Способ диагностики доброкачественной гипербилирубинемии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ГИПЕРБИЛИРУБИНЕМИИ(71) Заявитель Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии(73) Патентообладатель Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии(57) Способ диагностики доброкачественной гипербилирубинемии путем спектрофотометрического определения содержания фракций билирубина в сыворотке крови и желчи, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют содержание неконъюгированной (НБк) и конъюгированной (КБк) фракций билирубина, в порции С желчи - содержание диглюкуронидов (ДГБж) и моноглюкуронидов (МГБж) билирубина, после чего рассчитывают показатель К, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, по формуле,(ДГБж )(МГБж ) где К - показатель, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, и, в частности, активность микросомального фермента уридин-дифосфат-глюкуронил-трансферазы (УДФ-ГТ) НБк - содержание неконъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л КБк - содержание конъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, мкмоль/л ДГБж - содержание диглюкуронида билирубина в порции С желчи, мкмоль/л МГБж - содержание моноглюкуронида билирубина в порции С желчи, мкмоль/л,и при значении К меньшем или равном 2,5 диагностируют нормальную глюкуронилтрансферазную активность печени, а при значении К большем 2,5 диагностируют нарушение, обусловленное дефектом УДФ-ГТазы, характерное для доброкачественной гипербилирубинемии. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики. Известен способ определения содержания неконъюгированной и конъюгированной (в виде моно- и диглюкуронида) фракций билирубина в сыворотке крови методом спектрофотометрического анализа по Эберляйну 1, который дает возможность количественно оценивать содержание трех фракций билирубина в сыворотке крови. Однако указанный способ обладает существенным недостатком после прибавления к сыворотке крови реактивов (фосфатного буфера и бутанола) и центрифугирования в нижнем слое второй пробирки, содержащем диглюкуронид билирубина, появляется муть, которая завышает результаты измере 4461 1 ний, вследствие чего понижается достоверность определения содержания общего билирубина в сыворотке крови. Указанный способ является аналогом по отношению к заявляемому. Известен модифицированный метод Эберляйна 2, при котором возможность завышения уровня диглюкуронидов сыворотки крови устраняют путем измерения содержания общего билирубина сыворотки до добавления бутанола, с последующим определением уровня диглюкуронида по формуле ДГБОБ (НБМГБ), где ДГБ - содержание диглюкуронида билирубина, ОБ - содержание общего билирубина, НБ - содержание неконъюгированного билирубина и МГБ - содержание моноглюкуронида билирубина в сыворотке крови. Однако в указанном способе не учитывается содержание ди- и моноглюкуронидов билирубина в желчи, что не позволяет наиболее полно оценивать глюкуронилтрансферазную активность печени и, как следствие, диагностировать доброкачественную гипербилирубинемию (болезнь Жильбера). Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Задачей заявляемого изобретения является повышение точности диагностики доброкачественной гипербилирубинемии. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ диагностики доброкачественной гипербилирубинемии путем спектрофотометрического анализа содержания фракций билирубина в сыворотке крови и желчи, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют содержание неконъюгированной (НБк) и конъюгированной (КБк) фракций билирубина,в порции С желчи - содержание ди- (ДГБж) и моноглюкуронидов (МГБж) билирубина, после чего рассчитывают показатель К, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, по формуле,(ДГБж )(МГБж ) где К - показатель, характеризующий эффективность процесса конъюгации билирубина в печени, и, в частности,активность микросомального фермента уридиндифосфат-глюкуронилтрансферазы (УДФ-ГТ),НБк - содержание неконъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, в мкмоль/л,КБк - содержание конъюгированной фракции билирубина в сыворотке крови, в мкмоль/л,ДГБж - содержание диглюкуронида билирубина в порции С желчи, в мкмоль/л,МГБж - содержание моноглюкуронида билирубина в порции С желчи, в мкмоль/л,и при получении значения К меньшем или равном 2,5 диагностируют нормальную глюкуронилтрансферазную активность печени, а при значении К большем 2,5 диагностируют нарушение, обусловленное дефектом УДФ-ГТ, характерное для доброкачественной гипербилирубинемии. Пример выполнения 1. Пациент В., 28 лет, поступил в терапевтическое отделение клиники НИКИ РМиЭ с жалобами на желтушное окрашивание кожи и склер, появившееся около 1 месяца назад. В биохимическом анализе крови было выявлено повышение уровня общего билирубина до 40,9 мкмоль/л (неконъюгированная фракция - 33,3 мкмоль/л), остальные показателя находились в пределах нормы. Пациенту был выставлен предварительный диагноз доброкачественная гипербилирубинемия (болезнь Жильбера). С целью уточнения диагноза было проведено дуоденальное зондирование одноканальным зондом с получением порции С желчи (печеночная желчь). Полученную желчь разводят дистиллированной водой (в зависимости от концентрированности желчи) до интенсивности желтой окраски, характерной для сыворотки крови, после чего желчь исследуют на спектрофотометре КФК-3 по модифицированной методике Эберляйна, описанной для сыворотки крови 2. В желчи определено отношение ДГБжМГБж 16,2117,550,92. Непосредственно после получения порции С желчи у пациента берут кровь из локтевой вены, центрифугируют в течение 10 мин при 2500 оборотах/мин, затем полученную сыворотку исследуют на спектрофотометре по модифицированной методике Эберляйна 2. Получены следующие значения по фракциям общий билирубин - 57,14 мкмоль/л, неконъюгированный билирубин - 49,23 мкмоль/л, конъюгированный билирубин - 7,91 мкмоль/л. Затем определяют отношение НБкКБк 49,237,916,22. Показатель К вычисляют по формуле К(НБкКБк) / (ДГБжМГБж)6,220,926,76 (т.е. К больше 2,5). Заключение значение показателя К, равное 6,76, говорит о наличии у пациента нарушения глюкуронилтрансферазной активности печени, характерной для доброкачественной гипербилирубинемии. Пример выполнения 2. Пациент ., 60 лет, поступил в терапевтическое отделение клиники НИКИ РМиЭ. При объективном осмотре склеры субъиктеричны, печень 1 см по правой срединно-ключичной линии. С целью уточнения характера патологии печени больному было проведено дуоденальное зондирование одноканальным зондом с получением порции С желчи. Полученную желчь разводят дистиллированной водой до интенсивности желтой окраски, характерной для сыворотки крови, и проводят спектрофотометрический анализ на спектрофотометре КФК-3, как указано в примере 1. В желчи определяют отношение ДГБжМГБж 46,1518,032,56. Непосредственно после получения порции С желчи у пациента берут кровь из локтевой вены, сыворотку которой исследуют на спектрофотометре, как в примере 1. Получены следующие результаты по фракциям общий билирубин - 13,17 мкмоль/л, неконъюгированный билирубин - 9,46 мкмоль/л, конъюгированный билирубин - 3,71 мкмоль/л, откуда по формуле получаем 4461 1 НБкКБк 9,463,712,55. Тогда показатель К(НБкКБк) / (ДГБжМГБж)2,552,560,99 (т.е. К меньше 2,5). Заключение значение показателя К, равное 0,99, говорит о нормальной глюкуронилтрансферазной активности печени. Таким образом, по сравнению с прототипом заявленный способ позволяет точнее диагностировать доброкачественную гипербилирубинемию (болезнь Жильбера) на фоне манифестации заболевания, проявляющейся неконъюгированной гипербилирубинемией. Преимущества предложенного способа способ позволяет определять соотношение моно- и диглюкуронидов в желчи, что позволяет более полно,чем по изолированному анализу крови, характеризовать эффективность процессов конъюгации билирубина в печени методика не требует дорогостоящих реактивов и оборудования при дуоденальном зондировании используется простой одноканальный зонд, при этом возможная примесь желудочного сока не влияет на результаты измерения, так как в вычислениях используются не абсолютные значение, а соотношение двух величин, и коэффициенты разведения взаимно сокращаются предложенная методика особенно удобна в тех случаях, когда диагностика доброкачественной гипербилирубинемии затруднена из-за нецелесообразности проведения проб с нагрузкой никотиновой кислотой при высоком уровне гипербилирубинемии (60-95 мкмоль/л и более). Источники информации 1..-// , 1060. - . 25. - . 878-885 (аналог). 2. Чеховская Л.Г., Циркина А.С. Колориметрическое определение фракций билирубина в сыворотке крови // Лабораторное дело, 1980. -3. - С. 140-142 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.