Способ выявления риска развития сахарного диабета I типа

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТАТИПА(71) Заявитель Учреждение образования Международный государственный экологический университет имени А.Д.Сахарова(72) Авторы Коктыш Ирина Владимировна Зафранская Марина Михайловна Бойко Юлия Николаевна(73) Патентообладатель Учреждение образования Международный государственный экологический университет имени А.Д.Сахарова(57) Способ выявления риска развития сахарного диабетатипа, отличающийся тем, что из периферической крови пациента выделяют мононуклеары, регистрируют с помощью радиометрического пролиферативного теста с тимидином, меченным тритием, пролиферацию мононуклеаров в питательной среде в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета, определяют коэффициент пролиферациимононуклеаров по формуле 1/2,где 1 - излучение трития в пролиферирующих в присутствии глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета мононуклеарах, имп/мин 2 - излучение трития в пролиферирующих в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета мононуклеарах, имп/мин,и выявляют риск развития сахарного диабетатипа при полученииболее 1,57. Изобретение относится к медицине, к разделам эндокринологии, педиатрии, аутоиммунной патологии и клеточной биологии. Сахарный диабеттипа является результатом длительного деструктивного аутоиммунного процесса в -клетках поджелудочной железы, и к моменту манифестации болезни отмечается гибель 85-90 клеток. Использующиеся диагностические технологии основаны на выявлении гипергликемии на этой стадии, что диктует необходимость пожизненной заместительной инсулинотерапии и исключает профилактику развития заболевания. В настоящее время в донозологической диагностике сахарного диабетатипа не используются возможности лабораторного исследования функционального состояния лимфоцитов лиц с предрасположенностью к заболеванию. Задачей заявляемого способа является раннее выявление риска развития заболевания с целью назначения своевременного патогенетического лечения. 16790 1 2013.02.28 Поставленная задача решается следующим образом. Предложен способ выявления групп риска развития заболевания сахарным диабетомтипа, отличающийся тем, что из периферической крови выделяют мононуклеары, регистрируют с помощью радиометрического пролиферативного теста с тимидином, меченным тритием, пролиферацию мононуклеаров в питательной среде в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета, определяют коэффициент пролиферациимононуклеаров по формуле 1/2,где 1 - излучение трития в пролиферирующих в присутствии глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета мононуклеарах, имп/мин 2 - излучение трития в пролиферирующих в присутствии глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета мононуклеарах, имп/мин,и выявляют риск развития сахарного диабетатипа при полученииболее 1,57. Пример 1. Сиблинг Л., 2 года, чей пробанд болеет сахарным диабетомтипа, поступил на консультативный прием к врачу-эндокринологу с целью прогнозирования возможного развития сахарного диабетатипа. Признаков иммунообусловленной патологии не было установлено. Глюкозотолерантный тест был отрицательным. У больного был осуществлен забор периферической венозной крови, из которой методом центрифугирования на градиенте плотности в течение 30 мин и последующим отмыванием физиологическим раствором были выделены мононуклеары периферической крови (МПК). Суспензия МПК была разделена на 2 части и культивировалась в питательной среде первая часть, в присутствии аутоантигена (глютаматдекарбоксилазы) и интерлейкина-1 бета, а вторая часть - в отсутствие данных стимуляторов. Клетки засевались в 96-луночный культуральный планшет в концентрации 2105 клеток/лунку и культивировались в полной культуральной среде (-1640 с 25 мМ ,2 мМ -глютамина, 25 мкг/мл гентамицина, 10 инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки) в течение 6 суток в присутствии 5 мкг/мл глютаматдекарбоксилазы и 100 МЕ/мл интерлейкина-1-бета в увлажненной атмосфере с 52 при 37 С. Регистрация пролиферации лимфоцитов в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета осуществлялась на 6-й день культивирования с помощью радиометрического пролиферативного теста. Для этого в течение последних 6 часов культивирования интактные МПК и МПК, стимулированные глютаматдекарбоксилазой вместе с интерлейкином-1-бета, культивируют в присутствии тимидина, меченного тритием (37 кБк/лунку), затем клетки собирают на фильтры, регистрируют -излучение образцов. Результаты представлены в табл. 1. Таблица 1 Пролиферативная активность МПК в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета у сиблинга Л. Активность -излучения в культуре моно- Активность -излучения мононуклеаров периферической крови, инду- нуклеаров периферической кроцированная глютаматдекарбоксилазой в ви, культивируемых в отсутствие присутствии интерлейкина-1-бета (1),стимуляторов (2), имп/мин имп/мин Сиблинг Л. 2149,2 881,3 Согласно полученным данным был подсчитан коэффициент пролиферации по формуле 1/22149,2/881,32,44. Таким образом, коэффициент пролиферациисоставил более 1,57, что позволяет прогнозировать у данного сиблинга возможное развитие сахарного диабетатипа. В связи с 2 16790 1 2013.02.28 этим рекомендовано проведение профилактических мероприятий, сопровождаемых мониторингом функционального состояния лимфоцитов. Пример 2. Пациент Д., 14 лет, с аутоиммунным тироидитом, поступил на консультативный прием к врачу-эндокринологу с целью прогнозирования возможного развития сахарного диабетатипа. Глюкозотолернатный тест был отрицательным. У больного был осуществлен забор периферической венозной крови, из которой методом центрифугирования на градиенте плотности в течение 30 мин и последующим отмыванием физиологическим раствором были выделены мононуклеары периферической крови (МПК). Суспензия МПК была разделена на 2 части и культивировалась в питательной среде первая часть - в присутствии аутоантигена (глютаматдекарбоксилазы) и интерлейкина-1 бета, а вторая часть - в отсутствие данных стимуляторов. Клетки засевались в 96-луночный культуральный планшет в концентрации 2105 клеток/лунку и культивировались в полной культуральной среде (-1640 с 25 мМ ,2 мМ -глютамина, 25 мкг/мл гентамицина, 10 инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки) в течение 6 суток в присутствии 5 мкг/мл глютаматдекарбоксилазы и 100 МЕ/мл интерлейкина-1-бета в увлажненной атмосфере с 52 при 37 С. Регистрация пролиферации лимфоцитов в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета осуществлялась на 6-й день культивирования с помощью радиометрического пролиферативного теста. Для этого в течение последних 6 часов культивирования интактные МПК и МПК, стимулированные глютаматдекарбоксилазой вместе с интерлейкином-1-бета, культивируют в присутствии тимидина, меченного тритием (37 кБк/лунку), затем клетки собирают на фильтры, регистрируют -излучение образцов. Результаты представлены в табл. 2. Таблица 2 Пролиферативная активность МПК в присутствии и в отсутствие глютаматдекарбоксилазы и интерлейкина-1-бета у пациента Д. Активность -излучения в культуре моно- Активность -излучения мононуклеаров периферической крови, инду- нуклеаров периферической кроцированная глютаматдекарбоксилазой в ви, культивируемых в отсутствие присутствии интерлейкина-1-бета (2),стимуляторов (1), имп/мин имп/мин Пациент Д. 1341,1 937,3 Согласно полученным данным был подсчитан коэффициент пролиферации по формуле 1/21341,1/937,31,43. Таким образом, коэффициент пролиферациисоставил менее 1,57, что позволяет установить отсутствие у данного пациента риска развития сахарного диабета 1 типа. Выводы. При определении коэффициента пролиферацииболее 1,57 можно прогнозировать возможное развитие сахарного диабетатипа с целью проведения профилактических мероприятий и предотвращения развития заболевания. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3