотношение моно- и диглюкуронидов в желчи, что позволяет более полно,чем по изолированному анализу крови, характеризовать эффективность процессов конъюгации билирубина в печени методика не требует дорогостоящих реактивов и оборудования при дуоденальном зондировании используется простой одноканальный зонд, при этом возможная примесь желудочного сока не влияет на результаты измерения, так как в вычислениях используются не абсолютные значение, а соотношение двух величин, и коэффициенты разведения взаимно сокращаются предложенная методика особенно удобна в тех случаях, когда диагностика доброкачественной гипербилирубинемии затруднена из-за отсутствия на момент обследования у пациента гипербилирубинемии. Источники информации 1..-// . - 1060. - . 25. - Р. 878-885 (аналог). 2. Чеховская Л.Г., Циркина А. С. Колориметрическое определение фракций билирубина в сыворотке крови // Лабораторное дело. - 1980. -3. - С. 140-142 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 3