Способ ингибирования роста патогенного штамма Pseudomonas aeruginosa при его культивировании

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ РОСТА ПАТОГЕННОГО ШТАММАПРИ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИИ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Никандров Виталий Николаевич Пыжова Нелли Семеновна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(57) Способ ингибирования роста патогенного штаммапри его культивировании, включающий добавление в питательную среду ингибитора, отличающийся тем, что в качестве ингибитора добавляют С 1617420,5 2 до концентрации 10-3-10-2 , при этом культивирование осуществляют при 37 С в течение 24 ч. Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии, в частности к ингибированию роста культур госпитальных штаммов. Известен способ ингибирования размножения клеток патогенных псевдомонад. Он заключается в том, что при добавлении в среду культивирования антибиотиков наблюдается ингибирование размножения клеток микроорганизма 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является ингибирование размножения клеток патогенных псевдомонад при добавлении в питательную среду вещества химической природы с ингибиторными свойствами. Однако известный способ ингибирования роста культуры патогенных псевдомонад оказывается неэффективным вследствие того, что штаммыобычно устойчивы ко многим потенциально эффективным антибиотикам. Большинство госпитальных штаммовполирезистентны 2. Уже не являются редкостью и панрезистентные штаммы синегнойной палочки - описаны вспышки нозокомиальных инфекций, вызванных такими штаммами 3, 4. Задачей заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего эффективно ингибировать размножение клеток патогенных штаммов псевдомонад веществом,резистентность к которому у микроорганизма отсутствует. 14609 1 2011.08.30 Поставленная задача достигается тем, что предложен способ ингибирования роста культур патогенных штаммовпутем добавления в питательную среду 1617420,5 2 до концентрации 10-3-10-2 , при этом культивирование осуществляют при 37 С в течение 24 ч. Химическое соединение с общей формулой 1617420,5 2 является красителем - метиленовый зеленый (основной зеленый 5). Использование 1617420,5 2 путем добавления в питательную среду позволяет затормозить размножение клеток патогенных штаммов псевдомонад и резко снизить урожай их биомассы. Пример 1 Суспензию клеток - 100 млн. микробных тел в 60 мкл культуральной жидкости - патогенного штамма псевдомонад 23/2 гоб 2 высевают в каждую из двух пробирок ( 1 и 2) с 10 мл мясо-пептонного бульона. В пробирку 1 вносят асептически водный прокипяченный раствор метиленового зеленого в концентрации 10-3 , а в пробирку 2 (контроль) - такой же объем стерильной дистиллированной воды. Закрывают пробирки ватномарлевыми пробками. Обе пробирки инкубируют в термостате при 37 С в течение 24 ч. Затем тщательно перемешивают содержимое пробирок, взвесь клеток центрифугируют 15 мин при 4000 об/мин, супернатант сливают, а осадок суспендируют в 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и измеряют величину абсорбции взвеси при 600 нм на спектрофотометре. Величина абсорбции (3) в пробирке 1 - 0 в контрольной пробирке 2 3,200,6 (что соответствует 10,67 млрд. микробных тел). Следовательно, рост патогенного штаммаподавлялся на 100 . Пример 2 Суспензию клеток - 100 млн. микробных тел в 60 мкл культуральной жидкости - патогенного штамма псевдомонад 74/5 гоб 3 высевают в каждую из двух пробирок ( 1 и 2) с 10 мл мясо-пептонного бульона. В пробирку 1 вносят асептически водный прокипяченный раствор метиленового зеленого в концентрации 10-2 , а в пробирку 2 (контроль) - такой же объем стерильной дистиллированной воды. Закрывают пробирки ватномарлевыми пробками. Обе пробирки инкубируют в термостате при 37 С в течение 24 ч. Затем тщательно перемешивают содержимое пробирок, взвесь клеток центрифугируют 15 мин при 4000 об/мин, супернатант сливают, а осадок суспендируют в 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и измеряют величину абсорбции взвеси при 600 нм на спектрофотометре. Величина абсорбции (3) в пробирке 1 - 0 в контрольной пробирке 2 3,520,56 (что соответствует 11,73 млрд. микробных тел). Следовательно, рост патогенного штаммаподавлялся на 100 . Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет полностью подавлять размножение клеток патогенных штаммов псевдомонад веществом, резистентность к которому у микроорганизма отсутствует. Данный способ может найти применение при создании эффективных средств антимикробного действия при борьбе с псевдомонадной инфекцией. Источники информации 1. Страчунский Л.С., Решедько Г.К., Стецюк У.О., Андреева А.С., Щебников А.Г., исследовательская группа РОСНЕТ. Сравнительная активность антисинегнойных антибио 2 14609 1 2011.08.30 тиков в отношении нозокомиальных штаммов, выделенных в отделениях реанимации и интенсивной терапии России // Клин. микробиол. и антимикробн. химиотерап. - 2003. - 5(1). - 35-46 (прототип). 2..,.,.,.// . . . - 2007. - 13. - 560578. 3.,,,. -, -// . . . - 2006. - 12. - 63-68. 4..,.,.,.12// . . . - 2001. - 39(6). - 2072-2078. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3